DUB信号通路

【目的】克隆湘云鲫2号肠道干细胞标志物LGR6，分析其分子特征并制备多克隆抗体，为后续研究LGR6的功能及揭示其在维持鱼NSC 119875价格类肠道黏膜稳态中的分子机制提供重要工具。【方法】利用PCR克隆湘云鲫2号LGR6的ORF序列(3nLGR6)，通过InterProScan、TMHMM Server 2.0、SignalP 5.0、SWISS-MODEL、MEGA 11及STRING等在线软件进行生物信息学分析，并利用原核表达系统制备和纯化3nLGR6重组蛋白，将其免疫小鼠以制备多克隆抗体；使用制备的https://www.selleck.cn/products/liraglutide.html多克隆抗体，通过免疫组织化学法分析3nLGR6在湘云鲫2号肠组织中的分布。【结果】3nLGR6的ORF全长2874 bp，编码957个氨基酸残基。TMHMM 2.0预测该蛋白有7次跨膜结构域；同源性比对和进化分析表明3nLGR6与其他硬骨鱼的同源性较高，且具有较近的亲缘关系。此外，使用原核表达系统表达和纯化了3nLGR6部分蛋白，并制备Noninvasive biomarker其多克隆抗体。免疫组化结果显示，该抗体可特异性识别湘云鲫2号肠道内源性3nLGR6。【结论】3nLGR6编码蛋白的结构和功能相对保守。利用制备的3nLGR6抗体可特异性识别湘云鲫2号肠组织LGR6，为后续深入研究3nLGR6的功能提供了重要数据。

目的 研究G蛋白偶联雌激素受体(G-protein coupled estrogen receptor, GPER)抑制剂G15对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞T-47DTR敏感性的影响。方法 采用他莫昔芬在体内活性形式4-羟基他莫昔芬(4-OHT)进行实验。MTT实验检测乳腺癌他莫昔芬耐药细胞系T-47DTR及其亲本细胞系T-47D对他莫昔芬的敏感性；膜浆分离分析抑制剂G15对GPMG132ER蛋白表达的变化；流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染分析4-OHT联用G15对T-47DTR细胞凋亡的影响；Western blot分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-9、cleaved-caspase-9的表达水平。结果 (1)相比于亲本细胞T-47D,T-47DTR耐药细胞对4-OHT的抵抗性显著增强。(2)给予4-OHT(2μmol·L~(-1)),与对照组相比，GPER在细胞膜分布增加，表明在TIn Vitro Transcription-47DTR耐药细胞中GPER被激活；与单用4-OHT相比，联用G15(5μmol·L~(-1))显著减少GPER表达。（KPT-330 NMR3） GPER抑制剂G15能增加T-47DTR耐药细胞凋亡率同时下调抗凋亡蛋白Bcl-2，上调促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的表达。结论 GPER抑制剂G15增加T-47DTR细胞的凋亡恢复耐药细胞对他莫昔芬的敏感性。

赖氨酰氧化酶样蛋白4(lysyl oxidase like 4, LOXL4)是一种属于赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase, LOX)蛋白质家族的分泌型铜依赖性胺氧化酶，参与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的组装和维持。LOXL4蛋白在人类肝癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、头颈鳞癌、食管癌和结直肠癌中表达上调，而在人类膀胱癌和肺癌中表达下调并抑制肿瘤的生长，表明LOXL4蛋白在不同类型的人类恶性肿瘤中具有促癌或抑癌的双向作用。肿瘤细胞外泌体中的LOXL4蛋白通过催化作用产生过氧化氢，后者直接激活FAK/Src信号通路，并促进细胞基质粘附和细胞迁移。外泌体介导的LOXL4Mediterranean and middle-eastern cuisine还可以通过激活PI3selleck PLX4032K/Akt信号通路来促进肿瘤细胞的增殖和免疫逃逸。肿瘤细胞中的LOXL4可以经外泌体转运至巨噬细胞，进一步通过STAT1和STAT3介导的信号通路激活细胞免疫抑制功能和激活程序性死亡配体1(programmed death ligand 1, PD-L1)表达，触发巨噬细胞的免疫抑制功能，促进肿瘤细胞的免疫逃逸。此外，LOXL4蛋白还能通过激活p53蛋白和抑制Ras/ERK信号转导通路发挥抑癌功能。本文主要总结了LOXL4蛋白的结构、功能及其在人类恶性肿瘤发生发展的作用机制，进一步探讨LOXL4蛋白在恶性肿瘤研究中的应用前景，为恶性肿瘤的临床诊断、治GPCR & G Protein抑制剂疗和筛选预后标志物提供理论基础和参考依据。

