DUB信号通路

目的：探讨芪黄健脾滋肾颗粒治疗系统性红斑狼疮（SLE）心功能受累的临床疗效及安全性。方法：选取安徽中医药大学附属第一医院风湿免疫科2021年6月至2022年12月的SLE心功能受累的患者62例，随机分为对照组和观察组（每组各31例），对照组给予甲泼尼龙片及硫酸羟氯喹片治疗，观察组在对Z-VAD-FMK体内实验剂量照组治疗措施基础上加用芪黄健脾滋肾颗粒冲剂，经12周治疗，对比两组治疗效果、心功能指标[左心房舒张末期径（LADd）、左CCRG 81045心室舒张末期内径（LVDd）、左室后壁厚度（LVPWTd）、舒张早期峰值血流速度（E峰）、舒张晚期峰值血流速度（A峰）、舒张早期与晚期峰值血流速度比值（E/A）、每搏输出量（SV）、左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、B型利钠肽（BNP）]、血管损害指标[一氧化氮（NO）、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子（VEGF）、同型半胱氨酸（Hcy）]、炎症指标[红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（Hs-CRP）、抗双链DNA(dsDNA)抗体、疾病活动度（SLEDAI）评分、症状体征改善情况及不良反应发生情况。结果：经治疗，对照组患者总有效率为67.74%(21/31)，观察组患者总有效率为87.09%(27/31)，观察组患者总有效率明显高于对照组，差异具有统计学意义（χ2=6.203,P<0.05），且两组不良反应的发生率差异无统计学意义。与本组治疗前比较，对照组LVDd、LVPWTd、BNP、ET-1、VEGF、Hcy水平均明显降低（P<0.05）,E峰、E/A、SV、LVEF、LVFS指标均明显升高（P<0.05）；观察组LADd、LVDd、LVPWTd、A峰、BNP、NO、ET-1、VEGF、Hcy水平明显降低（P<0.05）,E峰、E/A、SV、LVEF、LVFS指标明显升高（P<0.05）。两组患者心悸、胸闷、呼吸困难、水肿等症状积分均明显降低（P<0.05）,ESR、Hs-CRP、ds-DNA、SLEDAI水平均降低（P<0.05）。与对照组治疗后比较，观察组LADd、LVDd、LVPWTd、A峰、BNP指标降reactive oxygen intermediates低，心悸、胸闷、呼吸困难、水肿等症状积分明显降低（P<0.05）,E峰、E/A、SV、LVEF、LVFS指标升高（P<0.05）;NO、ET-1、VEGF、Hcy水平明显降低（P<0.05）;ESR、Hs-CRP、ds-DNA、SLEDAI水平降低更加明显（P<0.05）。结论：芪黄健脾滋肾颗粒联用硫酸羟氯喹、甲泼尼龙可显著改善SLE累及心脏损害患者的多项指标和症状、体征，具有一定的临床应用价值。

研究背景:胃癌(Gastric cancer,GC)是全球范围内第五大高发恶性肿瘤,死亡率居肿瘤死亡第四位,是严重的全球健康问题。胃癌的发生发展是一个环境因素与宿主因素相互作用的多因素多阶段的复杂过程。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染是胃癌发生发展过程中最重要的环境因素之一,不仅能够启动Correa级联反应触发肠型胃癌的发生,又能长期定植于肿瘤、上皮、免疫细胞中,甚至向胃黏膜外转移,触发多种接头蛋白的信号级联反应,导致核因子激活,产生细胞因子和炎症因子,促进胃癌的侵袭转移、上皮间质转化、血管生成等恶性生物学行为,不仅使胃癌发病风险升高还能促进胃癌的进展影响预后,但其致病机制仍不清楚。近年来,研究发现H.pylori感染也与糖尿病、高血压、高血脂、代谢综合征(Metabolic Syndrome,Met S)等胃外全身性疾病密切相关,也有研究报道H.pylori感染能够影响糖酵解、氨基酸代谢、脂肪酸代谢、能量代谢等代谢途径,提示我们H.pylori感染可能影响人体的代谢稳态。代谢重塑是恶性肿瘤的标志之一,从代谢组学水平上表现为糖酵解增强,有氧呼吸受损、氨基酸上调、脂质生成增加、脂肪酸β氧化增强等,在胃癌的发生发展中也起到重要作用,不仅为癌细胞增殖提供能量,还能促进肿瘤加速进展,而癌细胞代谢变化又与微环境相互调节,而H.pylori作为在人体内定居的重要微生物群落之一,其与胃癌代谢的调控机制尚不清楚。H.pylori感染是否能够影响胃癌的代谢表型,其导致胃癌代谢表型变化的机制如何有待探索。研究目的:探讨H.pylori感染对胃癌代谢表型的影响及其介导胃癌细胞异常代谢的作用机制。研究方法:第一部分:幽门螺杆菌感染对胃癌代谢表型的影响-基于临床资料的研究1、研究对象:本研究是一项横断面研究,回顾性收集了胃癌患者的临床资料,共纳入胃癌病例337例,平均年龄62.76岁,男性223例,女性114例,H.pylori阳性率64.7%。纳入标准为:1)2013年3月-2021年8月于中国医科大学附属第一医院接受胃癌手术的患者;2)经组织病理学检查确诊为胃癌。排除标准为:1)术前接受过化疗或者放疗、二次复发手术者;2)合并其他恶性肿瘤或有恶性肿瘤病史者;3)合并其他重大慢性疾病,如脑卒中、严重心、肝、肾功能不全;4)既往进行过根除H.pylori治疗。