DUB信号通路

重金属和抗生素是环境和食品中典型的污染物,重金属具有生物毒性、致癌致突变以及产生变态反应,抗生素会诱导细菌耐药性、人体菌群失调、药物过敏反应以及器官损伤。重金属的积累和抗生素的过度使用都对人类健康和生态系统造成严重威胁。因而,对食品中的重金属及抗生素进行分析检测是监控和保证食品质量安全的有效技术手段。许多国家已经制定了食品和环境中的最大残留限量,以防止人们受到这些化学污染物的侵害。目前,重金属和抗生素的检测主要通过大型仪器分析方法,重金属的检测常采用原子吸收光谱法、原子荧光光度法、电感耦合等离子体质谱等分析技术,抗生素残留检测常采用高效液相色谱法、气相色谱法、色谱-质谱联用等分析技术。这些传统的检测方法,虽然灵敏度高、重现性好,但是存在前处理复杂、仪器庞大、成本高、耗时长、需要专业技术人员操作等不足,在一定程度上限制了其实际应用。因此,发展简单、快速、可靠的检测化学有害物的技术对环境保护、食品安全和人类健康具有重要意义。近年来,随着生物技术的发展,功能核酸的特殊生物功能和灵活的空间结构有效提升了检测的特异性,已被用于构建各种生物分子识别探针,基于功能核酸的生物传感与分析技术在环境和食品样品化学有害物检测领域中的应用越来越广泛。同时,核酸等温扩增技术作为一种在恒温条件下对核酸分子的灵敏、快速扩增技术,具有操作简单、无需复杂的变温系统等优点,已被广泛应用于各种靶标物质的检测,并在许多研究领域发挥重要作用。本论文结合食品、环境中重金属及抗生素残留问题的实际现状,针对四种典型的靶标物质,基于功能核酸和核酸无酶等温扩增技术,利用具有优良光学性能的荧光染料或银纳米簇作为输出信号,构建了四个操作简便、成本低廉、灵敏度较好的荧光“signal on”型生物传感器,用以检测分析环境、食品中残留的重金点击此处属和抗生素,为建立和丰富环境、食品中有害物监测技术提供借鉴。研究内容主要包括:(1)基于T-Hg~(2+)-T纳米梯和荧光DNA模板银纳米簇/氧化石墨烯纳米复合材料(DNA-Ag NCs/GO)构建了一种无酶无标记的汞离子生物传感器。以P1-C_6G_5C_6为模板合成荧光银纳米团簇,所得到的P1-C_non-oxidative ethanol biotransformation6G_5C_6-Ag NCs在570 nm处被激发,并在625 nm处发出强烈的荧光。富T序列(P1和P2)用来捕获Hg~(2+)并形成T-Hg~(2+)-T纳米梯。在汞离子存在的情况下,T-Hg~(2+)-T特异性识别介导P1和P2之间形成纳米梯,银纳米簇的荧光强度显著增强。在汞离子不存在的情况下,未杂交的P1-C_6G_5C_6-Ag NCs和P2通过氢键和π-π堆积作用吸附到氧化石墨烯表面的芳香环和疏水环上,氧化石墨烯作为能量受体,通过长程共振能量转移使能量供体Ag NCs的荧光猝灭,荧光背景降低。汞离子诱导的荧光增强能够实现对汞离子的定量检测,线性范围为0.1～30 n M,检出限低至7.35 p M。将该方法成功用于松花江水和草鱼加标样品中汞离子的检测,加标回收率分别为97.61%～103.79%和96.52%～105.58%,与原子荧光光谱法检测结果一致。本方法巧妙地设计核酸序列,将信号识别和无酶信号放大结合起来,实现了对汞离子的无标记“signal on”荧光检测。