DUB信号通路

目的 探讨柔肝降酶方对肝纤维化大鼠的作用机制。方法 将大鼠分为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.2ultrasound in pain medicine mg/kg)和柔肝降酶方低、高剂量组(9.9、19.8 g/kg),每组10只，采用腹腔注射橄榄油CCl_4混合溶液(40%,3 mL/kg)制备肝纤维化大鼠获悉更多模型，灌胃给药6周后，检测血清ALT、AST水平，ELISA法检测血清TNF-α、IL-6水平，免疫组化法(IHC)检测肝组织α-SMA表达，Western blot法检测肝组织PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白(PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR)、自噬相关蛋白(P62、Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)、纤维化相关蛋白(α-SMA、Col-1)的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠血清ALT、AST、TNF-α、IL-6水平、肝组织α-SMA阳性细胞表达及α-SMA、Col-1、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达均升高(P<0.01),肝组织P62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较，柔肝降酶方各剂量组大鼠血清ALT、AST、TNF-α、IL-6水平、肝组织α-SMA阳性细胞表达及α-SMA、Col-1、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达降低(P<0.01),肝组织P62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论 柔肝降Etoposide半抑制浓度酶方可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制自噬，起到抗CCl_4诱导的大鼠肝纤维化作用。

目的 分析胃癌高发地区慢性萎缩性胃炎（CAG）病人血清幽门螺杆菌（Hp）抗体分型情况以及癌变风险的差异。方法纳入2019年12月至2021年1月合肥市第二人民医院就诊的168例CAG病人作为研究对象，采用蛋白质印迹法检测血清Hp抗体分型（Cag A、Vac V、Ure），分为Ⅰ型Hp组、Ⅱ型Hp组和阴性组；酶联免疫吸附测定（ELISA）检测胃黏膜功能[胃蛋白酶原（PG）Ⅰ、PGⅡ、胃蛋白酶原比值（PRG）、胃泌素17(G17)]，采用“改良ABC法”进行癌变风险分层，参考“木村-竹本”分类法对萎缩范围分级，根据萎缩部位和程度进行OLGA分期。结果 168例CAG病人中Ⅰ型Hp组83例，Ⅱ型Hp组39例，Hp阴性46例；单纯胃窦萎缩病人，I型Hp病人G17低于Ⅱ型和Hp阴性组[3.61(2.57,5.04)pmol/L比5.85(3.91,7.32)pmol/L,6.01(4.55,8.39)pmol/L,P<0.05]；胃窦+胃体萎缩病人，I型Hp病人PGⅠ[82.66(61.00,101.28)μg/L比100.27(66.59,124.28)μg/L,98.04(70.22,121.43)μg/L]、PRG[8.55(7.16,11.02)比10.13(8.94,12.31),10.71(9.08,13.16)]低于Ⅱ型和Hp阴性组（P<0.05）；三组“改良ABC”癌变风险分层差异有统计学意义（P<0.05），其中Ⅰ型Hp病人高危层占比最高，达33.74%；三组“木村-竹本”分类法“C型”和“O型”的比例差异无统计学意义[18.72%(15/83)比23.07%(9/39),13.04%(6/46),P>0.05]；三组OLGA分期差异有统计学意义（P<0.05）,I型Hp病人Ⅲ期SB203580体内和Ⅳ期共19例，占比最高（22.89%），但三组间对比显示，I型和Ⅱ型Hp病人间OLGA分组差异无统计学意义（P>0BLZ945.017）,I型Hp病人OLGA高危组占比高于Hp阴性病人（P<0.017）。结论 胃癌高发地区CAG病人以Ⅰ型Hp感染多见，不同分型Hp感染的CAG病人PG、PGR、G17水平存在差异，Ⅰ型Hp感染的CAG病medial entorhinal cortex人癌变风险相对较高。

为了制备兔抗双峰驼Toll样受体2(TLR2)的多克隆抗体并鉴定DS-3201细胞培养其活性，试验选择双峰驼TLR2基因序列，选取编码区，经软件分析预测该区域编码蛋白的主要氨基酸抗原位，选择对应的核苷酸序列进行基因合成，构建双峰驼TLR2重组质粒(pET28a-TLR2);通过原核表达系统诱导pET28a-TLR2表达，并优化异丙基-β-D-硫代半FG-4592化学结构乳糖苷(IPTG)表达条件；表达的蛋白溶解变性后，与Ni-NTA镍柱填料结合，经亲和层析法纯化，用纯化后的蛋白免疫新西兰白兔并制备多克隆抗体；利用SDS-PAGE鉴定蛋白表达和纯化情况，间接ELISA试验、Western blot检测及免疫组化验证并评价多克隆抗体的效价与反应性。结果表明：成功表达双峰驼TLR2重组蛋白，大小约为64 kDa,最佳诱导表达条件：IPTG浓度为0.4 mol/L、诱导时间为5 h,蛋白质以包涵体的形式表达；抗体效价为1∶256 000,能特异性识别目的蛋白；在双峰驼十二指肠肠系膜淋巴结和脾脏中，抗体能特异性识别双峰驼TLR2阳性细胞，细胞类型以单核/巨噬细胞为主，具有良好的特异反应性。说明成功制备的兔抗双峰驼TLR2多克隆抗体具有良好的特异反应性并能用Phenylpropanoid biosynthesis于TLR2的免疫组化检测。