从病志中提取实验室检查和临床资料。本研究获中国医科大学附属第一医院伦理委员会批准并签署知情同意书。2、H.pylori感染的检测:H.pylori感染的判定采用H.pylori Ig G抗体检测试剂盒(胶体金法),严格按照试剂盒说明书操作。3、Met S的定义及相关成分的测定:本研究采用询问或者病志中获取每个受试者的流行病学数据和医学信息;采用标准化人体测量方法测量身高、体重,以平均值作为最终指标;在仰卧位和坐位测量血压;BMI的计算方法是体重(公斤)/身高(米)2;手术治疗前采集静脉血,测量血糖、血脂(甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇)等指标;根据中国糖尿病协会标准对Met S进行诊断。4、统计分析:本研究采用SPSS v22.0软件进行统计分析。连续变量符合正态分布数据用均数±标准差(mean±SD)表示,采用t检验评价两组间差异;不符合正态分布的连续变量用中位值(25百分位数,75百分位数)表示,采用非参数Mann-Whitney U检验评价两组间差异。分类变量用数字或百分比表示,组间差异比较采用卡方检验。双侧P<0.05,差异有统计学意义。第二部分:幽门螺杆菌感染对胃癌代谢表型的影响-基于代谢组学的研究1、研究对象:本研究共纳入30例新鲜胃癌组织样本,来自2012年6月至2014年6月中中国医科大学附属第一医院接受胃癌手术的患者;接受过术前放化疗或既往进行过H.pylori根除治疗的患者被排除在外;研究经中国医科大学附属第一医院伦理委员会批准并签署知情同意书。AGS胃癌细胞系购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心,具有STR鉴定证书;H.pylori标准菌株购自美国ATCC微生物菌株保藏中心,编号ATCC 26695。2、胃癌组织H.pylori感染鉴定:采用三种方法鉴定H.pylori感染状况,包括H.pylori保守基因PCR扩增、Warthin-Starry染色和H.pylori Ig G抗体检测,两种方法阳性判定为H.pylori感染。3、构建H.pylori与AGS细胞共培养模型:微需氧条件下(85%N2、5%O2、10%CO2),H.pylori复苏后于BHI平板进行培养;AGS细胞使用加入胎牛血清的RPMI-1640完全培养基培养至对数生长期;制备细菌悬液,以H.pylori(MOI=100:1)感染AGS细胞24h,构建共培养模型。4、代谢物提取与非靶向代谢组学测序:1)胃黏膜组织:代谢物按常规标准进行提取后通过Vanvosh超高效液相色谱-质谱系统与Orbitrap Q Exactive TM HF质谱仪结合Hypesil Gold色谱柱上机进行测序。下机数据进行搜库与mz Cloud、mz Vault、Mass List数据库匹配获取代谢物定性和相对定量结果。2)胃癌细胞:代谢物按常规标准进行提取后通VCell Biologyanquish超高效液相系统与Thermo Orbitrap Exploris 120质谱检测器结合进行测序。下机数据与HMDB massbank,Lipid Maps,mzcloud比对鉴定代谢产物。5、差异代谢物筛选鉴定及通路富集分析:利用VIP>1和P<0.05筛选确定差异代谢物,使用HMDB数据库进行代谢物注释。通过KEGG数据库基于Metabo Analyst5.0网站进行代谢功能富集分析。第三部分:幽门螺杆菌介导胃癌细胞异常脂肪酸代谢的作用机制研究1、研究对象:HGC27胃癌细胞系购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心,具有STR鉴定证书。AGS细胞系和H.pylori标准菌株来源同第二部分。2、共培养模型构建:构建Si RNA干扰AGS细胞株,以H.pylori(MOI=100:1)感染AGS细胞和Si RNA干扰AGS细胞24h,构建细菌-细胞共培养模型。3、RNA文库构建、转录组测序及数据分析:利用Trizol法提取总RNA并进行质量检测。使用KC-Digital TM Stranded m RNA Library Prep Kit for Illumina(?)进行RNA测序文库制备。最终在PE150模型的Novaseq 6000测序仪(Illumina)上进行测序。原始测序数据下机后进行清洗,使用edge R包确定组间差异表达的基因(P<0.05且|log2FC|>1)。GO和KEGG富集分析均通过KOBAS软件完成,P<0.05具有统计学意义。4、利用Trizol法提取细胞总RNA,利用Mon Script TMRTIII All-in-One Mix with ds DNase反转成c DNA后应用realtime PCR检测ACSL5 m RNA表达量变化。5、提取细胞总蛋白,利用BCA蛋白浓度检测试剂盒进行蛋白浓度定量,利用Western blot法检测ACSL5蛋白表达量的变化。6、提取细胞长链脂肪酰基辅酶A(fatty acyl-Co As),利用超高效液相色谱-串联四极杆质谱进行定量分析。