(2)基于8-17 DNAzyme诱导催化发夹自组装(Catalytic hairpin assembly,CHA)无酶等温扩增,建立了一种简单的用于铅离子检测的荧光“signal on”型传感策略。8-17 DNAzyme作为Pb~(2+)的特异性识别元件,在Pb~(2+)存在下酶链催化嵌入r A碱基的DNA底物裂解,同时释放部分底物链(S’)作为CHA引发剂。根据CHA的S’序列设计了两个发夹探针(H1和H2-FQ),其中H2-FQ用荧光团FAM和猝灭剂BHQ-1标记为基于荧光共振能量转移(F(?)rster resonance energy transfer,FRET)的荧光“分子开关”。S’可以与H1的环杂交,打开H1的发夹结构,将H1的茎序列暴露在溶液中,进一步打开发夹H2-FQ,使FAM远离BHQ-1,降低它们之间的FRET效率,从而实现“signal on”荧光策略。同时,由于双链H1/H2-FQ与S’/H1复合物相比更稳定,因此S’从H1中置换出来。置换后的S’可启动新的CHA循环,形成大量H1-H2复合物,实现无酶等温扩增。该扩增方法的线性范围为0.5～1000 n M,检出限为0.5 n M,与FQ-labeled 8-17 DNAzyme方法相比具有更好的检测性能。所建立的生物传感器具有良好的特异性,可有效用于河水、草鱼等真实加标样品中Pb~(2+)的检测。DNAzyme和CHA巧妙结合核酸序列设计,实现了无酶等温扩增和铅离子的灵敏检测,在食品监管和环境监测方面具有潜在的通用性。(3)基于toehold介导的三向催化发夹组装,结合FAM和氧化石墨烯之间的荧光共振能量转移,开发了一种无酶扩增荧光策略,用于灵敏检测卡那霉素。三个具有FAM荧光团的亚稳态发夹DNA探针被设计为组装组件来构建传感系统。通过适配体与卡那霉素的特异性结合,在辅助DNA(HD)的帮助下诱导发夹介导的链位移。通过CHA反应获得无酶信号放大,打开发夹并循环HD。形成含有DNA双螺旋的刚性DNA三角形,未反应的发夹的粘性末端将通过非共价疏水和π-π堆积紧密吸附在GO表面上以猝灭荧光信号。从而产生“signal-on”型荧光信号,实现卡那霉www.selleck.cn/products/valemetostat-ds-3201素的定量检测。该策略对卡那霉素具有良好的灵敏度和选择性,检出限为1 n M,已成功应用于加标牛奶样品的检测。所提出的适配体传感器操作简单方便,只需在室温下混合几种溶液即可直接检测,无需复杂的仪器,为食品安全分析中卡那霉素的监测提供了新途径。(4)基于杂交链式反应(Hybridization chain reaction,HCR)和荧光协同作用,制备了一种新型妥布霉素适配体传感器。妥布霉素存在时,能够与c DNA-FAM竞争结合固定在磁珠上的适配体,磁性分离后释放的c DNA-FAM作为引发子触发HCR扩增,由于SYBR GreenⅠ(SGⅠ)嵌入到形成的长双链DNA中,并与FAM产生荧光协同效应,使得荧光显著增强。在没有妥布霉素的情况下,引发子c DNA与适配体杂交互补而被分离,无法触发HCR,更重要的是氧化石墨烯可以猝灭过量发夹中的FAM及SGI的荧光,因此几乎没有检测到背景信号。该适配体传感器可以监测0.3～50μM范围内的妥布霉素,检测限为17.37 n M。由于结构转换适配体的潜在通用性和荧光协同作用的有效性,这种无酶扩增策略可以通过核酸序列的合理设计扩展到检测其他目标物的应用。

