DUB信号通路

目的:探讨甲基化转移酶样蛋白3(METTL3)对颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)巨噬细胞NLRP3炎性小体和焦亡的调控效应。方法:将16只雄性SD大鼠随机分为对照组和TMJOA模型组。采用H&E染色、阿利新蓝染色和番红固绿染色观察关节软骨组织关节炎情况，并进行Mankin’s和骨关节炎软骨损伤分级(OARSI)评分。采用脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导巨噬细胞RAW264.7以构建焦亡细胞模型，被转染METTL3过表达质粒和小干扰RNAs(siRNBMN 673As)。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测颞下颌关节滑液或RAW264.7细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)的活性；免疫印迹检测滑液巨噬细胞或RAW264.7中METTL3,NLRP3炎性小体和焦亡相关蛋白，IκBα和p65磷酸化水平。结果:在体内实验中，与对照组比较，TMJOA模型组大鼠出现关节软骨组织损伤，Mankin’s评分和OARSI评分升高；大鼠颞下颌关节滑液中T cell biology乳酸脱氢酶(LDH)活性增强；颞下颌关节滑液巨噬细胞中METTL3,NLRP3炎性小体和焦亡相关蛋白表达水平增加。在体外实验中，METTL3过表达显著协同LPS联合ATP诱导MDV3100 IC50的RAW264.7细胞NLRP3炎性小体形成和细胞焦亡，增强LDH活性，并激活IκBα和p65磷酸化；然而，通过转染siRNAs敲低METTL3表达能够显著抑制LPS联合ATP诱导的RAW264.7细胞NLRP3炎性小体形成和细胞焦亡，抑制LDH活性，减少IκBα和p65磷酸化水平。结论:METTL3沉默可通过拮抗NF-κB信号通路抑制NLRP3炎性小体和焦亡改善TMJOA软骨损伤。

[背景]氟可诱导心肌损伤。c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在细胞凋亡过程中具有重要作用，但该通路在氟中毒对心肌细胞损伤中的作用仍为未知。[目的]探究氟化钠（NaF）对大鼠心肌细胞H9c2的毒性作用，以及是否通过JNK信号通路影响心肌细胞凋亡。[方法]按照NaF浓度及是否加入SP600125(JNK抑制剂)，将大鼠心肌细胞分为对照组、SP600125组（SP组）、0.24 mmol·L~(-1) NaF组、0.48 mmol·L~(-1) NaF组、0.96 mmol·L~(-1) NaF组、0.96 mmol·L~(-1)NaF+SP600125组（NaF+SP组）。将NaF染毒24 h的大鼠H9c2心肌细胞于荧光倒置显微镜下观察细胞形态，对处理24、48、72 h后的细胞采用CCK-8法检测细胞活力变化，采用荧光探针法检测处理24 h后的H9c2心肌细胞中活性氧（ROS）水平，采用实时荧光定量PCR法检测处理24 h后细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、JNK mRNA表达水平，采用Western blotting方法检测处理24 h后细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、p-JNK蛋白genetics services表达情况。[结果]与对照组相比，0.48、0.96 mmol·L~(-1) NaF处理24 h后细胞生长密度减少，NaF浓度增加后出现变圆细胞，镜下出现部分悬浮死细胞，并且NaF染毒处理细胞24 h后，0.48、0.96 mmol·L~(-1)NaF组细胞活力低于对照组（P <0.05）,NaF处理细胞48、72 h后NaF各处理组的细胞活力均低于对照组（P <0.05）；与对照组CB-839体外相比，NaF染毒培养心肌细胞24 h后，细胞内ROS水平升高，Bcl-2 mRNA表达有不同水平的下降，特别是0.48和0.96 mmol·L~(-1)NaF组，Bax、Caspase-3及JNK mRNA表达水平明显增加，Bcl-2蛋白表达水平下降，Bax、Caspase-3、p-JNK蛋白表达水平升高（P <0.05）；与0.96 mmol·L~(-1) NaF组相比，NaF+SP组细胞活力增加，ROS水平降低，Bax、Caspase-3与JNK mRNAIpatasertib表达水平降低，Bcl-2蛋白表达明显升高，Bax、Caspase-3、p-JNK蛋白表达明显降低（P <0.05）,Bcl-2 mRNA表达有增加，但差异无统计学意义（P> 0.05）。[结论]过量氟暴露可诱导心肌细胞ROS产生增多，并可能激活JNK信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡，进而造成心肌细胞损伤。