7、按照增强型ATP检测试剂盒操作流程提取细胞ATP,利用化学发光法对实验组和对照组的细胞ATP含量进行检测。8、按照NADP+/NADPH检测试剂盒操作流程提取细胞NADP+、NADPH,利用酶标仪对实验组和对照组细胞NADP+/NADPH比值进行检测。9、统计分析采用SPSS v22.0和GraphPad Prism v7.0软件,正态分布资料两组间差异分析采用t检验,偏态分布资料组间差异分析采用非参数检验。P<0.05被认为具有统计学意义。第四部分:脂肪酸代谢关键酶ACSL5对胃癌细胞生物学功能的影响及临床意义1、研究对象:组织标本来自2012年12月至2019年12月于中国医科大学附属第一医院就诊患者,其中新鲜胃癌及远端正常组织标本30对,石蜡包埋组织标本368例。石蜡包埋组织标本中包含非萎缩性胃炎(NAG)40例、肠化型萎缩性胃炎(IM-GA)84例,胃癌(GC)244例。其中,80例GC具有癌旁IM-GA及远端正常组织;118例GC患者具有完整临床病理资料以及随访信息,随访截止至2022年6月。本研究经中国医科大学附属第一医院医学伦理委员会批准并签署知情同意书。AGS及HGC27胃癌细胞系均购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心,两种细胞系均具有STR鉴定证书。2、构建ACSL5慢病毒过表达、Si RNA干扰胃癌细胞系。3、利用Trizol法提取细胞总RNA,利用MonScript TMRTIII All-in-One Mix with ds DNase反转录后应用实时荧光定量PCR检测ACSL5 m RNA表达量变化。4、提取细胞总蛋白,利用BCA蛋白浓度检测试剂盒进行蛋白浓度定量,利用Western blot检测ACSL5蛋白表达量的变化。5、利用CCK-8实验、EdU荧光染色实验检测细胞的增殖能力;利用划痕愈合实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力。6、免疫组化染色检测胃黏膜组织ACSL5原位表达。7、统计分析采用SPSS v22.0和Graph Pad Prism v7.0软件,正态分布资料两组间差异分析采用t检验,偏态分布资料组间差异分析采用秩和检验。采用卡方检验评估蛋白表达与临床病理参数相关性。采用受试者操作曲线(ROC)对诊断价值进行评价。通过log-rank检验进行生存分析。P<0.05被认为具有统计学意义。研究结果:第一部分:幽门螺杆菌感染对胃癌代谢表型的影响-基于临床资料的研究1、H.pylori感染与胃癌患者代谢特征分析H.pylori阳性组空腹血糖(P=0.009)、收缩压(P<0.001)、舒张压(P=0.01)水平显著高于H.pylori阴性组。H.pylori阳性组HDL-C水平显著低于H.pylori阴性组(P=0.007)。2、H.pylori感染与胃癌患者代谢特征分层分析按性别分层:在男性组中,H.pylori阳性组收缩压(P<0.001)、舒张压(P=0.005)、血糖(P=0.024)显著升高,HDL-C显著降低(P=0.026)。H.pylori主要与血压、血糖、脂代谢紊乱相关。在女性组中,H.pylori阳性组血糖(P=0.023)显著升高,HDL-C显著降低(P=0.025)。H.pylori感染主要与血糖、脂代谢紊乱相关。按年龄分层:在大于60岁的人群中,H.pylori阳性组血糖(P=0.003),收缩压(P=0.005)、舒张压(P=0.043)显著升高。H.pylori主要与血糖、血压异常相关。在小于等于60岁的人群中,有吸烟史的人群H.pylori感染率更高,H.pylori阳性组收缩压(P=0.007)、舒张压(P=0.044)升高,HDL-C显著降低,血脂的差异主要集中在女性人群中(P=0.005)。按疾病进展分层:在早期胃癌的人群中,H.pylori阳性组血糖(P=0.019)、舒张压升高(P=0.037),TG有升高趋势(P=0.078),HDL-C显著降低(P=0.027)。H.pylori主要与血糖、血压、血脂紊乱相关。在进展期胃癌人群中,H.pylori阳性组收缩压(P<0.001)、舒张压(P=0.016)显著升高。3、H.pylori感染与胃癌患者代谢综合征发生率的差异分析分析共纳入所有代谢相关指标完整病例258例。H.pylori阳性组BMI升高(P=0.022)、血脂紊乱(P=0.011)、血糖升高(P=0.036),高血压的发生率呈现升高趋势(P=0.085),代谢综合征的发生率显著高于H.pylori阴性组(P=0.007)。第二部分:幽门螺杆菌感染对胃癌代谢表型的影响-基于代谢组学的研究1、H.pylori感染对胃癌组织代谢表型的影响(1)H.pylori感染状态的判定经H.pylori保守基因检测、Warthin-Starry染色及血清Ig G三种方法综合判定,30例新鲜胃癌标本中有16例为H.pylori感染阳性,14例为H.pylori阴性,阳性率53.33%。(2)H.pylori感染与非感染胃癌组织差异代谢物分析11个代谢物在H.pylori阳性及阴性胃癌组织中存在富集差异。