DUB信号通路

目的 基于PTEN诱导假定激酶PR-171(PINK)1/帕金森病蛋白(Parkin)通路研究灵芝孢子对糖尿病肾病(DN)模型大鼠的肾脏细胞凋亡的影响。方法 32只SPF级雄性SD大鼠(180～200 g),随机分成正常对照(NC)组、高脂高糖(HF)组、DN模型(DN)组和灵芝孢子(GLSP)组。除NC组外，其余各组均采用高脂、高糖饲养，同时DN组和GLSP组均联合腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg)。GLSP组每日灌胃给予灵芝孢子[300 mg/(kg·d)]持续3个月，其余组均灌胃给予等量生理盐水[10 ml/(kg·d)]。每周测定各组空腹血糖。12 w后评估肾脏功能，用试剂盒检测尿素氮、血清肌酐、24 h尿蛋白等生化指标。苏木素-伊红(HE)、过碘酸希未反应(PAS)和Masson染色用于检查肾脏病理学。通过TUNEL法观察大鼠肾脏组织凋亡细胞的分布及凋亡率情况。通过免疫组化检Tibiocalcaneal arthrodesis测肾脏组织中P62、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。Western印迹检测PINK1/Parkin通路涉及的关键蛋白PINK1、Parkin及微管相关蛋白1轻链(LC)3、P62、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved)-Caspase3、Bax、Bcl-2表达水平。结果 与NC组相比，DN组尿中出现大量尿蛋白，血清肌酐及尿素氮水平明显升高(P<0.01),肾小体直径增大、肾小囊腔变小、肾小球内细胞数增多并有糖原累积、肾Belnacasan细胞培养小球内含有大量的胶原纤维，肾组织中PINK1、Parkin、LC3的蛋白表达显著降低、 P62表达显著升高，凋亡相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3表达明显升高，Bcl-2/Bax表达明显降低(P<0.01),肾脏凋亡荧光强度明显增加(P<0.01)。与DN组相比，GLSP组肾脏滤过功能明显改善(P<0.01),肾脏病理损伤缓解，肾小球体积有明显减小、肾组织胶原纤维覆盖面积明显降低、糖原明显减少；肾组织中PINK1、Parkin表达明显升高、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显增加，P62表达明显下降，且凋亡相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3表达明显下降，Bcl-2/Bax表达明显升高(P<0.01),肾脏凋亡荧光强度明显降低(P<0.01)。结论 灵芝孢子可能调控PINK1/Parkin途径，激活肾脏细胞自噬有关，抑制重要的促凋亡蛋白的表达，减轻高糖水平对肾脏的损害，抑制细胞凋亡。

目的 探讨个体化减压联合术肢康复运动在冠心病经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention, PCI)患者中的应用效果。方法 采用便利抽样法，选取江西省某三级甲等综合性医院skimmed milk powder心内科住院的经桡动脉入路行PCI治疗的冠心病患者360例，按所在selleckchem RepSox病区分为对照组和观察组，各180例。对照组给予常规术后减压，并引导患者完成伸肘屈肘、松握拳头等动作；观察组根据患者个体化情况调节止血器减压，并指导其进行术肢康复操运动，比较2组术肢疼痛、肿胀、焦虑和穿刺点出血情况。结果 观察组术后4 h和12 h疼痛程度均轻于对照组(Z=-2.096,P=0.036;Z=-3.791,P<0.001);术后1 h、4 h和12 h局部肿胀程度均轻于对照组(Z=-2.373,P=0.018;Z=-2.045,P=0.041;Z=-2.834,P=0.005);术后4 h和12 h焦虑得分均低于对照组(t=2.813,P=0.038;t=2.644,P=0.009);2组术后24 h内穿刺局部出血情况比较，差异无统计学意义(Z=-0.891,P=0.763)。结论 个体化的减压方法与肢体康复运动相结合，不仅能减轻患者Regorafenib化学结构疼痛和肿胀，还可改善患者的焦虑情绪，且不会增加出血的风险，值得临床推广应用。