随着乳腺肿瘤整形与乳房重建在国内新的临床应用趋势,更鉴于新的循证医学数据不断累积,中国抗癌协会乳腺癌专业委员会召集外科、整形、放疗、内科、病理等多学科专家,在《乳腺肿瘤整形与乳房重建专家共识(2018年版)》的基础上共同商讨制定了《乳腺肿瘤整形与乳房重建专家共识(2022年版)》,2022年版新增了腔镜乳房重建、胸肌前乳房重建及乳房重建的个案管理等内容,并将初版的保留乳头乳晕的全乳切除章节更名为保守性全乳切除,并做了大量内容补充及更新。共识也对胸肌前乳房重建、游离腹壁下动脉穿支皮瓣(deep inferior epigastriCrizotinib分子量c artery perforator flap,DIEP)手术等临床热点进行了详尽Symbiotic drink的阐述。相信本次更新会给各层级医院提selleck激酶抑制剂高乳腺肿瘤整形及乳房重建临床水平,提升治疗规范化,优化治疗结局助力,最终提高患者满意度。

【目的】探究猪精子体外获能前后顶体酶抑制剂(AI)表达量以及AI的泛素化水平的变化，了解AI与泛素-蛋白酶体系统(UPS)间的联系，为深入研究泛素-蛋白酶体途径(UPP)在猪精子获能过程中的作用提供参考。【方法】选择18～24月龄的成年健康长白公猪，使用手握法采集公猪精液，将一部分精子进行获能处理，一部分作为对照(鲜精),使用计算机辅chemogenetic silencing助精子分析系统(CASA)、低渗肿胀法(HOST)、考马斯亮蓝染色、Western blotting和锌离子(Zn~(2+))标记检测获能前后精子的动力学参数、质量参数、酪氨酸磷酸化水平和Zn~(2+)含量；Western blottiAntineoplastic and I抑制剂ng检测获能前后精子中AI和泛素(Ub)的表达量；免疫荧光法检测AI和Ub在精子中的定位；免疫共沉淀分析AI和Ub的结合情况。【结果】与新鲜精子相比，获能精子动力学参数VSL和BCF极显著升高(P<0.01),获能精子的活力、质膜完整性、顶体膜完整性、活率均极显著降低(P<0.01);获能精子蛋白酪氨酸磷酸化水平极显著升高(P<0.01),Zn~(2+)极显著外流(P<0.01)。Western blotting检测结果表明，与新鲜精子相比，获能精子AI表达量极显著降低(P<0.01),Ub表达量显著升高(P<0.05);免疫荧光结果表明，AI和Ub均定位于Fer-1精子头部顶体区域；免疫共沉淀分析结果显示，获能精子AI发生了泛素化，在抑制泛素激活酶(E1)后，泛素化的AI极显著减少(P<0.01)。【结论】在猪精子体外获能期间，精子蛋白酪氨酸磷酸化水平极显著提高、泛素化水平增强，且AI被降解，从而释放有活性的顶体酶，为后续精子穿透透明带(ZP)与卵母细胞结合完成受精做准备。