其中胆汁酸、顺-2-二十二碳烯酸、珊瑚脂酸F、γ-依兰油烯、GSK126石榴酸、肾上腺甾酮、p-薄荷-1,3,8-三烯在H.pylori阳性胃癌组织中呈现高度富集,8Z,11Z,14Z-二十碳三烯酸、花生四烯酸、白杨素、L-组氨酸在H.pylori阳性胃癌组织中呈现低度富集。(3)H.pylori感染与非感染胃癌组织差异代谢物通路富集分析H.pylori感染主要与不饱和脂肪酸生物合成、β-丙氨酸代谢、组氨酸代谢、花生四烯酸代谢等通路相关。不饱和脂肪酸合成通路是H.pylori影响胃癌组织最为显著的代谢通路,涉及到的代谢物主要包括8Z,11Z,14Z-二十碳三烯酸和花生四烯酸。2、H.pylori感染对AGS胃癌细胞代谢表型的影响(1)H.pylori感染与非感染AGS胃癌细胞差异代谢物分析H.pylori感染AGS细胞与对照组AGS细胞之间共筛选出99种差异代谢物,其中52种代谢物在H.pylori感染AGS细胞中高度富集,47种在H.pylori感染AGS细胞中低度富集。(2)H.pylori感染与非感染AGS细胞差异代谢物通路富集分析H.pylori感染主要与ABC转运蛋白,肿瘤的中心碳代谢、嘌呤代谢、丙氨酸/天冬氨酸/谷氨酸代谢、泛酸和辅酶A生物合成等通路相关。差异代谢物能够富集到不饱和脂肪酸合成代谢通路,涉及到的代谢物主要包括棕榈酸、亚油酸、γ亚麻酸、芥酸、二十二碳五烯酸(22n-3)。第三部分:幽门螺杆菌介导胃癌细胞异常脂肪酸代谢的作用机制研究1、H.pylori介导胃癌细胞异常脂肪酸代谢关键调控分子的筛选及鉴定(1)H.pylori感染对AGS细胞转录组学影响的研究H.pylori感染AGS细胞与对照组之间共筛选出1473个差异基因,其中961个m RNA表达上调,512个m RNA表达下调。GO和KEGG富集分析发现差异基因参与多种代谢相关通路。(2)H.pylori感染影响AGS细胞脂肪酸代谢通路及相关基因分析在GO数据库中,富集出3条脂肪酸相关代谢通路、涉及18个基因,分别为脂肪酸代谢过程、长链脂肪酸代谢过程以及不饱和脂肪酸代谢过程;在KEGG数据库中,富集出脂肪酸合成代谢通路,涉及3个基因。两个数据库共同涉及的脂肪酸代谢基因有3个,按照P值排序分别是ACSL5(log2FC 2.08,P=6.41E-33)、ACSL1(log2FC 1.30,P=5.80E-27)和OLAH(log2FC 2.57,P=1.49E-09)。(3)H.pylori感染AGS细胞影响脂肪酸代谢作用最显著的基因是ACSL5H.pylori感染组与对照组相比较,共培养6h、12h和24h,ACSL5 m RNA表达升高倍数均显著高于ACSL1,因此我们以ACSL5作为H.pylori介导胃癌细胞脂肪酸代谢异常关键调控分子进行后续研究。2、H.pylori感染上调胃癌细胞ACSL5表达(1)H.pylori上调胃癌细胞ACSL5表达存在时间依赖性H.pylori以MOI 100:1感染AGS及HGC27细胞,分别在感染后6h、12h、24h检测ACSL5的表达。感染后6小时,ACSL5m RNA表达和蛋白表达均开始显著升高,随着感染时间延长基因表达呈现逐渐升高的趋势。(2)H.pylori上调胃癌细胞ACSL5表达存在细菌浓度依赖性H.pylori以不同感染复数MOI(0、50、100、200)感染AGS及HGC27细胞,无论在感染后6h还是24h,ACSL5 m RNA表达以及蛋白表达随着感染复数的增加而逐渐升高。3、H.pylori感染上调ACSL5表达对胃癌细胞脂肪酸代谢的影响(1)H.pylori影响AGS细胞长链fatty acyl-Co As的生物合成H.pylori感染AGS细胞中饱和脂肪酸C12:0、C14:0、C16:0和不饱和脂肪酸C18:2、C20:4n6、C20:5n3、C22:6n3的fatty acyl-Co As生物合成均显著升高;但饱和脂肪酸C10:0、C18:0和不饱和脂肪酸C16:1、C18:1的fatty acyl-Co As生物合成变化不明显。(2)ACSL5影响AGS细胞长链fatty acyl-Co As的生物合成ACSL5敲减AGS细胞中饱和脂肪酸C12:0、C14:0、C16:0、C18:0和不饱和脂肪酸C16:1、C18:1、C18:2、C20:4n6的fatty acyl-Co As含量显著降低;饱和脂肪酸C10:0的fatty acyl-Co A含量显著升高。(3)H.pylori通过上调ACSL5表达影响AGS细胞长链fatty acyl-Co As生物合成构建转染Si RNA的AGS细胞。相比于H.pylori感染ACSL5非干预组,H.pylori感染ACSL5敲减AGS细胞C14:0、C16:0、C20:4n6的fatty acyl-Co As含量显著降低,C12:0的fatty acyl-Co As含量在两组间无显著差异。(4)H.pylori通过上调ACSL5表达影响AGS细胞能量代谢变化H.pylori感染增加ACSL5非干预的AGS细胞ATP生成(P=0.012),而H.pylori感染ACSL5敲减的AGS细胞则部分抑制ATP的生成(AGS+Hp vs AGS Si301+Hp:P=0.034,AGS+Hp vs AGS Si2183+Hp P=0.023);H.pylori感染升高ACSL5非干预的AGS细胞NADP+/NADPH比率(P=0.006),而H.pylori感染ACSL5敲减的AGS细胞则部分抑制NADP+/NADPH比率升高(AGS+Hp vs AGS Si301+Hp:P=0.038,AGS+Hp vs AGS Si2183+Hp P=0.01)。