该研究基于氨基化磁珠静电富集细菌技术，建立了一种可同时富selleckchem PD0325901集鼠伤寒沙门氏菌,金黄色葡萄球菌，单增李斯特氏菌的方法。在每2 mL单菌液中（10~3 CFU/mL）分别加入5～200μg的3种粒径的氨基化磁珠（1μm、300 nm、100 nm），当孵育5～90 min时检测各细菌的富集效率。将单菌液体系的富集正交试验结果应用至混和菌体系的单因素试验和正交试验，将最终结果应用至大体积实验体系以及实际样本（市售牛奶、水果沙拉）。结果表明，当氨基化磁珠添加量为50μg、孵育时间为30 min时对3种病原菌可以达到60%以上的捕获BI 10773率，所有反应均在pH值7.4的PBS中进行。磁珠粒径选择300 Next Gen Sequencingnm(p<0.05)。在实际样本牛奶、水果沙拉中，当三种混合菌的最低终浓度为2×10~2 CFU/g(mL)时，捕获率高于55%，结果可达到荧光定量PCR的检测低限。氨基化磁珠与免疫磁珠比较，其具有稳定保存、低成本，高效率等优势，其非靶向富集的能力为下游食源性致病菌的快速检测提供有效前处理富集手段。

目的:观察艾灸督脉穴对APP/PS1双转基因小鼠自噬溶酶体功能及长链非编码RNA H19(lncRNA H19)的影响，探讨艾灸治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:6月龄健康雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、艾灸组、艾灸+抑制剂组和雷帕霉素组，每组13只，同时选取13只6月龄健康雄性C57BL/6J小鼠作为对照组。艾灸组予隔附子饼灸Antineoplastic and I抑制剂“百会”及悬灸“大椎”“风府”,15 min/d;艾灸+抑制剂组在艾灸组基础上给予腹腔注射3-甲基腺嘌呤1.5 mg·kg~(-1)·d~(-1);雷帕霉素组仅腹腔注射雷帕霉素2 mg·kg~(-1)·d~(-1)。以上各组均每日干预1次，共2周。以Morris水迷宫实验检测干预前后小鼠学习记忆能力；透射电镜观察小鼠海马组织自噬体形成；免疫组织化学法检测小鼠海马区β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)蛋白表达；荧光定量PCR法检测小鼠海马组织lncRNA H19、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、转录因子EB(TFEB)、溶酶体水解酶Cathepsin D、溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)mRNA的表达；Western bloCSF-1R抑制剂t法检测小鼠海马组织mTOR、TFEB、Cathepsin D、LAMP1、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、p62蛋白表达。结果:治疗前，与正常组比较，模型组、艾灸组、艾灸+抑制剂组和雷帕霉素组Molecular genetic analysis逃避潜伏期延长(P<0.05)。治疗后，与正常组比较，模型组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.05);海马神经元细胞质内自噬泡减少，自噬溶酶体结构破坏；Aβ_(1-42)蛋白表达、lncRNA H19表达、mTOR mRNA和蛋白表达、p62蛋白表达均升高(P<0.05),TFEB、Cathepsin D、LAMP1 mRNA和蛋白表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均降低(P<0.05)。与模型组和艾灸+抑制剂组比较，艾灸组和雷帕霉素组逃避潜伏期缩短(P<0.05);海马神经元细胞质内自噬泡较多，自噬溶酶体结构清晰完整；Aβ_(1-42)蛋白表达、lncRNA H19表达、mTOR mRNA和蛋白表达、p62蛋白表达均降低(P<0.05),TFEB、Cathepsin D、LAMP1 mRNA和蛋白表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均升高(P<0.05)。结论:艾灸督脉可能通过下调lncRNA H19表达抑制mTOR/TFEB通路，改善AD小鼠自噬溶酶体功能，恢复自噬流，促进细胞自噬清除脑内Aβ,进而改善认知功能。

目的 探讨凝血4项指标及肿瘤标志物联合诊断乙型肝炎相关肝癌的效果。方法 选取2019年1月至2021年1月福建省肿瘤医院收治的40例乙型肝炎相关肝癌患者作为试验组，另选取同期40例乙型肝炎肝硬化患者作为对照组，均行凝血4项指标及肿瘤标志物检查，比较两组凝血4项指标及肿瘤标志物水平，并明确其诊断价lipopeptide biosurfactant值。结果 试验组活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)水平与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05);试验组凝血酶原时间(PT)高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);试验组甲胎蛋白(AFP)、岩藻糖苷酶(AFU)水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线，显示单项检测PT指标、肿瘤标志物检测及联合检测对乙型肝炎相关肝癌的曲线下面积(AUC)均>0.7,预测价值中等，其中联合检测的价值更为显著。结论 凝血4项指标及肿瘤标志物在诊断乙型肝炎相关肝癌方面均Baricitinib说明书有一定的价值，联合检测对乙型肝炎相关肝癌患者的早www.selleck.cn/products/q-vd-oph期诊断价值较高。

目的 分析冠心病经皮NN2211价格冠状动脉介入治疗（PCI）术后Ⅱ期心脏康复患者的自我管理行为现状及其影响因素。方法选取2019年1月至2021年12月于我院完成冠心病PCI术且进入Ⅱ期心脏康复的216例患者作为研究对象。调查患者人口学资料，评估自我管理行为、健康知识掌握及健康素养，分析ZD1839半抑制浓度自我管理行为的影响因素。结果 患者的自我管理行为和健康素养评分均处于中等水平，健康知识掌握评分处于低水平。单因素分析结果显示，年龄、文化水平、婚姻状态、亲属冠心病患病史、健康知识掌握评分、健康素养评分是影响冠心病PCI术后Ⅱ期心脏康复患者自我管理行为的可能因素（P<0.05）。多因素分析结果显示，文化水平、婚姻状态、健康Medical technological developments知识掌握评分、健康素养评分是冠心病PCI术后Ⅱ期心脏康复患者自我管理行为的独立影响因素（P<0.05）。结论 冠心病PCI术后Ⅱ期心脏康复患者的自我管理行为受到文化水平、婚姻状态、健康知识掌握评分、健康素养评分的影响。

