DUB信号通路

目的 探讨剖宫产产妇术后静脉自控镇痛(PCIA)期间集束化疼痛管理的效果。方法 回顾性分析濮阳市中医医院妇产科2021-04—2022-07行剖宫产手术的74例产妇的临床资料，分为2组，每组37例。术后2组产妇均给予PCIA镇痛。对照组实施常规疼痛护理及健康教育，观察组联合集束化疼痛管理。采用视觉模拟评分法(VAS)评估2组产妇术后6 h、24 h、48 h的疼痛程度。记录术后48 h内PCIA镇Lorlatinib痛药使用量，以及肠蠕动恢复时间和首次泌乳时间。统计镇痛不全或过度、恶心呕吐，皮肤瘙痒相关不良反应发生率。出院时参考纽卡斯尔护理服务满意度量表(NSNS)评价产妇及家属对镇痛管理工作的满意度non-coding RNA biogenesis。结果 观察组产妇术后6 h、24 h和48 h的VAS评分和术后48 h内PCIA镇痛药使用量低于对照组，术后肠蠕动恢复时间和首次泌乳时间短于对照组，与PCIA镇痛的相关不良反应发生率低于对照组，产妇及家属对镇痛管理工作的满意率高于对照组。以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 对剖宫产术后采用PCIA镇痛的产妇加强集束化疼痛管理，能提高术后镇痛效果，促进产妇胃肠功能恢复和早期泌乳，减少PCIA镇痛相关不良反应发生率，提升产妇及家属对镇痛NSC 127716化学结构护理效果的满意度。

目的 探究西维来司他对小鼠急性肺损伤诱导的线粒体功能障碍及炎症反应的影响及可能机制。方法 30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、急性肺损伤组和西维来司他组，每组indirect competitive immunoassay10只。HE染色观察各组小鼠肺组织病理学改变；试剂盒及荧光显微镜观察各组小鼠ROS水平和线粒体膜电位；ELISA检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β和IL-6水平；Western blot检测各组小鼠LXH254肺组织线粒体和细胞质Drp1蛋白以及Mfn2、PPARγ、PGC1α和NRF2蛋白表达水平。结果 西维来司他处理改善急性肺损伤小鼠肺组织病理损伤，降低肺组织ROS水平，增加肺组织线粒体膜电位，下调肺组织线粒体Drp1蛋白表达并上调肺组织细胞质Drp1蛋白和细胞中Mfn2、PPARγ、PGC1α和NRF2蛋白表达水平，降低支气管肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结论 西维来司他改善急性肺损伤诱导的线粒体功能障碍，降低炎症反应并改善肺损伤，其机制Torin 1说明书可能与激活PPARγ/PGC1α/NRF2信号通路有关。

目的探讨剪切波弹性成像（shear wave elastography,SWE）评估Ig A肾病（Ig A nephropathy,Ig AN）患者肾损伤程度的临床应用价值。方法选取2019年1月至2022年8月于浙江中医药大学附属杭州市中医院就诊的Ig AN患者152例，根据慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）分期将其分为轻度组（CKD 1～2期，n=54）、中度组（CKD 3期，n=47）和重度组（CKD 4～5期，n=51）。另选取健康体检者50例纳入对照组。应用SWE检测四组受检者的肾实质弹性模量均值（E_(mean)）并进行比较，绘制受试者操作特征曲线（receiver operator characteristic curve,ROC曲线）评价SWE对Ig AN肾损伤的诊断价值，selleck激酶抑制剂采用Pearson相关性分析探讨肾实质E_(mean)与临床指标的相关性。结果四组受检者的E_(mean)皮质、E_(mean)髓质比较差异均有统计学意义（P<0.05）。轻度组、中度组、重度组患者的E_(mean)皮质、E_(mean)Medullary thymic epithelial cells髓质均显著高于对照组，且随着CKD的进展，E_(mean皮质)、E_(mean髓质)呈逐渐增大趋势，即重度组>中度组>轻度组>对照组（P<0.05）。ROC曲线显示，Ig AN患者E_(meanDocetaxel分子式)皮质的诊断界值为7.25k Pa时，曲线下面积、敏感度、特异性分别为0.954、88.6%、92.3%;E_(mean)髓质的诊断界值为4.95k Pa时，曲线下面积、敏感度、特异性分别为0.959、92.9%、85.0%。E_(mean皮质)与血清白蛋白、血清肌酐、血尿酸、血清胱抑素C均呈正相关，与血红蛋白、肾小球滤过率均呈负相关（P<0.05）。E_(mean髓质)与血清白蛋白、血清肌酐、血尿酸均呈正相关，与尿微量白蛋白、血红蛋白均呈负相关（P<0.05）。结论SWE技术可无创定量评价Ig AN患者的肾损伤程度，为动态监测疾病进展、评估临床干预效果及调整治疗方案提供依据。