第四部分:脂肪酸代谢关键酶ACSL5对胃癌细胞生物学功能的影响及临床意义1、ACSL5对胃癌细胞生物学功能的影响(1)构建ACSL5过表达与敲减工具细胞株ACSL5过表达慢病毒感染AGS及HGC27胃癌细胞,病毒感染48h荧光效率可达80%以上,ACSL5 m RNA及蛋白表达量均BMS-907351体内实验剂量显著高于空载对照组。ACSL5 Si RNA转染AGS细胞,ACSL5 m RNA及蛋白表达量均显著降低。(2)ACSL5促进胃癌细胞增殖CCK-8增殖实验表明,ACSL5过表达的AGS、HGC27细胞增殖能力显著高于空载对照组;ACSL5敲减的AGS细胞增殖能力较空载对照组显著减弱。Ed U荧光染色增殖实验表明:ACSL5过表达的AGS及HGC27细胞增殖能力显著高于空载对照组(P=0.002,P=0.005)。ACSL5敲减的AGS细胞增殖能力较空载对照组显著减弱(Si-301 vs Si-con:P<0.001;Si-2183 vs Si-con:P=0.001)。(3)ACSL5促进胃癌细胞迁移侵袭划痕愈合实验表明:ACSL5过表达的AGS及HGC27细胞伤口愈合百分比均显著高于空载对照组(P<0.001,P=0.009),ACSL5敲减的AGS细胞伤口愈合百分比均显著低于空载对照组(Si-301 vs.Si-con:P<0.001;Si-2183 vs.Si-con:P=0.009)。Transwell迁移实验表明:ACSL5过表达的AGS及HGC27细胞发生迁移的穿膜细胞数量显著高于空载对照组(P=0.006,P<0.001),ACSL5敲减组AGS细胞发生迁移的穿膜细胞数量显著低于空载对照组(Si-301 vs.Si-con:P=0.001;Si-2183 vs.Si-con:P=0.005)。Transwell侵袭实验表明:ACSL5过表达的AGS及HGC27细胞发生基质胶侵袭的穿膜细胞数量显著高于空载对照组(P=0.015,P<0.001),ACSL5敲减的AGS细胞发生基质胶侵袭的穿膜细胞数量显著低于空载对照组(Si-301 vs.Si-con:P<0.001;Si-2183 vs.Si-con:P<0.001)。2、ACSL5组织原位表达与胃癌发病风险、临床病理参数及预后的关系(1)胃癌组织ACSL5 m RNA水平表达特征利用GEPIA数据库比较了408例胃癌组织与211例胃正常组织中ACSL5m RNA表达水平的差异,发现胃癌组织ACSL5表达显著高于胃正常组织。进一步,30对胃癌与远端正常组织ACSL5 m RNA表达配对分析结果显示,胃癌组织ACSL5表达显著高于癌旁正常组织(P=0.003),平均FC值为2.54倍。(2)ACSL5蛋白在不同胃疾病中表达特征ACSL5蛋白在细胞质中表达。胃癌组织ACSL5蛋白表达高于癌旁IM-GA(P<0.001)和远端正常组织(P<0.001)。不同胃疾病中,由NAG→IM-GA→GC,ACSL5蛋白逐渐显著升高(NAG vs.IM-GA,P=0.01;IM-GA vs.GC,P<0.001)。(3)ACSL5蛋白表达对不同胃疾病的诊断价值绘制ROC曲线,评估ACSL5表达对GC和IM-GA的诊断价值,结果表明,ACSL5表达具有良好的GC(AUC=0.853,P<0.001)和IM-GA(AUC=0.641,P=0.012)诊断价值。(4)ACSL5蛋白表达与胃癌临床病理参数的相关性ACSL5蛋白表达与H.pylori感染呈正相关(P=0.014)。ACSL5蛋白在早期胃癌中表达显著高于进展期胃癌(P=0.038),在肠型胃癌中表达显著高于弥漫型癌(P=0.038),中高分化胃癌中表达高于分化较差的胃癌(P=0.022),在T1及T2期胃癌中表达高于T3及T4期胃癌(P=0.010),在无周围神经侵犯的胃癌中表达高于有神经侵犯的胃癌(P=0.022)。(5)ACSL5蛋白表达与胃癌预后的相关性Kaplan-Meier曲线显示,ACSL5高表达与低表达的GC患者总体生存期无显著差异。研究结论:1、H.pylori感染影响胃癌患者代谢表型,与血脂、血压、血糖异常相关,与Met S发病率升高呈正相关。2、H.pylori感染影响胃癌组织和胃癌细胞代谢表型,差异代谢物主要富集于脂肪酸代谢途径。3、H.pylori以时间和浓度依赖性方式上调脂肪酸代谢关键酶ACSL5表达,介导胃癌细胞脂肪酸活化及能量代谢异常。4、脂肪酸代谢关键酶ACSL5具有促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的生物学功能;ACSL5表达按NAG-IMGA-GC的顺序逐渐升高,ACSL5蛋白表达可作为胃癌/萎缩性胃炎诊断标志物,与H.pylori感染及胃癌临床病理参数相关、与预后无关。