目的 归纳抗Mi-2抗体阳性特发性炎性肌病(IIM)患者临床及骨骼肌病理特点。方法 收集获悉更多2019年1月1日—2022年2月28日在解放军总医院第一医学中心诊治的7例抗Mi-2抗体阳性IIM患SB203580浓度者的临床资料进行回顾性分析，并结合国内外文献复习。结果 7例以近端肌无力更多见，可伴吞咽困难，易伴发肌痛、关节痛和肌萎缩。4例出现较重皮疹。伴发间质性肺炎(ILD)较少，可伴发恶性肿瘤或Medical honey甲状腺功能减退/疫苗接种史等。骨骼肌病理可见炎性肌病的病理改变，符合束周免疫肌病(IMPP)的特点。免疫组织化学染色见人类主要组织相容性复合体MHC-Ⅰ肌内衣表达阳性和抗黏液病毒A蛋白(MxA)束周肌纤维膜和肌浆阳性表达。7例患者使用糖皮质激素和免疫抑制剂联合治疗后3个月，患者情况均较前好转。结论 抗Mi-2抗体阳性IIM患者临床表型多见皮肌炎(DM)经典皮疹、肌痛、肌无力等。肌肉活检可见IMPP,伴ILD较少，可伴免疫性疾病。类固醇联合免疫抑制剂反应较好。

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白下调DKK4的机制及对肝癌细胞系增殖和迁移能力的影响。方法 将编码乙型肝炎病毒X蛋白的腺病毒(Ad-HBx)分别感染肝癌细胞系HepG2和SMMC7721细胞，同时设感染GFP腺病毒(Ad-GFP)为对照组，用去乙酰化酶抑制剂(TSA)处理肝癌细胞系，并用小干扰RNA-组蛋白去乙酰化酶1(si-HDAC1)及过表达DKK4的慢病毒转染肝癌细胞系。Western blot检测DKK4、HDAC1及SIRT1的表达情况。MTT实验、结晶Bucladesine紫实验和Transwell实验分别检测肝癌细胞系的增殖和迁移能力。结果 Ad-HBx感染肝癌细胞系后DKK4蛋白表达水平下降(P<0.05)，TSA处理后DKK4蛋白表达水平回复(P<0.05)。Ad-HBx感染CL 318952细胞培养肝癌细胞系后，HDAC1及SIRT1蛋白水平显著升高(P<0.05)。小干扰RNA沉默HDAC1后能够恢复DKK4的表达(P<0.05)，沉默HDAC1和(或)过表达DKK均能抑制肝癌细胞系的增殖和迁移能力(P<0.05)。结论 乙型肝炎病毒X蛋白通过上调HDAC1、SIRT1来抑制DKK4的表达，沉默HDAC1及过表达DKK4蛋白表达能够抑制感染Ad-HBx肝癌细nutritional immunity胞系的增殖和迁移能力。

目的探讨真武汤通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对扩张型心肌病（DCM）小鼠心功能、心肌细胞自噬的影响及其机制。方法将C57BL/6J小鼠10只作为正常组(A)，cTnTＲ141W转基因扩张型心肌病小鼠30只，按照体重随机分为cTnTR141W转基因扩张型心肌病组(B)，真武汤组(C)、卡托普利组(D)，每组10只。实验用心脏超声检测各组小鼠心脏左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)、左室短轴缩短率(FS)、左室射血分数（LVEF）的变化；光学显微镜观察心肌细胞形态及排列；RTFQ-PCR检测ATG3、ATG7，Westernblot检测自噬相关蛋白P62、凋亡蛋白BCL2与AMPKα、mTOR、ULK1、TCS2表达及其磷酸化水平。结果cTnT~(R141W)转基因扩张型心肌病小鼠，显微镜下心肌纤维排列紊乱，胶原纤维含量明显增多，真武汤干预后可见细胞排列渐规整、心肌纤维化减少，超声测量cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠心室扩大，心室射血分数及短轴缩短获悉更多率较正常组明显降低，真武汤和卡托普利治疗后心脏超声提示左室舒张末、收缩末容积明显减小，射血分数明显增加。荧光定量PCR2-△△Ct值比较发现，扩心病小鼠ATG3和ATG7表达增加，经过真武汤治疗后进一步上调ATG3和ATG7表达。Westernblot结果中，与正常组比较，cTnT~(R141W)扩心病小鼠AMPKα、p-AMPKα、P62、p-ULK1表达上调，mTOR、p-mTOR、Bcl2、ULK1、TCS2、p-TCS2表达下调，相较于cTnT~(R141W)转基因扩张型心肌病组，真武汤干预后明显上调pHepatic lineage-AMPKα、Bcl2、蛋白表达，下调AMPKα、p-mTOselleck VX-765R、P62、p-ULK1、P-TCS2蛋白表达。结论真武汤通过温阳利水之功效治疗扩张型心肌病小鼠，可明显减少心肌纤维化，改善心脏功能，其机制可能与真武汤调控AMPKα/mTOR通路增加细胞自噬有关，此外真武汤的治疗还上调ATG3、ATG7表达和Bcl2蛋白表达，下调了P62、p-ULK1、p-TCS2蛋白表达，双向调控自噬的发生，不过度自噬，稳定细胞内阴阳平衡。