目的 探讨常规此网站西药、益胃活血汤剂联合荜铃胃痛颗粒治疗幽门螺Soil remediation杆菌(HP)相关性胃炎的效果。方法 选取2021年6月—2022年12月廊坊市人民医院消化内科诊治的气滞血瘀型HP相关性胃炎患者200例，采用随机数字表法将其分为联合组、中药颗粒组、中药汤剂组及西药组，每组50例。西药组患者采用临床常规西药治疗，中药颗粒组在西药组基础上应用荜铃胃痛颗粒治疗，中药汤剂组在西药组基础上应用传统益胃活血汤剂治疗，联合组患者在西药组基础上加用荜铃胃痛颗粒与传统益胃活血汤剂治疗。比较各组症状缓解时间、临床疗效、胃镜下胃黏膜病变积分、T淋巴细胞亚群水平、HP根除率及用药安全性。结果 与西药组相比，联合组疗效及HP根除率更高，用药不良反应更少(P<0.05)。与西药组、中药颗粒组、中药汤剂组相比，联合组各症状缓解时间均更短，且中药颗粒组、中药汤剂组短于西药组(P<0.05)。治疗后，4组CD3、CD4、CD4/CD8水平较治疗前上Barasertib体内实验剂量升，CD8水平较治疗前下降，联合组CD3、CD4、CD4/CD8治疗后水平高于其他3组治疗后，胃镜下胃黏膜病变积分及CD8水平低于其他3组治疗后(P<0.05)。结论 常规西药、益胃活血汤剂联合荜铃胃痛颗粒用于气滞血瘀型HP相关性胃炎治疗中，其疗效优于三种药物单一应用，患者症状缓解时间明显缩短，HP根治术显著提升，患者免疫功能有效改善，且用药安全性高。

目的 探讨参芪举陷方联合电针治疗重症Q-VD-Oph肌无力的临床疗效。方法 将95例重症肌无力患者分为对照组48例和研究组47例。对照组脱落4例，剩余44例患者进行西药常规治疗。研究组脱落3例患者，剩余44例患者，在对照组基础上运用参芪举陷方联合电针治疗。对比两组患者治疗1个月后的治疗效果。运用重症肌无力绝对和相对评分(absoluteand relative score of myasthenia gravis, ARS-MG)和定量评分(quantitative myasthenia gravis score, QMGS)评估患者病情变化。检测两组血清中乙酰胆碱受体抗体、连接素抗体、白细胞介素12(interleukin 12,IL-12)、IL-17、IL-21的水平。运用重症肌无力生活质量量表(myasthenia gravis quality omarine biotoxinf life scale 15,MG-QOL15)评估患者生活质量的变化。结果 患者在治疗1个月后，研究组的总有效率为93.18%,明显高于对照组的77.27%(P<0.05)。治疗后，两组的ARS-MG、QMGS显著降低，且研究组的ARS-MG、QMGS低于对照组(P<0.05)。两组患者在治疗后的乙酰胆碱受体抗体、连接素抗体明显低于治疗前，且研究组较对照组更低(P<0.05)。治疗后，两组的IL-12、IL-17、IL-21显著降低，且研究组的IL-12、IL-17、IL-21低于对照组(P<0.05)。两组治疗后的MG-QOL15显著降低，且研究组较对照组降低更明显(P<0.05)。结论 参芪举陷方联合电针可提高西药常BYL719 IC50规治疗重症肌无力的疗效，显著降低临床症状，控制病情发展，降低炎症反应，改善患者生活质量。