目的 探讨不同阿片类药物靶控输注对宫颈癌根治术患者麻醉苏醒质量、Th17/Treg的影响。方法 选取宫颈癌患者106例，根据治疗方案不同分为芬太尼组（n=53）和瑞芬太尼组（n=53）。芬太尼组于术中靶控输注芬太尼，瑞芬太尼组靶控输注瑞芬太尼。比较两组麻醉诱导前15miNSC 119875溶解度n(T0）、non-immunosensing methods术中15min(T1）、术中30min(T2）、术后15min(T3）应激反应，T0、T2、术后6h(T4）、术后12h(T5）免疫功能[成熟T淋巴细胞（CD_3~+）、辅助性T细胞17(Th17）/调节性T细胞（Treg）、诱导性T细胞（CD_4~+）、抑制性T细胞（CD_8~+)],T0、T3、术后30min(T6）视觉模拟量表评分（VAS）及麻醉苏醒质量。结果 应激反应：T1、T2时与芬太尼组比较，瑞芬太尼组心率、收缩压、舒张压、平均动脉压较高，且瑞芬太尼组各指标波动幅度较小（P<0.05）。免疫功能：T2、T4、T5时瑞芬太尼组CD_3~+、Th17/Treg、CD_4~+水平较芬太尼组高，CD_8~+水平较芬太尼组低（P<0.05）。VAS评分：T0、T3、T6时两组VSA评分比较无显著差异（P>0.05）。麻醉苏醒质量：与芬太尼组比较，瑞芬太尼组术后自主呼吸恢复时间、睁眼时间、拔管时间较短（P<0.LEE011核磁05）。结论 相比于宫颈癌根治术中靶控输注芬太尼，瑞芬太尼更能降低机体应激反应，减轻免疫抑制，提升麻醉苏醒质量。

目的：探讨糖尿病肾脏病(DKD)肾阳虚证与线粒体损伤的相关性。方法：选择符合诊断标准的DKD患者56例，糖尿病(selleckchem LaduviglusibDM)患者28例，采集所有受试者临床资料，依据中医肾阳虚证诊断标准将DKD患者分为肾阳虚证组与非肾阳虚证组，hepatocyte-like cell differentiation采用酶联免疫吸附法检测血清线粒体损伤指标三磷酸腺苷(ATP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),进行统计分析。结果：与DM组相比，DKD组血红蛋白、肾小球滤过率、总胆固醇水平明显更低，血肌酐、尿素氮水平明显更高；线粒体损伤指标ATP、SOD水平随DM病情发展呈降低趋势，MDA水平呈升高趋势；ATP与SOD呈正相关，与糖化血红蛋白呈负相关，MDA与血红蛋白、白蛋白、肾小球滤过率呈负相关，与尿素氮、血肌酐呈正相关。与DKD非肾阳虚证组相比，DKD肾阳虚证组血红蛋白、血清白蛋白、肾小球滤过率水平明显更低，尿素氮、血肌酐水平明显更高；线粒体损伤指标ATP、SOD水平明显更低，MDA水平明显更高；DKD肾阳虚证积分与ATP呈负相关，与MDA呈正相关。结论：随着DM患者肾功能下降，线粒体损伤程度加重，线粒体损伤可能参与了DM到DKD的发展。肾阳虚此网站证积分与线粒体损伤指标MDA、ATP的表达存在一定的相关性。

马勃Lasiosphaera seu Calvatia是真菌类中药，始载于《名医别录》，具有消肿、止血、解毒等功效，外治鼻衄和创伤出血，常以粉末形式外用。为了深入研究中药马勃活性物质基础和创面治疗作用，作者对近年来国内外有关马勃的报道进行综述，结合现代创面研究推测其效应成分，整理马勃与创面修复相关的药理活性，并通过创面愈合原理推测马勃用于创伤治疗的机制。马勃化学成分种类丰富，目前共鉴定出100多种化合物，包括甾体类化合物、萜类及挥发油、蛋白质及多肽、氨基酸、酰胺类化合物、醌类化合物、脂肪酸及酯、多糖等，多成分在创面愈合的全过程发挥协同起效的作用。药理作用主有止血、抗炎、促细胞增殖、抗脂质过氧化、抑菌、降血糖等。然而，马勃药材的应用现状Galunisertib体内实验剂量仍然存在一些问题，目前缺乏针对不同产地、品种马勃的成分含量测定要求，马勃的创面修复活性尚未探索完全，临床使用的马勃制剂存在难于购买PF-03084014储存、皮肤滞留时间短、易滋生细菌、稳定性差和生物利用度低等问题。因此，作者对马勃应用于Transfection Kits and Reagents创伤治疗的前景进行展望，提出亟需完善马勃药材质量控制标准、阐明马勃用于创伤修复治疗的药理作用、与适宜敷料相结合以及设计适宜剂型是未来开发利用马勃的重要任务，以期在创面治疗领域对马勃资源进行合理的开发利用。

目的 探讨异丙酚预处理内皮细胞来源的外泌体(p-exo)对氧化应激诱导H9C2心肌细胞坏死凋亡的影响。方法 采用超高速离心法制备不同浓度异丙酚与人脐静脉内皮细胞(HUVECS)共孵育上清外泌体标准品,并通过透射电镜(TEM)、纳米颗粒示踪分析(NTA)及表面标志物CD63、CD9等蛋白E-616452供应商免疫印迹(WB)对外泌体进行结构分析鉴定。通过过氧化氢(H_2O_2),处理H9C2心肌细胞建立缺血再灌注氧化应激损伤模型,再用PKH67标记外泌体,采用激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取内化外泌体的过程,按照是否加入外泌体随机分为5组:对照组(NC)、H_2O_2处理组、H_2O_2处理后加入无异丙酚处理内皮细胞来源的外泌体(H_2O_2+nc-exo)、H_2O_2处理后加入异丙酚处理内皮细胞来源的外泌体组(H_2O_2+p-exo)及H_2O_2处理后加入异丙酚溶剂DMSO处理的内皮细胞来源的外泌体组(H_2O_2+d-exo)。