杉木(Cunninghamia lanceolata)是中国特有的树种之一,具有重要的应用价值和药用价值。炭疽病是杉木上最常见、最严重的病害之一,目前杉木炭疽病的防治措施主要是化学防治为主和营林防治为辅。近些年,有机小分子杀菌剂得到快速的发展,科学家们通过不同的方法合成了各种类型的化合E-616452试剂物并进行研究,以便快速寻找到医用或农用的高效、低毒、环境友好的先导化合物。然而,针对杉木炭疽病开发的小分子化合物少之又少。α-二羰基类化合物是许多天然产物和药物的核心骨架,已广泛应用于农药和医药等领域,如用于抗菌、抗病毒、杀虫、除草、抗炎、抗癌和抗HIV等。本文主要围绕α-二羰基化合物合成及其衍生化,利用核磁、单晶、质谱等分析测试手段对化合物的结构进行了鉴定和表征,并对合成化合物的抗杉木炭疽菌活性进行了初步研究。全文筛选发现了三种类型共53个有效化合物,包括6个具有新骨架的甲基环戊烯醇酮(MCP)类化合物、21个炔基砜类化合物、26个α,α-二卤代酮类化合物,并对其中29个活性较好的化合物进行了抑菌率的计算和研究。研究发现6个α,α-二卤代酮类化合物在浓度为50μg/m L时,抑菌率可达100%。全文主要设计合成了含硫醚和砜基的MCP类α-二羰基类化合物、α-酮酰胺类化合物以及以茚满二酮为原料合成苄氰基的邻甲酸酯类化合物,并对合成化合物进行了抗杉木炭疽菌生物活性的研究,可分为以下几个部分:(1)建立了一种新颖、高效的α-二羰基类化合物的合成方法。以可再生植物提取物MCP为原料,以三氟乙酸酐为催化剂、二氯乙烷为溶剂,与亚砜进行反应,制备了一系列二取代α-二羰基类化合物。该方法不仅为传统制备方法提供一种新方案,而且具有产率高,底物适用性广等优点,解决了前期制备方法需使用昂贵的过渡金属催化剂、较高的反应温度以及复杂的操作步骤等问题。(2)建立了一种新颖、高效的多取代α-二羰基类化合物的合成方法。以可再生植物提取物MCP为原料,在三氟乙酸酐为催化剂和二氯乙烷为溶剂的条件下,连续的与亚砜进行反应,制备了一系列多取代的α-二羰基类类化合物,该反应具有条件温和、无金属催化、操作简单、底物范围广泛等优点,为天然产物的修饰和改造提供有力的理论支撑。(3)建立了一种绿色环保、简单高效的电化学条件下炔基砜类化合物的合成新方法。以可再生植物提取物MCP和简单炔烃为基础原料,与亚磺酸钠在电化学的条件下进行反应,制备了一系列炔基砜类化合物。优化出较为适宜的条件,即室温下,电解质为碘化钾(1.0 equiv),电解液为乙腈/水(10 m L/0.1 Ml),电流为10 m A,恒流电解7 h,以92%的分离产率得到预期产物3.3aa,研究了底物范围,并深入研究了反应机理。该方法具有室温反应、无金属催化、无需后处理、底物范围广等优点。