DUB信号通路

肝素是由己糖醛酸(Hexuronic acid,HexA)和葡萄糖胺(Glucosamine,GlcN)通过α-1,4糖苷键连接的二糖重复单元组成的高硫酸化线性异质多糖,在临床上作为抗凝血剂使用。由未分级肝素经过化学降解或酶法降解制备的低分子肝素(Low molecular weight heparins,LMWHs)具有生物利用度高、半衰期长及副作用小的优点,因此逐渐取代未分级肝素成为了最主要的临床抗凝血产品。近年来,随着全球人口老龄化、静脉血栓栓塞症(VTE)诊断例数迅速增加和新冠防治需求的增加,抗血栓药物需求呈明显上升趋势。作为FDA批准的唯一肝素来源,猪来源肝素原料的短缺或许会是现在或者将来要面临的主要问题。研究表明羊肠肝素在生物活性和结构方面与猪肠肝素较为相似,可能会有部分商家将羊肠肝素钠掺入到猪肠肝selleckchem素钠中,造成产品质量的不稳定,进而可能影响到患者的生命安全。目前对肝素类药物的来源鉴定主要体现在肝素原料和未分级肝素层面,其中比较广泛的方法就是利用实时荧光定量PCR来检测肝素中残留的核酸。但是由于低分子肝素在经过各种化学或者酶法降解制备、纯化等一系列操作步骤之后,其残留的核酸可能早已被破坏或者去除,因此开发一种新的用于区分猪和羊来源低分子肝素的分析方法至关重要。依诺肝素钠作为临床上最常用的低分子肝素类药物,在抗凝血和治疗血栓性疾病等方面发挥了重要的作用。本论文研究了猪和羊来源的依诺肝素钠还原端的结构差异,并建立了区分二者的可靠方法:通过亲水相互作用色谱-质谱连用技术(Hydrophilic interaction liquid chromatography-mass spectrometry,HILIC-MS)分析依诺肝素钠还原端的结构差异来实现肝素来源的评判。首先本研究以猪肠和羊肠来源的肝素作为原料,γ-aminobutyric acid (GABA) biosynthesis利用β-消除降解法制得依诺肝素钠,并对依诺肝素钠的分子量和1,6-内醚含量进行分析,其结果均符合美国药典(UnPF-6463922分子式ited States Pharmacopeia,USP)的相关规定。然后利用2-氨基吖啶酮(2-Aminoacridone,AMAC)标记依诺肝素钠的还原端,之后经肝素酶完全酶解,通过HILIC-MS来分析依诺肝素钠的还原端结构。本研究发现:经AMAC标记后,位于还原端的Δdp3(1S,1Ac)-AMAC和位于还原端的ΔIVS-AMAC在两种动物来源的依诺肝素钠样品中存在显著差异。最后,通过HILIC-MS/MS对特异性标志物Δdp3(1S,1Ac)-AMAC进行精细结构表征,并确定该标志物的结构为ΔIIAH-AMAC(ΔUA-GlcNAc6S-HexA-AMAC)。本研究开发了一种新的鉴定依诺肝素钠的物种来源的方法,在保障肝素类药物的真实性和安全性等方面具有重要意义。

为探究抗菌肽复合保鲜抑制剂对秘鲁鱿鱼加工过程中生物胺的抑制效果，评价其对秘鲁鱿鱼加工过程中品质的影响，该研究选取寻找更多牡蛎源抗菌肽（oyster antimicrobial peptide,OAP）、海蟹源抗菌肽（crab antimicrobial peptide,CAP）和带鱼源抗菌肽（hairtail antimicrobial peptide,HAP）进行单因素试验，分析3种水产蛋白抗菌肽对生物胺的抑制效果；通过正交优化试验调配出复合保鲜抑制剂的最佳浓度比；验证试验以挥发性盐Four medical treatises基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）值、菌落总数及多种生物胺含量为指标，评价其对秘鲁鱿鱼品质的影响。试验结果表明，3种水产蛋白抗菌肽均能有效抑制生物胺的生成。正交优化试验得到复合保鲜抑制剂的最佳浓度比为2∶3∶1，其对组胺的抑制率为74.39%。应用该selleck CL 318952复合保鲜抑制剂后，试验组生物胺含量均低于对照组，证明复合保鲜抑制剂可有效抑制生物胺的生成；第10天时试验组TVB-N值为17.87 mg/100 g，仅为对照组的47.85%，证明复合保鲜抑制剂对样品中TVB-N产生明显的抑制作用；第10天时复合保鲜抑制剂对菌落总数的抑制率达到33.02%。研究结果表明，抗菌肽复合保鲜抑制剂对生物胺的生成有抑制作用，有利于鱿鱼的品质控制。