目的 分析乳腺癌术后患者应用五感六觉护理干预联合有氧运动的疗效。方法 便利抽样法选取2020年1月至2021年1月某医院收治的需要实施手术治疗的乳腺癌患者136例，采用随机数字表法将其分为对照组和观察组，每组各68例。对照组实施有氧运动，观察组在对照组基础上增加五感六觉干预。比较干预前后2组患者心理弹性、负性情绪、睡眠质GSK J4浓度量、上肢功能恢复情况。结果 干预前，2组患者心理弹性、负性情绪评分及睡眠质量评分比较差异无统计学意义（P>0.05）；干预后，观察组力量性、乐观性、坚韧性、希望性评分均高于对照组（P<0.05）；观察组睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍、催眠药物、日间gut infection功能障碍及睡眠质量总分均低于对照组（P<0.05）；观察组疼痛、肩关节活动范Mirdametinib围、日常活动能力、肌力及关节形态等上肢功能评分均优于对照组（P<0.05）。结论 在乳腺癌术后患者中应用五感六觉联合有氧运动可提高其睡眠质量，改善其心理弹性，疏导治疗过程中不良情绪，促进患肢功能恢复。

白藜芦醇是一种具有抗癌、抗氧化、诱导细胞凋亡等广泛的生物活性的天然二苯乙烯类化合物,但其成药性差、代谢快、靶点的选择性和生物利用度低,导致其进一步的应用价值和药理开发受到限制。对此类天然活性先导苷元进行结构修饰以改善其药理作用,是目前开发药物的一种新策略。如在二苯乙烯苷元上引入糖基片段,可保护苷元免受酶氧化,降低其毒性,从而提高其活性及生物利用度。此类化合物天然来源非常有限,极大限制了对其药物活性的深入研究,人工化学合成二苯乙烯氧糖苷类化合物就成为一种必需的途径。本课题通过对关键的酚氧糖苷化反应、酚羟基的选择性保护及其脱保护反应条件进行了筛选和优化,开展对天然二苯乙烯NSC 119875氧糖苷单体及其类似物的化学合成研究。本论文从以下几个章节进行分析和讨论:第一章介绍了不同的取代基对白藜芦醇分子结构中的酚羟基、双键和苯环等进行化学修饰,揭示各官能团之间的相互作用和构效关系。综述了白藜芦醇衍生物及其氧糖苷单体类似S63845物的化学结构、合成方法、生物作用机制和相关治疗应用。第二章采取选择性保护-氧糖苷化-Wittig偶联-脱保护的合成策略,进行模板反应研究:首先通过合成3-甲氧基-5-羟基-苯甲醛,对脱甲基反应条件进行了筛选,优化了脱甲基保护的反应条件,为后续二苯乙烯氧糖苷单体的脱甲基保护奠定了基础。接着对氧糖苷化的催化体系进行了筛选,探讨了催化剂、温度、投料比、反应时间、溶剂等对反应的影响。最终确定在Ag_2CO_3催化的quinoline-CH_3CN双溶剂条件下,通过Koenigs-Knorr糖苷法使3-甲氧基-5-羟基-苯甲醛与糖基供体乙酰溴-α-D-葡萄糖进行糖苷化反应,3-甲氧基-5-O-β-葡萄糖苷-苯甲醛的产率可达到79.11%。之后糖基取代的苯甲醛与膦盐经过Wittig反应构建二苯乙烯骨架,对双键顺反异构化后的反式二苯乙烯氧糖苷单体依次通过Al Cl_3脱除苄基,Na OMe脱除乙酰基,成功合成了松芪氧糖苷单体Pinostilbene3-O-β-D-glucoside;采用BBr_3直接脱除所有保护基团以得到白藜芦醇氧糖苷单体Piceid的类似物Resveratrol-3-O-α-D-glucoside,该产物结构还在进一步分离鉴定中。第三章设计两种路线合成3-苄氧基-5-O-β-葡萄糖苷-苯甲醛。首先以合成的3,5-二羟基-苯甲醛直接与乙酰溴-α-D-葡萄糖进行选择性糖苷化反应,然后对另一个裸露的酚羟基进行苄基保护;第二种是首先对3,5-二羟基-苯甲醛的酚羟基进行选择性苄基保护,之后与糖基供体进行糖苷化反应,两种路线中后者的糖苷化产率相对较高,可达到77.04%;糖苷化产物与膦盐经过Wittig反应构建双键,对双键顺反异构化后的反式二苯乙烯氧糖苷单体尝试了多种脱保护试剂,均能成功脱除所有的保护基团;在Al Cl_3/DCM体系中分离到少量目标产物,氢谱数据与文献中报道的天然提取物Isorhapontin数据基本一致,但是反应副产物较多,产率较低使得进一步分离纯化较为困难;最后用10%Pd-C、1,4-环己二烯对乙酰基水解后的产物进行苄基的脱除,得到了双键被还原的产物Dihydro isorhapontigenin glucoside,分析原因是由于二苯乙烯类化合物中双键的共轭性好使得双键发生了还原。本课题以3,5-二羟基-苯甲醛为原料,引入苄基或甲基对其酚羟基进行选择性保护,之后与糖基供体通过Koenigs-Knorr糖苷法进行糖苷化反应,并优化了糖苷化反应的催化体系,提高了区域选择性,得到产率较高的氧糖苷产物;接着Wittig偶联构建双键,最后通过选择性脱保护首次合成了二苯乙烯氧糖苷单体Pinostilbene Medical geology3-O-β-D-glucoside、Isorhapontin及类似物Dihydro isorhapontigenin glucoside;在本课题中,保护基的选择和脱除依然存在非常大的困难和挑战,需要找到一种更高效、条件更为温和、产率更高、后处理更方便的脱甲基反应条件,才有望得到预期的天然产物Piceid和Astringin。氧糖苷单体的合成还处于初步研究阶段,二聚体的探索研究正在进行中。我们期望通过这一合成策略,能够更高效、高产率、高选择性的获得目标产物,去探索更多结构类似的二苯乙烯氧糖苷单体及二聚体的合成。