目的：探究西药联合温和灸对甲减模型大鼠免疫因子及钠/碘共转运体（NIS）干预作用的机制。方法：丙硫氧嘧啶（PTU）溶液灌胃造模成功后，西药及西药加温和灸组以左甲状腺素钠混悬液60μg/kg体重灌胃，每日一次；西药加温和灸组在大椎、命门、脾俞、肾俞施温和灸，每穴10 min，每日1次，每6日休息1日；连续4周。模型组与西药组同方式、同频率固定；空白Sulfonamides antibiotics组不做处理。ELISA法检测血清中促甲状腺激素（TSH）、总甲状腺激素（TT4）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素23(IL-23)的含量；免疫组化及R-T PCRPR-171法检测各组大鼠甲状腺组织中钠/碘共转运体（NIS）的含量及NISmRNA的表达量。结果：（1）与空白组比较，模型组大鼠血清中TSH、TPOAb、TGAb、IL-23含量上升，IL-4、TT4含量下降，甲状腺组织中NIS含量及NISmRNA表达量下降，差异有统计学意义（P<0.01）;(2)与模型组比较Canagliflozin抑制剂西药组及西药加温和灸组大鼠血清中TSH、TPOAb、TGAb、IL-23含量下降，IL-4、TT4含量上升；甲状腺组织中NIS含量及NISmRNA表达量上升，差异有统计学意义（P<0.01）;(3)与西药组相比西药加温和灸组大鼠甲状腺组织中NISmRNA表达量上升，差异有统计学意义（P<0.05）；结论：西药加温和灸可以通过降低TPOAb、TGAb、及IL-23的含量，升高IL-4的含量；增加NIS的含量及NISmRNA的表达量，干预甲减模型大鼠。

杀香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼(Larimichthys crocea)内脏白点病的主要致病菌，为制备能识别杀香鱼假单胞菌的特异性抗体，采用固相化抗原筛选方法，以杀香鱼假单胞medical cyber physical systems菌重组溶血素共调节蛋白为抗原，从兔天然噬菌体scFv文库中筛选出特异性的单链抗体(scFv);通过构建含有针对杀香鱼假单胞菌单链抗体(scFv)的重组质粒，对筛选出的scFv进行原核诱导表达。通过4轮淘选，共获得16株针对杀香鱼假单胞菌溶血素共调节蛋白的单链抗体(scFv),通过亲和力分析，最终筛选出7株特异性较高的单链抗体(scFv)进行原核表达；成功构建了含有抗杀香鱼假selleck产品单胞菌溶血素共调节单链抗体(sIACS-010759 IC50cFv)的重组质粒pET-30a-Hcp-scFv,转化到大肠杆菌表达菌株中，其中6个重组质粒可稳定表达，经过蛋白质可溶性分析和Western Blot鉴定，目的蛋白主要以包涵体的形式存在。研究结果为快速制备大量抗杀香鱼假单胞菌抗体提供了一种简便的方法，为今后大黄鱼内脏白点病的临床快速诊断奠定了基础。

【背景】MicroRNAs(miRNA)是一类小RNA分子（18—23nt），广泛参与了家畜乳腺发育和泌乳性能的调控。项目组前期在小尾寒羊上应用RNA-Seq研究发现，miR-221在空怀期乳腺组织中的表达量是泌乳期的3.6倍，但是尚不清楚miR-221对绵羊乳腺发育的调控机制。【目的】探讨miR-221是否通过靶向基因IRS1抑制绵羊乳腺上皮细胞的活力和增殖数量，为揭示miR-221对绵羊泌乳性能的分子调控机理提供理论参考。【方法】采集小尾寒羊乳腺、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、背最长肌和卵巢等8个组织样本，采用实时荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative PCR,RT-qPCR)技术，构建miR-221在绵羊8个组织中的表达谱。采用细胞转染、CCK-8和Edu等方法，研究miR-221对绵羊乳腺上皮细胞活力和增殖的影响。利用miRDB和miRanda数据库，预测miR-221的靶基因，结合功能富集分析，确定目标靶基因，构建靶基因的野生型和突变型载体，进而用双荧光素酶报告实验，验证miR-221与预测靶基因间的靶向关系。分析过表Bucladesine IC50达和沉默miR-221对靶基因及其信号通路下游功能基因的影响。【结果】RT-qPCR结果表明，miR-221在绵羊乳腺等8个组织中均表达，其中在肺脏和脾脏中的表达量最高，在背最长肌和肾脏中的表达量最低。CCK-8结果表明，miR-221模拟物抑制了绵羊乳腺上皮细胞的活力（P<0.01），而miR-221抑制剂提高了乳腺上皮细胞的活力（P<0.05）。Edu试验发现，miR-221模拟物减少了Edu标记的阳性乳腺上皮细胞数量（P<0.01），而miR-221抑制剂增加了Edu标记的阳性乳腺上皮细胞数量（P<0.01）。双荧光素酶报告实验结果表明，miR-221模拟物抑制了胰岛素受体底Family medical history物1(insulin receptor substrate 1, IRS1)基因3′UTR区域的双荧光素酶活性（P<0.01），而miR-221抑制剂提高了该基因的活性（P<0.05），表明IRS1是miR-221的一个靶基因。RT-qPCR结果进一步发现，过表达miR-221降低了绵羊乳腺上皮细AY-22989胞中IRS1和PIK3R1的表达量（P<0.05），沉默miR-221则提高了这2个基因的表达量（P<0.05）。过表达或沉默miR-221对乳腺上皮细胞中IGF1R的表达量没有显著影响（P>0.05）。【结论】miR-221通过抑制靶基因IRS1的表达量，最终抑制了绵羊乳腺上皮细胞的活力和增殖数量。