外泌体处理后的细胞活性通GSK1349572过CCK-8试剂盒进行测定,同时采用透射电子显微镜观察细胞的损伤程度,细胞坏死性凋亡和相关蛋白的变化则通过Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)染色和Western Blot进行分析测定。结果 NTA示异丙酚处理p-exo浓度约2.54×10~(10) particles/mL,其形貌为双层膜囊泡,直径约为97 nm。与NC组相比,通过H_2O_2(500μmol/L)处理2 h后建立的H9C2心肌细胞缺血再灌注氧化应激损genetic stability伤模型中的心肌细胞活性显著降低(P <0.001)。而当引入15 μg/100 μL浓度p-exo后心肌细胞活性较前明显恢复(P <0.001),同时心肌细胞坏死性凋亡减少(P <0.01),受体相互作用蛋白(RIP)1(P <0.05)、RIP3(P <0.01)及混合谱系激酶结构域蛋白(mLKL)表达(P <0.01)降低,胞膜上p-mLKL蛋白表达降低(P <0.05)。结论 异丙酚处理HUVECS来源p-exo可以通过下调心肌细胞中坏死性凋亡蛋白RIP1、RIP3、mLKL及胞膜上p-mLKL蛋白表达来有效地减少氧化应激诱导的H9C2心肌细胞坏死凋亡。

目的:基于文献报道,挖掘益肾祛瘀法相关方药治疗慢性肾脏病的用药规律,并探索其可能的作用机制。方法:1.以“益肾”、“祛瘀”、“慢性肾脏病”为主题词检索中国知网、万方数据库、维普数据库,依据纳入与排除标CCRG 81045核磁准对文献进行筛选,规范化处理药物名称后将数据导入中医传承计算平台V3.0,选择相应版块进行药物应用频次、用药类别、四气、五味、归经的频次统计,设置置信度及支持度后获得关联规则结果,运用k-means聚类算法获取聚类分析结果,综合分析获得益肾祛瘀法治疗慢性肾脏病的核心处方。2.将核心处方中所含药物依次导入TSMSP数据库进行活性成分查找与靶点预测,在Genecards、TTD、OMIM、Pharm Gkb、Drug Bank数据库检索获取“慢性肾脏病”相关疾病靶点并进行筛选与合并,利用R软件取药物与疾病靶点交集,利用Cytoscape3.9.1构建益肾祛瘀核心方-成分-靶点-慢性肾脏病调控网络,运用STRING数据库获取其蛋白互作关系并构建蛋白互作网络,再应用R软件进行GO与KEGG富集分析。结果:1.依据纳入与排除标准,获得有效文献176篇,药物使用261味。2.药物频次统计显示前6位中药为:黄芪(82.4%)、丹参(68.2%)、茯苓(45.5%)、川芎(44.9%)、山药(43.2%)、山茱萸(42.0%)。药物功效类别以补虚类(38.4%)和活血化瘀类(22.4%)为主。四气分析结果由高到低依次为:温(38.9%)、平(31.1%)、寒(27.1%)、热(2.2%)、凉(0.6%)。五味统计结果由高到低依次为甘(42.8%)、苦(28.6%)、辛(17.3%)、酸(7.3%)、咸(4.0%)。归经统计结果以肝经(22.7%)、脾经(18.2%)、肾经(16.4%)用药显著。3.关联规则结果显示核心药物组合前五位分别是:黄芪-丹参(102次)、黄芪-茯苓(70次)、黄芪-山药(66次)、黄芪-川芎(62次)、黄芪-山茱萸(62次)。4.聚类分析共获得5个核心组方。并根据关联规则与聚类分析结果综合评价获得核心处方组成:黄芪、丹参、茯苓、川芎、山药、山茱萸。5.网络药理学研究结果显示益肾祛瘀法治疗CKD的核心活性成分以槲皮素、木犀草素、山奈酚、丹参酮ⅡA、隐丹参酮等为主,调控的核心靶点以TNF、CASP3、IL10、IL6、IL1B、CXCL8、STAT3、PTGS2、TP53、MMP9、VEGFA、HIF1A、CCL2、EGF常见,主要通过影响AGEs-RAGE、流体剪切应力与动脉粥样硬化、脂质和动脉粥样硬化、PI3K/AKT、TNF、HIF1、IL-17、多种肿瘤及多种病毒感染的通路信号传导发挥作用。结论:1.益肾祛瘀法治疗CKD用药以甘温为主,多归肝、脾、肾经,以补虚药及活血化瘀药最多见,核心处方组成为黄芪、丹参、茯苓、川芎、山药、山茱萸。2.益肾祛瘀核心方可能通过槲皮素、木犀草素、山奈酚、丹参酮、隐丹参酮等活性成分调节PTGS2、TNF、IL-6、IL-10、STAT3、MMP9、CXCL8、TP53等细胞因子表达,调控AGEs-RAGE、流体剪切应力与动脉粥样硬化、脂质和动peptide immunotherapy脉粥样硬化、PI3K/AKT等信号通路发挥抗炎、抗氧化应激、抗动脉粥样硬化及抗纤维化等作selleckchem VE-822用,延缓CKD进展。