目的 探讨血清总胆红素（TBIL）与尿酸（UA）检验在冠心病患者中的评估价值。方法 从2019年1月—2021年9月盐城市大丰中医院收治的冠心病患者中抽取80例为研究组，抽取同期80名健康体检志愿者为对照组。采集两组清晨空腹静脉血Pathologic processes样，以西门子ADVIA 1800全自动生化分析仪测定血清TBIL与UA，比较两组差异，评价两项指标单一及联合诊断冠心病的效能。另外，采用冠脉Gensini评分法评价研究组患者冠心病严重程度，观察不同病情严重程度患者血清TBIL与UA差异，分析TBIL与UA与冠心病Gensini评分的相关性。结果 研究组血清TBIL(13.67±3.57)μmoSB203580小鼠l/L低于对照组，UA(340.07±68.35)μmol/L高于对照组，差异有统计学意义（t=5.940、2.076,P<0.05）。血清TBIL与UA联合诊断冠心病的灵敏度为81.25%，高于TBIL与UA单一诊断；特异度为85.00%，低于TBIL与UA单一诊断。研究组不同Gensini评分患者血清TBIL与UA比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关分析示，TBIL与冠脉Gensini评S63845配制分呈负相关（r=-0.732,P=0.08）,UA与冠脉Gensini评分呈正相关（r=0.775,P=0.006）。结论 血清TBIL与UA可以为冠心病临床诊断提供有价值的实验室依据，联合应用可以进一步提高诊断灵敏度，亦可为临床评估冠心病严重程度提供参考。

目的:观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响，探讨电针抗脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组及抑制剂组，每组20只。除假手术组外，其他各组大鼠采用改良的Longa线栓法建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型。造模成功后，电针组大鼠于患侧“合谷”“尺泽”“足三里”“三阴交”给予电针干预1次，20 hepatitis and other GI infectionsmin;抑制剂组于造模前30 min经侧脑室注入Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK。观察各组大鼠神经功能缺损评分的变化，用TTC染色法观察病灶侧脑梗死情况，TUNEL染色法检测海马CA1区细胞凋亡指数，Western blot法检测海马Caspase-3蛋白表达，荧光定量PCR法检测海马Caspase-3 mRNA表达。结果:与假手术组比较，模型组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比、海马CA1区细胞凋亡指数、海马Caspase-3蛋白及mRNA表Navitoclax纯度达水平均明显升高(P<0.01)。与模型组比较，电针组、抑制剂组的神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比、海马CA1区细胞凋亡指数、海马Caspase-3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。结论:电针能对脑缺血再灌注损伤产生保护作用，其调控机制之一可能D-Lin-MC3-DMA试剂是电针刺激通过抑制Caspase-3表达，发挥其抗细胞凋亡作用，进而达到其抗脑缺血再灌注损伤的作用。

目的 观察帕立骨化醇（Pc）对维持性血液透析（MHD）患者全段甲状旁腺激素（iPTH）及冠状动脉钙化和左心室肥厚进展的影响。方法 纳入2020年8月1日至30日于首都医科大学附属北京安贞医院行MHD的西那卡塞治疗疗效不佳的难治性继发性甲状旁腺机能亢进症（SHPT）患者37例VE-822细胞培养，采用随机数字表法随机分为Pc组（18例）和Pc联合西那卡塞组（19例），在转化或加用Pc治疗后，观察血钙（Ca）、血磷（P）、碱性磷酸酶（ALP）、iPTH、冠状动脉钙化积分（CACs）和左心室重量指数（LVMI）的变化。结果 与基线相比，Pc治疗第3、6及12个月时Ca、iPTH和ALP均有显著变化，差异有统计学意义（P<0.05）;Pc治疗第3、6和12个月时血P与基线相比较差异均无统计学意义（P>0.05）。Pc组或Pc联合西那卡塞组治疗第3、6和12个月时ΔiPTH、ΔCa、ΔP和ΔALP差异无统计学意义（P>0.05）。所有患者在治疗12个月后，与基线相比较，CACs和LVMI均显著升高，差异有统计学意义（P<0.05），比较Pc组和Pc联合西那卡塞组患者ΔCACs和ΔLVMI差异无统计学意义（P>0.Medical countermeasures05）。结论 Pc可以有效控制MHD患者难治性SHPT，升高血钙、磷作用小，对于冠状动脉钙化和左心室肥厚进展的作用有Torin 1供应商待进一步验证。