目的 探讨手足综合征分级护理在乳腺癌化疗患者中的应用效果。方法 采取便利抽样法，选取武汉市某三级甲等医院乳腺外科行化疗的乳腺癌患者，按照入院时间将2022年4月—9月收治的55例患者纳入试验组，根据患者的手足综合征发生情况进行分级管理，将2021年10月—2022年3月收治的55例患者纳入对照组，予以化疗常规护理，两组干预措施均持续到最后1次化疗结束后3 d，比较两组最终化疗结束后3 d手足综合征发生情况Immune mediated inflammatory diseases及其对生活质量的影响。结果 试验组、对照组的手足综合征发生率分别为34.55%、58.18%，两组手足综合征发生率及发生等级差异均具有统计学意义（P<0.05）；试验组手足皮肤反应患者生活质量量表总分为15.00(13.00,17.00)分，对照组LY2157299体外为19.00(17.00,22.00)分，试验组的生活质量高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.001）。结论 实施手足综合征分级护理有利于降低Pexidartinib浓度乳腺癌化疗患者的手足综合征发生率，提高其生活质量。

研究背景:多发性硬化(Multiple selleck NMRsclerosis,MS)的发病机制仍不清楚,也缺乏有效的治疗药物。目前已证明活化的小胶质细胞(Microglia,MG)向促炎型(MG1)极化加重了炎性脱髓鞘损伤,向神经保护型(MG2)极化则可抑制炎症反应、促进髓鞘生成、减轻轴索损伤。AXL是受体酪氨酸激酶TAM家族的一员,研究发现AXL与其配体Gas6结合启动下游级联反应,调节小胶质细胞功能,但AXL对MS中小胶质细胞极化的调控尚未见相关报道。本课题前期研究发现AXL可作为免疫负调控因子在MS中发挥保护作用,且MG2型细胞比例在MS病程恢复期明显上调,提示AXL可能作为MS小胶质细胞极化的关键调控因子发挥作用。另高通量药物筛选是目前靶向药物开发中广泛应用的研究方法,具有研究周期短、操作简便、实用性强等优势。本课题拟探讨MS体内和体外模型中AXL的表达变化、AXL调控MG极化的分子机制并筛选靶向AXL的药物,为MS的机制探究和药物开发提供证据支持。研究目的:(1)明确AXL是否为MS病理生理过程中的关键免疫负调控因子;(2)探讨AXL能否在体内外调节小胶质细胞极化并明确其分子机制;(3)基于FDA药物库筛选靶向AXL并抑制EAE炎性脱髓鞘的药物,初步探究其作用机制。研究方法:第一部分明确AXL对MS小胶质细胞极化的影响。构建EAE模型小鼠,模拟MS急性期病程变化。使用DIA定量蛋白质组学技术检测EAE模型中的差异表达蛋白。基因水平观察EAE病程脊髓组织中AXL的动态表达水平;免疫荧光共定位脊髓组织中AXL与MG1/MG2表型的表达,同时体外观察BV2细胞不同极化状态下AXL的表达,并评估AXL对小胶质细胞极化表型的影响。CRISPR/Cas9技术构建AXL~(-/-)小鼠并诱导EAE,观察AXL基因敲除对EAE小鼠严重程度的影响。进一步使用DIA定量蛋白质组测序挖掘AXL敲除前后EAE模型小鼠脊髓中差异表达的下游信号分子。第二部分探讨AXL调控小胶质细胞极化的分子机制。在BV2细胞中使用慢病毒转染构建AXL过表达和敲减稳转株,体外观察AXL对BV2细胞中炎症因子表达的影响、MG1/MG2表型的影响、吞噬功能及细胞形态的影响,并验证蛋白质组学结果中AXL下游差异蛋白的表达,以及AXL通过调控关键蛋白对小胶质细胞极化的影响。体内探讨AXL对EAE模型脊髓组织中小胶质细胞极化的影响。构建AXL~(-/-)小鼠,观察AXL敲除对EAE小鼠神经炎症及脱髓鞘程度的影响、脊髓组织中小胶质细胞极化的影响以及脊髓中AXL下游差异蛋白表达的影响。提取EAE小鼠原代小胶质细胞,观察AXL对原代小胶质细胞极化的影响。使用AXLY294002生产商L特异性配体重组Gas6蛋白上调AXL表达,体内观察激活AXL对EAE小鼠疾病严重程度的影响。