目的 建立基于术前乳腺MRI的影像组学列线图，探讨MRI影像组学模型对乳Smoothened Agonist配制腺癌腋窝淋巴结转移(axillary lymph node metastasis,ALNM)的预测价值。材料与方法 回顾性分析宁夏医科大学总医院2016年8月至2020年12月经病理确诊的169例女性乳腺癌患者的MRI及临床病理资料(118例为训练集，51例为验证集)。在动态对比增强MRI第3期图像中，对所有患者的乳腺肿瘤原发灶进行感兴趣区(volume of interest,VOI)勾画并提取影像组学特征。采用Mann-Whitney U检验、LASSO回归进行影像组学特征筛选并建立影像组学标签，对所选特征按LASSO回归中相应系数加权后求和来计算影像组学评分。同时通过Logistic回归筛选临床危险因素建立临床预测模型，并构建基于临床危险因素和影像组学标签的联合预测模型。使用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线和校准曲线评估模型性能，使用Delong检验评价不同模型间ROC曲线下面积(area under curve,AUC)的差异，使用决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)评估预测模型的临床价值。结果 从每个VOI中提取200个影像组学特征，其中10个Behavioral toxicology影像组学特征与乳腺癌发生ALNM相关。在训练集及验证集中，影像组学标签的AUC值AM-2282分别为0.86及0.74；临床预测模型的AUC值分别为0.83、0.78；联合预测模型的AUC值分别为0.86及0.80。DCA显示联合模型的临床价值高于影像组学标签及临床模型，使用列线图能够可视化该联合预测模型。结论 基于术前MRI影像组学标签和临床危险因素所构建的联合模型可用于乳腺癌ALNM的预测，为术前评估乳腺癌患者发生ALNM的风险提供了一种新的方法。

目的 评价无缝隙护理加移情干预在急诊心绞痛患者中的应用效果及价值。方法 选取2019年1月至2022年5月区间本院收治的76例急诊心绞痛患者展开对照分析，按护理干预不同分组，分为对照组和研究组，组内样本量均为38例，前者实施常规护理，后者实施无缝隙护理加移情干预，比较两组急救效率、心理状态medical level以及心绞痛发作情况。结果 研究组分诊时间、院前急救反应时间以及急诊抢救MRTX1133试剂时间均短于对照组，且抢救成功率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。干预后，研究组STAI评分低于对照组，Herth评分高于对SBE-β-CD细胞培养照组，差异有统计学意义（P<0.05）。干预后，研究组心绞痛持续时间及发作次数均少于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 无缝隙护理加移情干预对急诊心绞痛患者院前急救时间缩短、抢救成功率提升、心理状态及心绞痛发作改善等均可起到积极影响。