背景：运动训练有改善骨质疏松的作用，但其对于老年骨质疏松的作用及机制尚未完全明确。目的：观察跑台运动对老年大鼠骨质疏松及wnt/β-catenin信号通路的影响。方法：取16只24月龄雄性SD大鼠，采用随机抽样法分为骨质疏松症组和跑台组，每组8只，以自然衰老复制老年骨质疏松模型，同时跑台组大鼠进行跑台运动干预8周，1次/d,5 d/周；将8只6月龄雄性SD大鼠作为青年组。8周后，采用ELISA法检测各组大鼠血清中骨代谢标志物Ⅰ型胶原交联C末端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素、骨特异性碱性磷酸酶水平，双能X射线检测左股骨与L5骨密度，使用骨显微CT行胫骨和L4椎体扫描及骨微结构定量分析，RT-PCR和Western blot检测骨髓中wnt3a、β-catenin、LRP5、DKK1、GSK3β的m RNA和蛋白表达。结果与结论：(1)与青年组相比，骨质疏松症组大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶及骨钙素水平降低(P <0.05)，左股骨和L5椎体骨密度降低(P <0.05)，胫骨和L4椎体骨小梁数量、骨体积、骨体积分数减少(P <0.05)，骨髓中wnt3a、β-selleck抑制剂catenin、LRP5 mRNA水平及蛋白表达降低(P <0.05)；血清抗酒石酸酸性磷酸酶、Ⅰ型胶原交联C末端肽水平升高(P <0.05)，胫骨和L4椎体骨小梁间隙、结构模型指数升高(P <0.05)，骨髓中DKK1、GSK3β的mRNA及蛋白表达升高(P <0.05)；胫骨、L4椎体骨小梁数量减少，结构紊乱、排列稀疏断裂；(2)与骨质疏松症组相比，跑台组大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶、骨钙素水平升高(P <0.05)，左股骨和L5椎体骨密度升高(P <0.05)，胫骨骨小梁数量、骨体积、骨体积分数升高(P <0.05)，骨髓中wnt3a、β-catenin、LRP5 mRNA及蛋白表达升高(P <0.05)；血清抗酒石酸酸性磷酸酶、Ⅰ型胶原交联C末端肽水平降低，L4椎体骨小梁间隙，胫骨骨小梁间隙、结构模型指数降低，骨髓中DKK1、GSK3β的mRNA水平www.selleck.cn/products/smoothened-agonist-sag-hcl及蛋白表达降低(P <0.05)；胫骨、L4椎体骨小梁数量明显增加，排列较规整致密，连成网状；(3)immunocorrecting therapy结果显示，跑台运动可能通过激活wnt/β-catenin信号通路改善老年大鼠骨质疏松。

KEYNOTE-799研究近期更新了2年生存结果。这是一个由10个国家52个研究中心参与的非随机Ⅱ期研究，旨在研究帕博利珠单抗联合同步放化疗治疗不可切除的Ⅲ期NSCLC的疗效，其主要研究终点为客观缓解率（ORR）和3级及以上肺炎的发生率。研究共纳入216例不Staurosporine供应商可切除的局部晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者，其中112例患者进入A队列（鳞癌和非鳞NSCLC）,104例患者进入B队列（非鳞NSCLC）(2022ASCO更新时变为102例)。两组在给予帕博利珠单抗PR-171半抑制浓度+化疗诱导治疗1个周期后行帕博利珠单抗联合同步放化疗，接着行帕博利珠单抗巩固治疗。结果显示，A队列ORR为71.4%，疾病控制率（DCtreacle ribosome biogenesis factor 1R）达到88.4%;B队列ORR为75.5%,DCR达到93.1%。A队列中位PFS为30.6个月，2年PFS率55.3%;B队列中位PFS未达到，2年PFS率为60.6%。两队列的中位OS和缓解持续时间都未达到。KEYNOTE-799进行了免疫联合同步放化疗的尝试，有望使更多不可切除的局部晚期NSCLC患者接受免疫治疗。