第三部分基于FDA药物库筛选上调AXL治疗MS的药物及疗效观察。质粒转染构建AXL-GFP荧光报告基因的BV2细胞药筛模型,使用高通量药物筛选,从FDA批准的2769种化合物库中筛选能够显著上调AXL并可维持BV2细胞活力的化合物,分别通过初筛、复筛、文献库比对,初步确定候选药物。将候选药物分子结构与AXL蛋白三级结构进行虚拟分子对接,根据其与AXL的结合能力,选择结合效果佳的化合物进行初步疗效观察。确定候选药物上调AXL并促进BV2细胞增殖的最佳干预浓度与时间,观察候选药物对BV2细胞炎症因子Ocular genetics表达、极化表型、吞噬功能及细胞形态、细胞周期、凋亡及线粒体形态和功能的影响。选择体外效果确切的两种候选药物进行体内初步疗效观察。根据体内干预结果最终确定疗效最显著的一种作为目标药物,探讨目标药物上调AXL并促进BV2细胞向MG2型极化的作用机制。在体内使用重组Gas6蛋白上调AXL表达,比较目标药物与Gas6改善EAE的效果,以及敲除AXL后目标药物对EAE小鼠疗效的影响。研究结果:第一部分AXL可促进体内外小胶质细胞向MG2型极化。EAE模型可经典模拟MS的炎性脱髓鞘病理特征。蛋白质组学结果显示,EAE模型中AXL具有显著差异表达。随着EAE病程进展,AXL表达逐渐升高,21天达峰后趋于平稳。荧光共定位结果显示,脊髓组织中AXL与MG2型标记物CD206表达趋势基本一致。体外研究表明,AXL在MG1型BV2细胞中表达降低,MG2型中表达升高,而且AXL可显著促进BV2细胞从促炎MG1型向神经保护MG2型转变。体内敲除AXL可明显加重EAE小鼠严重程度,细胞内信号传导抑制因子SOCS3及JAK2/STAT信号通路可能是EAE模型小鼠中AXL调控MG极化的关键信号蛋白。第二部分AXL可通过上调SOCS3抑制JAK2/STAT1信号通路,促进小胶质细胞MG2型极化,减轻EAE模型小鼠炎性脱髓鞘病变。体外研究结果表明,AXL可显著上调BV2细胞中的抑炎因子TGF-β、IL-10,下调促炎因子TNF-α、IL-1β的表达。AXL可促进BV2细胞和EAE模型小鼠脊髓组织中小胶质细胞向MG2型极化,并增强其吞噬功能。蛋白质组学的结果验证提示,AXL下游SOCS3、JAK2、STAT1具有显著差异表达,AXL可通过上调SOCS3抑制JAK2/STAT1信号减轻BV2细胞炎症反应。体内研究结果表明,敲除AXL明显加重了EAE小鼠神经炎症及脱髓鞘改变、抑制了EAE小鼠脊髓中小胶质细胞向MG2型极化,并通过抑制SOCS3激活JAK2/STAT1信号通路。AXL可显著促进EAE小鼠原代小胶质细胞向MG2型极化,体内使用Gas6蛋白激活AXL后明显减轻了EAE的临床症状评分、神经炎症及脱髓鞘。而AXL敲除可拮抗Gas6对EAE模型小鼠的保护作用。第三部分白桦脂醇(Betulin)是小胶质细胞中可显著上调AXL并发挥炎性负调控作用的化合物。初筛和复筛初步确定了3种化合物,分子对接排除了一种与AXL结合欠佳的药物,最终选取Betulin和Clofibric进行疗效观察。Betulin和Clofibric可促进BV2向MG2型极化和形态转变、抑制炎症反应、增强吞噬功能、延长S期、抑制凋亡、改善线粒体结构。体内研究结果表明,Betulin改善EAE的疗效优于Clofibric Acid。Betulin在1μM以内呈浓度依赖性促进BV2细胞MG2型极化、抑制促炎因子表达、促进抑炎因子表达、增强BV2细胞吞噬功能。并通过上调AXL/SOCS3抑制JAK2/STAT1信号通路发挥治疗作用。体内机制研究表明,Betulin可上调AXL促进小胶质细胞MG2型转化缓解EAE小鼠病情,AXL基因敲除可拮抗Betulin的上述保护作用。研究结论:(1)AXL是MS治疗中具的关键分子靶点;(2)AXL可通过上调SOCS3抑制JAK2/STAT1信号通路,促进小胶质细胞MG2型极化,减轻EAE模型小鼠炎性脱髓鞘损伤;(3)白桦脂醇(Betulin)可显著上调小胶质细胞中的AXL并改善EAE,是MS研究中具有前景的化合物。