(4)研究了茚满二酮经肟酯化与醇类化合物高效合成2-(氰甲基)苯甲酸酯类化合物的新方法。优化了最佳反应条件,即在室温下以二乙胺为碱,在0.1 M的乙醇中反应24h,以90%的分离产率得到预期产物4.3aa。此方法适用于各种天然醇类化合物,包括肉桂醇、胡椒醇、糠醇,及植物精油类醇如香茅醇、四氢香叶醇、香叶醇、紫苏醇、橙花醇和枞醇,以及经过修饰后的胆甾烷醇,都可以顺利的转化为预期产物。此方法简单高效,只需加入碱,底物范围广,产率高,适合进行克级反应。后期研究发现该反应在电化学条件下可以避免使用碱,只需加入电解质就可顺利进行。(5)研究了α,α-二卤酮类化合物合成的新方法,为后续合成α-酮酰胺提供一种新策略。开发了一种在室温下炔烃与CHCl_3、CH_2Cl_2、Cl CH_2CH_2Cl和CH_2Br_2等作为卤源的电化学氧化二卤代反应方案。该方法操作简单,易于放大,室温条件下反应,避免使用常规的有毒卤化试剂等,利用这种环保的方法,可以将廉价易得的炔烃转化为各种有应用价值的α,α-二卤酮,同时为后期的功能化提供一种简洁的方案,具有较大的工业应用潜力。(6)建立了一种电化学方法由炔烃与胺合成2,3-二氨基吲哚BH4 tetrahydrobiopterin类化合物的新方法,以及进一PLX4032步吲哚开环制备α-酮酰胺的新方法。吲哚类化合物是一类非常重要的杂环化合物,其合成一直是一个热点和难点。该方法通过电化学条件下炔烃三氨化反应,可控地获得各种2,3-二氨基吲哚类化合物。该反应采用TEMPO作为氧化还原催化剂,室温条件下反应,避免了末端炔烃氧化剂、过渡金属和易爆试剂的使用。并在此基础上,以获得的2,3-二氨基吲哚类化合物为原料建立了一种合成α-酮酰胺类化合物的新方法,此方法操作简单、无金属催化、室温反应,拓展了酮酰胺的合成路径。(7)研究了所合成化合物的抗杉木炭疽菌的生物活性,发现三种类型共53个有活性化合物,并对其中的29个活性较好的化合物进行了抑菌率的计算和研究。相比之下,α,α-二卤代酮类化合物的抑菌活性最好,当化合物浓度为50μg/m L时,化合物5.3c、5.3f、5.3g、5.3h、5.3i、5.2i抑菌率可达100%,要明显好于相同浓度下的对照原药福美双(51.5%)和百菌清(39.5%)。其次是炔基砜类化合物,当化合物浓度为80μg/m L时,化合物3.3ae抑菌率可达71%,要明显好于相同浓度下的对照原药福美双(56.8%)。最后是α-二羰基类类化合物,当化合物浓度为250μg/m L时,化合物2.24抑菌率可达66%。以上工作可指导我们后续的研究,可通过引入不同的活性基团,来提高抑菌率,为未来新药的创制和研发奠定实验基础和理论依据。