目的 分析乳腺癌患者中PRAS40mRNA表达量与其预后的相关性。方法 通过从TCGA数据库中下载PRAS40mRNA的表达矩阵进行分INCB28060析。受试者工作曲线(ROC曲线)被用来分析PRAS40mRNA表达量在乳腺癌患者中的诊断价值。使用卡方检验分析临床特征与PRAS40mRNA表达量之间的相关性。Cox回归分析PRAS40mRNA表达量与其预后的关系。结果 结果显示：乳腺癌组织PRAS40mRNA表达量较正常组织表达量高。PRAS40具有较强诊断价值。PRAS40mRNA表达量与T3/T4分期患者高于T1/T2分期(P<0.05);浸润性癌患者其表达水平高于浸润性小叶癌(P<0.01);病理分期StageⅠ/Ⅱ分期的患者相较于StageⅢ/Ⅳ期患者表达水平低(P<0.05)。但是不同N分期及M分期患者PRAS40mRNA表达水平无明显统计学差异。进一步多变量分析显示：PRAS40mR购买JQ1NA表达水平是乳腺癌患者的独立危险genetic conditions因素。结论 PRAS40mRNA是1个可靠的且具有预后价值的生物标记物。

目的：分析64排螺旋CT心肌灌注扫描冠心病缺血心肌的应用价值。方法：选取2020年11月—2021年1月山东大学附属威海市立医院收治的可逆性endothelial bioenergetics心肌缺血冠心病患者52例为研究组，以同时期的46名健康体检者为对照组，纳入对象均接受64排螺旋CT心肌灌注扫描，比较其静息及负荷状态下各扫描期点的心肌密度测量值。结果：对照组静息与负荷状态下各扫描期点的心肌密度测量值比较无显著差异（P> 0.05）；研究组静息状态下各扫描期点的心肌密度测量值显著高于负荷状态PLX5622使用方法下的测量值（P <0.05）；研究组静息灌注启动期、延迟10 s、20 s及负荷灌注启动期、延迟10 s、20 s、30 s的心肌密度测值均显著低于对照组（P <0.05），两组心脏平扫、静息下延迟30 s心肌密度测值比较差异无统计学意义（P> 0.05）。结论：经64排螺旋CT心肌灌注扫描可有效检测缺血心肌冠心病患者的灌注异常，继而为临床提供可靠的心肌循环血流信息，对冠心病缺血心肌患者的诊疗selleck Baricitinib有重要价值。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)是粮食作物中常见的污染毒素之一，建立相应的快速筛选方法尤为必要。基于抗原-抗体特异性反应，建立DON间接竞争ELISA方法genetic sweep。优化反应条件(抗原和抗体浓度、离子强度、pH值、有机溶剂),该方法检测限可达3.12 ng/mL。为进一步提高检测Transmembrane Transporters抑制剂灵敏度，以碳纳米管为载体，荷载酶标记二抗分子，构建通用型的多酶信号颗粒。建立多酶辅助信号放大的DON免疫分析方法，优化多酶颗粒浓度后，检测限可达0.63 ng/mL,比间接竞争ELISA方法灵敏度提高5倍。对大米、小麦和玉米进行加标试验，添加回收率在87.6selleckchem PLX40325%～114.50%间；在本地购买的谷物样本中DON最高检出浓度为147.64 ng/g,检出率为53.33%,该方法操作简单、快速、灵敏度高，可为谷物中真菌毒素污染提供有力的检测与监测手段。