为研究不同盐碱胁迫对蕨麻生长情况的影响，结合转录组进行测序分析，采用土培法对蕨麻进行不同梯度的NaCl、NaHCO_3胁迫处理，分析其株高、茎粗等形态指标对不同浓度盐碱胁迫的响应差异，结购买NN2211合Illumina高通量测序技术进行转录组测序，初步探究盐碱胁迫对其转录水平的影响。结果表明，盐碱胁迫下，蕨麻对盐的耐受能力强于碱，随着胁迫浓度的增高，蕨麻相关农艺性状呈先增加后降低的趋势，整体呈现出“低促高抑”的现象；MDA含量随胁迫浓度的增大呈先升后降的趋势，说明膜脂过氧化明显，且当胁迫浓度超过一定阈值，抗氧化和渗透调节系统均不能缓解其膜系统损伤；转录组测序共产生82.95 Gb Data,各样品Clean Data均达到8.41 Gb及以上，Q 30碱基百分比在93.17%及以上，通过DEGs分析，3个比较组(ck-vs-NaCl、ck-vs-NaHCO_3、NaCl-vs-NaHCO_3)分别筛选出1 616个、1 590个和1 770个DEGs; GO富集分析结果表明，盐应答、类黄酮生物合成过程、硝酸还原酶(NADPH)等GO Term被显著富集；KEGG分析表明，苯丙烷生物合成、黄酮类化合物生物合成、MAPK信号途径和植物激确认细节素信号转导等通路被显著富集；并且在DEGs中鉴定的ERF、MYB、NAC、WRKY、MYB和bZIP转录因子家族成员最多。蕨麻主要通过提高茎粗和减小小叶面积等方式来适应胁迫环境，整体呈现“低促高抑”的规律，其存在一定阈值。蕨麻通过调节膜成分、氧化还原酶活性、类黄酮生物合成过程、苯丙烷生物合成、MAPK信号途径和植物激素信号转导等生物过程和代谢途径，结合有关转录因子对其所处Translational biomarker盐碱环境进行响应。

【目的】本研究以体外培养的人肾近曲小管细胞(HK-2)为研究对象。首先,明确在高糖环境下HK-2细胞发生上皮间质转化(EMT),而人骨髓间充质干细胞(MSC)能够改善高糖下HK-2细胞EMT。其次,通过转录组测序分析,探索MSC影响细胞EMT的可能作用机制——铁死亡。最后,验证MSC是否通过干预铁死亡影响HK-2细胞EMT。【方法】1.MSC对高糖条件下肾小管上皮细胞EMT的影响在体外对HK-2细胞进行细胞处理后,将细胞随机分为4组:对照组(CON):5.6m M葡萄糖;甘露醇组(MN):5.6m M葡萄糖+24.4m M甘露醇;高糖组(HG):30m M葡萄糖;以及高糖+MSC组(HG+MSC):30m M葡萄糖+MSC。通过细胞增殖-毒性检测法(CCK-8)检测0h、24h、48h、72h及96h各组细胞增殖活力。采用免疫荧光共染检测各组细胞上皮细胞标志蛋白E-cadherin及间质细胞标志蛋白α-SMA水平。采用免疫印迹法检测各组细胞E-cadherin、α-SMA及内参蛋白β-actin水平。2.MSC影响肾小管上皮细胞EMT的可能作用机制将细胞随机分为3组:CON组、HG组、HG+MSC组。每组分别处理48h后收集细胞进行转录组测序。根据测序所得到的两组差异表达基因(HG组vs.CON组,HG组vs.MSC组),首先绘制Venn图取交集得到共表达差异基因,再利用基因聚类分析、GO富集分析、KEGG通路富集分析等生物信息学方法,对所获得的共表达差异基因进行功能注释及相关通路筛选。3.MSC通过干预铁死亡影响肾小管上皮细胞EMT3.1铁死亡对高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT的影响将细胞随机分为4组:CON组、HG组、Erastin组:5.6m M葡萄糖+10μM Erastin,以及HG+Fer-1组:30m M葡萄糖+80μM Fer-1。细胞干预处理后,采用细胞增殖-毒性检测法检测各组细胞增殖活力。采用DCFH-DA法及流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)水平。通过透射电镜观察各组细胞线粒体形态。通过相应试剂盒检测各组细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、脂质过氧化产物(Lipid peroxidation,LPO)、总铁离子、亚铁离子plant bioactivity、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)、还原型谷胱甘肽(Reduced glutathione,GSH)及氧化型谷胱甘肽(Oxydized glutathione,GSSG)水平。