目的 探讨北京市通州区艾滋病自愿咨询检测(voluntary counseling and testing, VCT)门诊人群人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染状况及其影响因素，为通州区艾滋病防控工作提供科学依据。方法 获取2018-2020年通州区VCT门诊求询者的一般资料、血液检测结果进行统计分析。结果 2018-2020年，通州区VCT门诊共检测2 198人，男女性别比为3.35∶1,以20～39岁(72.84%)、大专及以上(63geriatric emergency medicine.15%)的求询者为主。HIV抗体阳性率为8.14%,阳性者中高危行为以男男同性性行为为主(90.50%),且人数有逐年增加趋势，其阳性检出率MC3体内为14.34%(162/1 130)。Logistic多因素回归分析显示男性(OR=12.703,95%CI:1.636～98.643)、发生男男同性性行为(OR=3.436,95%CI:1.010～11.694)、初中及以下VP-16体内学历(OR=3.005,95%CI:1.877～4.811)是VCT门诊求询者感染HIV的影响因素。结论 初中及以下学历、男男同性性行为人群是通州区HIV感染的重点人群，应精准选择该人群进行艾滋病防治知识宣传以减少不安全性行为的发生。

目的:探究微小RNA(microRNA,miR)-155参与脑梗死的免疫发病机制。方法:通过栓线法构建脑梗死大鼠模型。将30只脑梗死大鼠随机均分为脑梗NSC125066死组和脑梗死+miR-155抑制剂组。另取15只假手术大鼠作为对照组。检测各组神经功能(mNSS评分)、梗死体积、神经元凋亡、炎症细胞因子水PLX5622平，分析脑组织血液中Th9细胞比例和白细胞介素(IL)-9的水平，以及T淋巴细胞中miR-155、转录因子PUprognosis biomarker.1和IRF4蛋白的表达水平。结果:脑梗死组mNSS评分、梗死体积、凋亡指数、IL-1β水平、IL-6水平、Th9细胞比例、IL-9水平、miR-155以及PU.1、IRF4蛋白的表达水平均显著高于对照组(均P<0.05)。脑梗死+miR-155抑制剂组mNSS评分、梗死体积、凋亡指数、IL-1β水平、IL-6水平、Th9细胞比例、IL-9水平、miR-155以及PU.1、IRF4蛋白的表达水平均显著低于脑梗死组(均P<0.05),但均显著高于对照组(均P<0.05)。结论:miR-155可能通过提高Th9细胞比例和IL-9的表达促进免疫炎症反应，从而导致神经元损伤参与脑梗死进展。

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯(DON)诱导仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)焦亡的分子机制。[方法]以500 ng·mL~(-1) DON和1μmol·mL~(-1) 4-苯基丁酸(4-PBA,内质网应激抑制剂)单一及联合染毒IPEC-J2细胞24 h。采用CCK-8测细胞存活率；倒置显微镜观察细胞生长状况；透射电镜观察细胞超微结构；Western blot和RT-qPCR测内质网应激通路和细胞焦亡关键分子的购买Ferrostatin-1基因相对表达水平和蛋above-ground biomass白相对表达水平；流式细胞仪测定活性氧(ROS)含量。[结果]与对照组相比，DON组细胞缝隙变宽、细胞密度降低、超微结构被破坏，ROS、丙二醛(MDA)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)含量极显著升高(P<0.01),葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网核信号转导蛋白1(IRE1)、转录激活因子6(ATF6)、诱导消皮素D (GSDMD)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)mRNA相对表达水平极显著升高(P<0.01),GRP78、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、ATF6、IRE1、GSDMD和Caspase-1蛋白相对表达水平极显著升高(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性极显著下降(P<0.01)。与DON组相比，DON和4-PBselleck NSC125066A联合处理组的细胞数量增多，细胞缝隙变小，细胞器形态正常，ROS、MDA、IL-1β、IL-18含量以及ATF6、Caspase-1的mRNA相对表达水平极显著下降(P<0.01),GSDMD、GRP78和IRE1的mRNA相对表达水平显著下降(P<0.05),GRP78、CHOP、ATF6、IRE1、GSDMD和Caspase-1的蛋白相对表达水平极显著降低(P<0.01),SOD、GSH-Px活性极显著上升(P<0.01)。[结论]DON可通过激活内质网应激通路诱导IPEC-J2细胞焦亡。

目的 探究阿托伐他汀钙片联合氨氯地平治疗高血压合并冠心病患者的临床疗效。方法 回顾性分析2021年1月至12月我院收治的108例高血压合并冠心病患者临床资料，根据治疗方案的SCH772984不同分为对照组和观察组各54例。对照组单用氨氯地平治疗，观察组采用阿托伐他汀钙片联合氨氯地平治疗，对比两组疗效、安全性，对比两组治疗前后血压、血脂、血管内biocontrol bacteria皮功能及炎性因子水平。结果 观察组治疗总有效率为96.30%，高于对照组的81.48%，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组治疗后的收缩压、舒张压水平均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组治疗后的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平均低于对照组，而高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平高于对照组，差异有统计学意Baf-A1说明书义（P<0.05）。观察组治疗后的内皮素-1(ET-1)水平低于对照组，而一氧化氮（NO）水平高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组治疗后的白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白（CRP）及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组不良反应总发生率为7.40%，与对照组的5.56%比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 对高血压合并冠心病患者使用阿托伐他汀钙片联合氨氯地平治疗可有效降压、调脂，改善血管内皮功能，减轻机体炎症反应，疗效确切且安全性高。