目的:探讨甲基化转移酶样蛋白3(METTL3)对颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)巨噬细胞NLRP3炎性小体和焦亡的调控效应。方法:将16只雄性SD大鼠随机分为对照组和TMJOA模型组。采用H&E染色、阿利新蓝染色和番红固绿染色观察关节软骨组织关节炎情况，并进行Mankin’s和骨关节炎软骨损伤分级(OARSI)评分。采用脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导巨噬细胞RAW264.7以构建焦亡细胞模型，被转染METTL3过表达质粒和小干扰RNAs(siRNBMN 673As)。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测颞下颌关节滑液或RAW264.7细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)的活性；免疫印迹检测滑液巨噬细胞或RAW264.7中METTL3,NLRP3炎性小体和焦亡相关蛋白，IκBα和p65磷酸化水平。结果:在体内实验中，与对照组比较，TMJOA模型组大鼠出现关节软骨组织损伤，Mankin’s评分和OARSI评分升高；大鼠颞下颌关节滑液中T cell biology乳酸脱氢酶(LDH)活性增强；颞下颌关节滑液巨噬细胞中METTL3,NLRP3炎性小体和焦亡相关蛋白表达水平增加。在体外实验中，METTL3过表达显著协同LPS联合ATP诱导MDV3100 IC50的RAW264.7细胞NLRP3炎性小体形成和细胞焦亡，增强LDH活性，并激活IκBα和p65磷酸化；然而，通过转染siRNAs敲低METTL3表达能够显著抑制LPS联合ATP诱导的RAW264.7细胞NLRP3炎性小体形成和细胞焦亡，抑制LDH活性，减少IκBα和p65磷酸化水平。结论:METTL3沉默可通过拮抗NF-κB信号通路抑制NLRP3炎性小体和焦亡改善TMJOA软骨损伤。

[背景]氟可诱导心肌损伤。c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在细胞凋亡过程中具有重要作用，但该通路在氟中毒对心肌细胞损伤中的作用仍为未知。[目的]探究氟化钠（NaF）对大鼠心肌细胞H9c2的毒性作用，以及是否通过JNK信号通路影响心肌细胞凋亡。[方法]按照NaF浓度及是否加入SP600125(JNK抑制剂)，将大鼠心肌细胞分为对照组、SP600125组（SP组）、0.24 mmol·L~(-1) NaF组、0.48 mmol·L~(-1) NaF组、0.96 mmol·L~(-1) NaF组、0.96 mmol·L~(-1)NaF+SP600125组（NaF+SP组）。将NaF染毒24 h的大鼠H9c2心肌细胞于荧光倒置显微镜下观察细胞形态，对处理24、48、72 h后的细胞采用CCK-8法检测细胞活力变化，采用荧光探针法检测处理24 h后的H9c2心肌细胞中活性氧（ROS）水平，采用实时荧光定量PCR法检测处理24 h后细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、JNK mRNA表达水平，采用Western blotting方法检测处理24 h后细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、p-JNK蛋白genetics services表达情况。[结果]与对照组相比，0.48、0.96 mmol·L~(-1) NaF处理24 h后细胞生长密度减少，NaF浓度增加后出现变圆细胞，镜下出现部分悬浮死细胞，并且NaF染毒处理细胞24 h后，0.48、0.96 mmol·L~(-1)NaF组细胞活力低于对照组（P <0.05）,NaF处理细胞48、72 h后NaF各处理组的细胞活力均低于对照组（P <0.05）；与对照组CB-839体外相比，NaF染毒培养心肌细胞24 h后，细胞内ROS水平升高，Bcl-2 mRNA表达有不同水平的下降，特别是0.48和0.96 mmol·L~(-1)NaF组，Bax、Caspase-3及JNK mRNA表达水平明显增加，Bcl-2蛋白表达水平下降，Bax、Caspase-3、p-JNK蛋白表达水平升高（P <0.05）；与0.96 mmol·L~(-1) NaF组相比，NaF+SP组细胞活力增加，ROS水平降低，Bax、Caspase-3与JNK mRNAIpatasertib表达水平降低，Bcl-2蛋白表达明显升高，Bax、Caspase-3、p-JNK蛋白表达明显降低（P <0.05）,Bcl-2 mRNA表达有增加，但差异无统计学意义（P> 0.05）。[结论]过量氟暴露可诱导心肌细胞ROS产生增多，并可能激活JNK信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡，进而造成心肌细胞损伤。

随着乳腺肿瘤整形与乳房重建在国内新的临床应用趋势,更鉴于新的循证医学数据不断累积,中国抗癌协会乳腺癌专业委员会召集外科、整形、放疗、内科、病理等多学科专家,在《乳腺肿瘤整形与乳房重建专家共识(2018年版)》的基础上共同商讨制定了《乳腺肿瘤整形与乳房重建专家共识(2022年版)》,2022年版新增了腔镜乳房重建、胸肌前乳房重建及乳房重建的个案管理等内容,并将初版的保留乳头乳晕的全乳切除章节更名为保守性全乳切除,并做了大量内容补充及更新。共识也对胸肌前乳房重建、游离腹壁下动脉穿支皮瓣(deep inferior epigastriCrizotinib分子量c artery perforator flap,DIEP)手术等临床热点进行了详尽Symbiotic drink的阐述。相信本次更新会给各层级医院提selleck激酶抑制剂高乳腺肿瘤整形及乳房重建临床水平,提升治疗规范化,优化治疗结局助力,最终提高患者满意度。