采用免疫荧光共染检测各组细胞E-cadherin、Vimentin及α-SMA水平。3.2 MSC通过干预铁死亡影响高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT将细胞随机分为5组:CON组、HG组、HG+MSC组、HG+Fer-1组、HG+MSC+Erastin组:30m M葡萄糖+MSC+10μM Erastin。细胞干预处理后,采用细胞增殖-毒性检测法检测各组细胞增殖活力。采用DCFH-DA法及流式细胞仪检测各组细胞内ROS水平。通过透射电镜观察各组细胞线粒体形态。通过相应试剂盒检测各组细胞MDA、LPO、总铁离子、亚铁离子、NADPH、GSH及GSSG水平。采用免疫荧光共染检测各组细胞E-cadherin、Vimentin及α-SMA水平。【结果】1.MSC改善高糖条件下肾小管上皮细胞EMT与CON组相比,HG组细胞增殖活力显著下降,E-cadherin水平明显降低,α-SMA水平明显升高;与HG组相比,HG+MSC组细胞增殖活力显著上升,E-cadherin水平明显升高,α-SMA水平明显降低。2.MSC影响细胞EMT的可能作用机制在HG组vs.CON组中,共筛选出1161个显著差异表达基因、富集到302条相关信号通路。在HG组vs.MSC组中,共筛选出1213个显著差异表达基因、富集到290条相关信号通路。通过Venn图对两组数据取交集,进一步关联分析得到480个共表达差异基因及274条共有显著性通路,其中包括铁死亡通路及相关基因。3.MSC通过干预铁死亡改善肾小管上皮细胞EMT3.1铁死亡参与高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT与CON组相比,HG组与Erastin组细胞增殖活力显著下降,细胞内ROS、脂质过氧化产物、总铁及亚铁离子、GSSG、Vimentin及α-SMA水平明显升高,部分线粒体嵴断裂并出现空泡化,NADPH、GSH、GSH/GSSG及E-cadherin水平明显降低;与HG组相比,HG+Fer-1组细胞增殖活力显著上升,细胞内ROS、脂质过氧化产物、总铁及亚铁离子、GSSG、Vimentin及α-SMAPF-07321332水平明显降低,大部分线粒体结构正常,NADPH、GSH、GSH/GSSG及E-cadherin水平明显升高。3.2 MSC抑制铁死亡缓解高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT与HG组相比,HG+MSC组与HG+Fer-1组细胞增殖活力显著上升,细胞内ROS、脂质过氧化产物、总铁及亚铁离子、GSSG水平明显降低,线粒体及线粒体嵴未见异常,NADPH及GSH水平明显升高;与HG+MSC组相比,HG+MSC+Erastin组细胞增殖活力显著下降,细胞内ROS、脂质过氧化产物、总铁及亚铁离子、GSSG水平明显升高,线粒体出现肿胀、线粒体嵴部分断裂,NA点击此处DPH及GSH水平明显降低。【结论】高糖条件能够刺激肾小管上皮细胞发生EMT,铁死亡参与了高糖条件下肾小管上皮细胞EMT,而MSC能够通过抑制铁死亡从而缓解肾小管上皮细胞EMT。

本文采用转录组测序技术和生物信息学分析的方法对高低产蛋鸡卵巢组织差异表selleck抑制剂达基因进行筛选，得到了调控产蛋量的潜在候选基因并对其生物学功能进行分析，探究其在卵巢及卵泡发育过程中的作用。本研究共以3只高产蛋鸡和3只低产蛋鸡卵巢组织为试验对象，以转录组测序技术分析2种蛋鸡卵巢组织中的基因表达情况，采用GO Term和KEGG Pathway方法对PORCN抑制剂筛选得到的差异表达基因进行功能分析。结果发现，在高低产蛋鸡卵巢组织样本中平均获得1.07×10~(8)个Clean Reads，其中比对到参考基因组上的Clean Reads约占93%。