目的 探讨不同周期的高脂血症大鼠模型的血脂水平及氧化应激水平，科学地分析其变化规律。方法 SD大鼠随机分为对照组(正常饮食饮水)和处理组(正常饮水，给予高脂饲料喂养：基础饲料+15%猪油+20%蔗糖+1.2%胆固醇+0.2%胆酸钠),两个组别在分为0、15、30、60和90 d 5个小组，观察记录动物的一般状态，在不同的时间节点处理动物，取血清、检测血脂水平和氧化应激水平，肝称重，计算肝系数，部分肝置于4%多聚甲醛中，进行HE组织病理学染色，部分肝组织匀浆，检测血脂水平。结果 模型组动物被毛暗淡无光泽，出现脱毛、行动迟缓的状态；体质量自15 d增长较为明显，肝系数自30 d开始明显增加，与对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.05);模型组30 d和60 d血清中TG和CHO明显的升高，差异具有统计学意义(P<0.05),但90 d的TG与对照组相比，差异并无统计学意义；处理组自15 d开始血清中MDA升高，SOD明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05);T-AOC自30 d开始明显降低，差异selleck合成具有统计学意义(P<0.05)。处理组动物的肝组织自15 d开始，淋巴细胞聚集，肝细胞肿胀变性，细胞medial elbow核挤向一侧，直到90 d肝索排列紊乱，肝细胞肿胀，发生脂肪变性，胞质内有大小不等的空泡肝血窦受压变形等病理改变。结论 高脂血症动物模型成模率较高，但在药物预防和治疗作用的研究与分析中，应考虑到代谢的变化和周期的长短，除了血清指标外，建议增加组织和其他代谢酶活性的检测指标，更科学地分NSC 127716配制析药物的作用。

目的：探讨冠心病合并幽门螺杆菌(Hp)感染患者血清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮素-1(ET-1)、白细胞介素-17(IL-17)的表达水平。方法：选取2017年1月—2022年5月MC3体内昌邑市人民医院收治的冠心病患者80例作为研究对象，均进行13C-尿素呼气试验，按照Hp感染情况分为Hp阳性组(n=42)与Hp阴性组(n=38)。收集患者资料，检测MMP-2、ET-1、IL-17水平，分析3种因子水平的影响因素，并分析MMP-2水平与ET-1、IL-17水平的关系。结果：Hp阴性组血清MMP-2、ET-1、IL-17水平低于Hp阳性组，差异有统计学意义(P<0.001)。不同Hp感染时间、冠心病确诊时间患者MMAM-2282说明书P-2、ET-1、IL-17水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；多支血管病变患者MMP-2、ET-1、IL-17水平高于单只血管Mutation-specific pathology病变患者，差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-2水平与ET-1、IL-17水平呈正相关(r=0.287,0.283,P=0.013,0.014)。结论：冠心病合并Hp感染患者血清中MMP-2、ET-1、IL-17水平升高，MMP-2水平与ET-1、IL-17的表达呈正相关，且3种因子高表达易导致患者出现多支血管病变。

旨在探究bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响。本研究采集3日龄（n=3）与13月龄（n=3）健康公牛的睾丸组织，构建安格斯牛组织表达谱，验证了bta-miR-101在两个时期显著差异表达Emricasan。利NSC125066使用方法用在线工具（TargetScan、miRTarBase、miRDB及miRWalk）预测miR-101的靶基因，并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析。将miR-101的模拟物与抑制物分别转染至牛睾丸支持细胞中，利用RT-qPCR、Western Blotting以及CCK-8等技术检测细胞增殖、凋亡及分泌相关基因表达量以及细胞增殖系数。通过4种在线软件预测到26个bta-miR-101的共同靶基因soft tissue infection，GO和KEGG通路富集分析发现这些基因主要富集在核质、蛋白质结合、JAK-STAT 的受体信号通路上，这些信号通路与细胞分化、细胞周期、细胞凋亡等生物过程有着不同程度的关联。RT-qPCR结果显示bta-miR-101在牛初生期睾丸组织中的表达量显著高于性成熟时期（P<0.05），与实验室前期测序结果一致。转染miR-101的模拟物与抑制物后，发现相较于对照组，miR-101 mimics可以促进增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量，并显著升高支持细胞的增殖系数，同时抑制凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量（P<0.05）；miR-101 inhibitor可以抑制增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量，同时促进凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量（P<0.05）。在细胞分泌方面，miR-101对分泌标志基因GNDF、BMP4的转录有影响，但对雄激素结合蛋白的分泌影响不显著。综上所述，miR-101促进牛睾丸未成熟支持细胞的增殖并抑制其凋亡，对雄激素结合蛋白的分泌无显著影响。