目的 分析儿童髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）抗体相关疾病26例的临床特点及脑电图。方法 回顾性收集、分析GSI-IX IC502019年1月至2020年12月就诊于西安市儿童医院的26例寻找更多MOG抗体病患儿的临床资料。结果 26例MOG抗体病患儿中，男13例，女13例，男女比例1∶1，首发症状表现多样，以意识障碍及癫痫发作等症状多见（占比42.31%）。26例MOG抗体病患儿行头颅磁共振成像（MRI）平扫，其中25例在颅内发现异常病灶，主要表现为多发片状或斑片状长/稍长T_1及长/稍长T_2信号，T_2Flair高/稍高信号影，最常见为双侧大脑半球受累，其次为脑干、丘脑、小脑受累。26例MOG抗体病患儿均于病程急性期行视频脑电图（VEEG）监测，其中20例患儿脑电图出现异常，主要表现为背景活neonatal microbiome动减慢，或出现多灶、弥漫或广泛性慢波。26例MOG抗体病患儿血清MOG抗体均阳性，4例患儿脑脊液MOG抗体阳性。26例MOG抗体病患儿均使用激素治疗，17例患儿联合应用免疫球蛋白冲击治疗，出院时急性期患儿临床症状均有不同程度好转；随访期间3例患儿病情复发，复发患儿应用吗替麦考酚酯治疗后临床症状缓解。结论 儿童MOG抗体相关疾病的男女发病比例差异较小，首发症状以意识障碍、癫痫发作多见，颅内病灶往往多发；血清MOG抗体检测较脑脊液更有价值，脑电图未见特征性改变；急性期以激素及丙种球蛋白冲击治疗为主，患儿临床预后大多良好，但部分有复发。

目的 探讨5 mg SGLT2抑制剂干预对使用他汀类调脂药冠心病患者血糖异常发生风险的影响。方法选取行冠脉CTA或CAG或PCI诊断为冠心病患者323例，根据是否服用SGLT2抑制剂将其分为对照组（192例）和SGLT2抑制剂组（131例），对照组采用常规治疗，SGLT2抑制剂组在常规治疗基础上应用5 mg SGLT2抑制剂。随访13个月，对比两组治疗前后临床效果。结果 治疗前，两组吸烟史、饮酒史、糖尿病家族史、年龄、性别、空腹血糖、糖负荷后2 h血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、谷丙转氨酶、尿酸、eGFR、左室射血分数（LVEF）、NT-proBNP水平比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。随访3个月，Phage Therapy and Biotechnology两组血清NT-proBNP治疗前后下降水平比较差异有统计学意义（P<0.05）。随访13个月，对照组血糖异常发生率（6.25%）高于SGLT2抑制剂组（0.76%），差异有统计学意义（P<0.05）。RR为0.122(95%CI:0.016～0.928)。两组谷丙转氨酶、尿酸、eGFR、NT-proBNP、射血分数治疗前后比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 5 mg SGLT2抑制剂用于冠心病患者可明显降低他汀类调脂药所致血糖异Crizotinib供应商常发生的风险，同时可使血清NT-proBNP水平下降更快、更明显，且不会加重心脏、Z-IETD-FMK小鼠肝脏、肾脏负担。

为了探讨翻堆次数对异位发酵床连续堆肥过程中抗生素抗性基因（ARGs）和可移动基因元件（MGEs）的影响，设置1 d翻堆1次（F1组）和2 d翻堆1次（F2组）2种条件，采用PCR技术检测堆肥过程中15种基因，包括2种四环素类（tetG、tetW）、3种磺胺类（sul1、sul2、dfrA1）、2种β-内酰胺类（bla TEM-1、fexA）、2种MLSB类（ermX、ermQ）、2种FCA类（optrA、IsaE）、1种氨基糖苷类（aac(6′)-Ib-cr）、1种整合子（intI1）及2种转座子（Tn916/1545、ISCRI）基因。PCR结果显示，2寻找更多组样品中均检出11种ARGs(tetG、tetW、sul1、Erastin溶解度sul2、bla TEM-1、fexA、ermX、ermQ、optrA、IsaE、aac(6′)-Ib-cr)和3种MGEs(intI1、Tn916/1545、ISCR1)，其中7种基因（tetG、tetW、sul1、sul2、blaTEM-1、eKnee infectionrmQ、intI1）的检出率较高；F1和F2组0～5 d均检出12种，33 d和40 d分别检出1种，40 d后明显增加，表明ARGs和MGEs种类随温度的变化而改变。采用qPCR技术对检出率较高的7种基因进行检测，结果显示，F1和F2组7种目标基因的总相对丰度呈先降低后升高再降低的趋势，试验结束时较0 d分别降低82.33%和78.89%，其中tetG、tetW、sul1、bla TEM-1、ermQ、intI1的相对丰度分别降低16.51%、87.89%、54.58%、99.99%、97.80%、59.29%和64.32%、99.46%、50.91%、99.29%、82.22%、99.92%。结果表明，异位发酵床降解粪污高温期可减少ARGs种类和丰度，且2 d翻堆1次对大部分ARGs的去除效果更好。