与低产蛋鸡卵巢组织相比，高产蛋鸡卵巢组织共有125个显著差异表达基因，其中101个基因显著上调和24个基因显著下调。GO Term分析发现，差异表达基因主要富集在生长、细胞组织成分、细胞组成部分或生物合成以及细胞外基质结构成分等过程；KEGG通路主要富集在焦Microlagae biorefinery点粘着、细胞外基质受体相互作用、转化生长因子-β信号通路等途径。对基因表达水平进行综合分析发现，高产蛋鸡卵巢组织中上调基因VCAN、VIPR2、DCN、COL6A2、COL6A1、RELN、FN1、ADAMTS1、COL3A1基因在卵泡细胞的细胞外基质形成和细胞连接过程中发挥作用，推测这些基因可能在蛋鸡卵巢发育及卵泡选择方面具有调控作用。本研究为分析产蛋后期高低产蛋鸡卵巢组织功能差异及卵泡发育机制提供了新的理论参考。

目的 探讨血小板联合心肌肌钙蛋白检测用于临床诊断冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）的价值。方法 选择2021年9月—2022年12月丰县人民医院收治的冠心病住院患者105例作为观察组，选择同期于本院进行体检的健康者105例作为对照组，分别进行血小板指标、心肌肌钙蛋白指标检测，记录检测结果，进行组间对比。另外计算血小板检测、心肌肌钙蛋白检测及二者联合检测诊断冠心病的准确率、灵敏度及特异性。结果 观察组红细胞分布宽度（red blood cell volume distribution width, RDW）、血小板计数（blood platelet, PLT）、平均血小板体积（mpvmeanplateletvolume, MPV）、红细胞计数（red blood cell, RBC）及平均红细胞体积（erythrocyte mean corpuscular volume, MCV）水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组肌红蛋白（myoglobin,MBiolistic deliveryb）、脑利尿钠肽（brainnatriureticpeptide,BNP）、超敏肌钙蛋白I(high-sensitivitycardiacselleck抑制剂troponin I, Hs-cTnI)及肌酸激酶同工酶（creatine kinase-MB, CK-MB）水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。血小板联合心肌肌钙蛋白检测冠心病的灵敏度、准确率分别为100%、98.selleck合成57%，均明显高于单一方法检测，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 临床诊断冠心病可通过血小板指标、心肌肌钙蛋白指标二者联合检测的方式，相比单一检测方式具有更高的灵敏度与准确率，且能够为后续疾病的治疗提供准确检验数值。

桑树在我国有5000多年栽培历史,桑叶除用于养蚕外,还可用于制作桑叶菜,桑叶茶,桑叶饲料,药物等。桑炭疽病是一种严重的真菌病害,可使桑叶发生枯斑或全叶枯黄,秋季在产区发病率可达40%左右,甚至有的病叶selleckchem MK-1775率接近100%,对桑树产业造成严重危害。培育和种植抗性优良的桑树品种,是防治桑炭疽病最经济有效的方法。目前桑树对炭疽病抗病机理研究较薄弱,针对这一现状,本研究对桑炭疽病病原学、抗病性评价、抗感品种响应桑炭疽病菌侵染的过程、转录组和代谢组的变化进行分析,从而揭示桑树对炭疽病的抗性机理,加快桑树抗病基因的挖掘和抗病品种的培育,主要结果如下:1.自2018年从湖北省各地采集的发病桑树叶片进行菌种分离纯化得到14株炭疽菌,通过致病性测定,形态学和分子生物学鉴定,发现其中7株为隐秘炭疽菌(Colletotrichum selleck合成aenigma),4株为果生炭疽菌(C.fructicola),3株为胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides)。隐秘炭疽菌菌株C1致病力最强,其次为胶孢炭疽菌,果生炭疽菌不致病。试验发现隐秘炭疽菌为桑炭疽病原菌,且为主要致病菌。