目的 探讨白藜芦醇对肺癌细胞生长活性的抑制效应及可能的机制。方法 稳定培养肺癌细胞系H292，分别加入含10、20、40μmol·L~(-1)白藜芦醇的培养基进行干预，采用CCK-8PLX5622供应商、流式细胞术、细胞集落形成实验检测白芦藜醇对H292细胞生长活性的影响，采用免疫荧光、Western blotting检测白藜芦醇对Mirdametinib细胞培养细胞Akt/mTOR信号通路相关蛋白的影响。结果 （1） CCK-8检测结果显示，白藜芦醇对H292细胞增殖有明显抑制作用（P<0.05），且呈时间和剂量依赖性，同时对H292细胞周期有明显影响，能阻滞细胞周期于G2/M期。（2）白藜芦醇可明显抑制H292细胞集落形成（P<0.05），并呈剂量依赖性。（3） Western blotting检测结果显示，白藜芦醇以剂量依赖的方式诱导H292细胞中LC3-II的累积。免疫荧光检测发现，白藜芦醇可诱导细胞核和线粒体中GFP-LC3显著增加。（4）自噬抑制剂3-MA能有效减弱白藜芦醇对H292细胞活力的抑制作用，溶酶体tetrapyrrole biosynthesis酸化抑制剂Bafilomycin A1则可促进白藜芦醇导致的LC3-II累积。（5）白藜芦醇可下调H292细胞中p-Akt、p-P70S6K、p-mTOR蛋白的表达（P<0.05），而对Akt、P70S6K、mTOR蛋白的表达无明显影响（P>0.05）。结论 白藜芦醇可通过抑制Akt/mTOR信号通路抑制肺癌细胞的增殖。

目的:对机械通气病人多重耐药菌感染的危险因素进行系统评价。方法:计算机检索PubMed、EMbase、Web of Science、the Cochrane寻找更多 library、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网(CNKI)、万方数据库(WanFang Database)、维普数据库(VIP)中发表的机械通气病人多重耐药菌感染危险因素的相关文献，2名研究人员独立进行文献检索、筛选、质量评价与数据提取，并使用RevMan 5.4.1软件进行数据分析。结果:最终纳入15篇相关文献，涉及5 290例机械通气病人，其中多重耐药菌感染者1 463例。Meta分析结果显示，吸烟、合并慢性阻塞性肺疾病、血白蛋白<30 g/L、气管切开、多次气管插管、机械通气时间≥7 d、抗菌药物联用、使用碳青霉烯类抗菌药物及含β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物、抗菌药物使用时间≥7Colforsin d、糖皮质激素治疗>3 d是机械通气病人多重耐药菌感染的危险因素。结论:现有证据precision and translational medicine表明，吸烟、合并慢性阻塞性肺疾病、血白蛋白<30 g/L、械通气时间≥7 d、气管切开、多次气管插管、抗菌药物联用、使用碳青霉烯类抗菌药物及含β-内酰胺酶抑制剂抗生素、糖皮质激素治疗>3 d是机械通气病人多重耐药菌感染的危险因素。医务人员应针对以上危险因素进行精准干预，以降低机械通气病人多重耐药菌感染风险。

目的 分析与总结冠状动脉粥样硬化心脏病（以下简称“冠心病”）AM-2282供应商患者接受血脂六项检验的临床价值。方法 选取2020年1月—2021年1月天津市津南区小站医院收治的40例冠心病患者为观察组，另择取同期门诊40例健康体检者为对照组，两组患者均行血脂六项检查，包括总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、载脂蛋白（Apo）中ApoAI与ApoB的具体水平及阳性检出率，通过比较检测结果判断血脂六项检验的临床价值。结果 观察组患者TC、TG、LDL-C及ApoB水平均高于对照组，HDL-C、ApoAI水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；观察组TC、TG、LDL-C、HDL-C、ApoAI、ApoB阳性检出率均高于对照组Smoothened Agonist价格，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 冠心病患者血脂异常率明显增高，Biomass pyrolysis通过对TC、TG等指标的检测能够为临床治疗、预后效果评估提供更客观依据，可作为诊断疾病的特异性指标，值得临床推广应用。

目的 神经元中的肌酸激酶CKBB是维持细胞正常能量代谢平衡的关键调节蛋白，它对神经退变神经元内的氧化应激压力敏感且含量随病变发生而降低，但其蛋白水平改变的原因尚未阐明。方法 采用过氧化氢处理SH-SY5Y神经细胞，研究CKBB在氧化应激条件下的降解机制。使用MTT法对细胞活力进行检测，利用Hoechst33342染色细胞核表征细胞生存状态。使用Western blot法对CKBB的含量进行检测。分别使用自噬抑制剂Bafilomycin A1及蛋白酶体抑制剂MG-132处理细胞，验证CKBB具体降解途径。采用激光共聚焦显微镜检测胞内RFP-LC3,GFP-CKBB共定位情况。使用免疫沉淀法抓取CKBB蛋白，对泛素化修饰进行检测。结果 在过氧化氢处理下CKBB含量明显下降，使用自噬抑制剂及蛋白酶体抑制剂处理对CKBB的含量均有明显挽回作用。过氧化氢处理，促进CKBB与LC3共定位，并导致CKBB泛素化修饰Serratia symbiotica水平显著升高。点击此处结论 CKBB在过氧化氢处理的氧化应激条BLZ945件下，经由自噬及蛋白酶体两条途径发生蛋白降解。