根据桑炭疽病严重度分分级,并且以发病率和病情指数表示测定结果,将其对11份桑树品种进行了抗病性评价,获得了1份高抗材料浙杂1号。6份中抗材料,包括69×851、丰驰桑、桑特优2号、山东2020、塘10、粤桑51号。3份中感材料,包括桂桑5号、桂桑6号、桂桑优12。1份高感材料,桂桑优62。2.使用光学显微镜和扫描电镜观察隐秘炭疽菌侵染高抗品种浙杂1号和高感品种桂桑优62叶片上的过程,结果表明隐秘炭疽菌侵染抗、感桑树品种过程并无太大差异。在接种6 h后分生孢子开始萌发,并在孢子顶端或侧部生出芽管;接种24 h后,芽管顶部尖端膨大形成了椭圆形或不规则状的附着胞,附着胞逐渐变黑,胞质变得粘稠;接种48 h和72 h后,菌丝在叶面上呈纵横交错的排列,随后发生分支,并逐渐呈网状排列,有些菌丝的尖端生成了次级分生孢子。通过扫描电镜观察,隐秘炭疽菌可以通过孢子萌发形成芽管或芽管伸长异化成菌丝后从叶片表面侵入寄主,也可以通过附着胞生成的侵染钉侵入叶片,共两种侵入宿主方式。3.转录组学测序结果表明,接种桑树高抗和高感品种4个时期(0 h、24 h、48 h、96 h)共检测到25495个表达基因,桑树响应病原菌时期主要在接种处理后24 h,并且接种后各个比较组间基本表现出上调基因数目明显多于下调基因数目,表明桑树叶片更多的是通过基因的正调节来响应病原菌的侵染。抗感材料的差异表达基因涉及的主要信号通路为“植物与病原菌互作”、“类黄酮的生物合成”、“半萜类和三萜类生物合成”、“MAPK信号通路”、“植物激素信号转导”和“苯丙烷生物合成”等。本试验挑选了包括PR1、WRKY33、ZAT11、kiwellin、CNGC、JRL3、CHS、PAL、CYP73A和未鉴定蛋白共10个差异表达基因,进行q RT-PCR分析,结果发现与转录组测序结果趋势一致,说明转录组数据测序表达量可信。代谢组检测上述4个时间高抗和高感品种结果显示,获得865种代谢物,差异代谢途径主要涉及“苯丙烷化合物的生物合成”、“ABC运输工具”、“苯丙氨酸代谢”、“苯丙烷生物合成”和“类黄酮的生物合成”等。对转录组数据和代谢组数据进urine liquid biopsy行联合分析,发现“苯丙烷生物合成”和“类黄酮生物合成”代谢通路在桑树抗炭疽病过程中起重要作用。其中,代谢物苯丙氨酸、对香豆素基奎宁酸和无色花青素可能是桑树对隐秘炭疽菌侵染反应的重要代谢产物,PAL、COMT、4CL、CYP73A、CHS、FLS、DFR、LAR可能是其中起关键作用的基因。

目的:研究利伐沙班联合替格瑞洛对急性冠脉综合征(ACS)患者的影响。方法:于我院治疗的104例ACS患者被随机均分为氯吡格雷组(常规治疗基础上加用利伐沙班联合氯吡格雷)和替格瑞洛组(常规治疗基础上加用利伐沙班联合替格确认细节瑞洛),两组均治疗6个月。比较两组治疗前、治疗后血清内皮素(ET)-1、一氧化氮(NO)、生长分化因子(GDF)-15水平，LVEF,心脏指数(CI),冠脉微循环阻力系数(IMR)及主要amphiphilic biomaterials不良心血管事件(MACE)发生率、药物不良反应(ADR)发生率。结果:与氯吡格雷组比较，治疗后，替格瑞洛组血清ET-1 [(55.81±4.30)pg/ml比(53.76±3.95)pgY-27632抑制剂/ml]、GDF-15水平[(801.70±114.94)pmol/L比(738.68±107.29)pmol/L]、IMR [(19.06±2.71)比(17.78±2.10)]降低更显著，血清NO水平[(60.23±5.40)μmol/L比(63.49±6.30)μmol/L]、LVEF [(50.21±6.84)%比(53.75±7.02)%]、CI [(2.71±0.75)L·min~(-1)·m~(-2)比(3.06±0.71) L·min~(-1)·m~(-2)]升高更显著(P<0.05或<0.01)。替格瑞洛组MACE发生率显著低于氯吡格雷组(3.85%比15.38%,P=0.046);两组ADR发生率无显著差异(P=0.713)。结论:利伐沙班联合替格瑞洛可显著降低急性冠脉综合征患者血清GDF-15水平，改善内皮功能、冠脉微循环，安全性高。