目的 探讨分析康复新液在幽门螺杆菌感染性胃溃疡中的应用效果。方法 选取2021年1月至2022年1月确山县人民医院收治的89例幽门螺杆菌感染性胃溃疡患者作为研究对象,并按照随机数表法将其随机分为观察组(45例)和对照组(44例)。观察组患者采用康复新液联合泮托拉唑治疗,对照组患者单纯采用泮托拉唑治疗,对比观察两组患者血清炎症因子及免疫相关指标水平、临床疗效与不良反应发生情况。结果 治疗14 d后,观察组患者血清C反应蛋白(CRP)、白细next steps in adoptive immunotherapy胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均明显低于对照组(t=3.889、4.223、3.541,P均<0.001),CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平均明显高于对照组(t=3.689Pevonedistat说明书、3.461、4.364,P均<0.001);观察组患者临床疗效为优15例、良22例、可4例、差4例,明显优于对照组患者的临床疗效为优10例、良13例、可10例、差11例(Z=-2.462,P=0.014)。治疗期间,观察组患者不良反应发生率为8.89%AZD1152-HQPA供应商,与对照组患者的不良反应发生率11.36%无明显差异(χ~2=0.150,P=0.699)。结论在口服泮托拉唑的基础上联合应用康复新液治疗幽门螺杆菌感染性胃溃疡,可有效提高患者免疫功能,降低炎症反应水平,促进溃疡创面愈合,疗效显著。

目的:天麻先蒸制后干燥的产地加工方法从宋代一直沿用至今,2020版《中国药典》规定天麻的产地加工方法为“立即洗净,蒸透,敞开低温干燥”。由于天麻产地加工过程的生化反应及作用机理不清,导致在实际的生产中并未形成一套规范的天麻产地加工方法,导致天麻药材质量参差不齐。本课题旨在研究天麻产地加工对其化学成分及抗炎活性的影响,阐明天麻抗炎的药效物质基础和作用机制,从而揭示天麻产地加工的科学内涵,为规范天麻产地加工,提升天麻药材品质提供理论支持。方法:1、天麻产地加工对化学成分的影响研究。采用控制变量法,建立了5种天麻加工方法,其中(1)45 ℃烘干vs.蒸制+45 ℃烘干:考察蒸制时的高温对酶和化学成分的影响;(2)45 ℃烘干vs.超高压灭酶+45 ℃烘干:考察直接烘干时水解酶对化学成分的影响;(3)超高压灭酶+蒸制+45 ℃烘干vs.超高压灭酶+45 ℃烘干:考察高温对化学成分的影响;(4)超高压灭酶+45 ℃烘干vs.超高压灭酶+冻干:考察低温干燥对化学成分的影响。建立5种天麻加工品的HPLC指纹图谱,确定共有峰;然后采用聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘—判别分析(OPLS-DA)对5种加工样品进行聚类,并分析其差异性成分;最后对5种天麻加工品中的主要成分进行含量测定。从化学角度阐明天麻产地加工过程中的高温蒸制和低温烘干对天麻品质的影响。2、天麻蒸制过程中化学成分的“时间—空间—含量”变化规律研究。选取5块天麻分别蒸制0 min、2 min、4 min、6 min、8min,室温下放置24 h后切片;优化喷涂基质,建立一种对天麻中的酚类成分高覆盖可视化分析的基质辅助激光解析质谱成像(MALDI-MSI)方法,结合液—质联用(LC-MS)对不同蒸制时间下天麻切片中酚类化合物进行成像、鉴定和分析,研究天麻蒸制过程中酚类成分的“时间—空间—含量”变化;进行β-葡萄糖苷酶(β-GC)对天麻素(GAS)的体外酶解实验。3、天麻抗炎活性的谱—效关系研究。建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠小胶质细胞(BV-2)炎症模型,使用MTT法考察天麻不同提取部位的细胞毒性,以NO、TNF-α和IL-6为指标筛选天麻的抗炎活性部位,并比较天麻蒸制前后的抗炎活性变化;建立10批商品天麻活性部位的HPLC指纹图谱,标定其共有峰,并采用LC-MS对共有峰进行鉴定;采用偏最小二乘回归分析法(PLS)和灰色关联度法(GRA)建立谱—效关系,分析其化学成分与NO、TNF-α和IL-6分泌抑制作用的相关性,以确定天麻发挥抗炎作用的潜在物质基础。4、天麻发挥抗炎作用的药效物质确证及作用机制研究。测定潜在药效物质对LPS诱导的BV-2细胞炎症模型中炎症介质(NO、ROS、TNF-α、IL-6、i NOS和COX-2)水平,结合分子对接技术预测天麻发挥抗炎作用的相关信号通路及与关键靶点蛋白,并基于LPS诱导的BV-2细胞炎症模型和蛋白质印迹技术(Western blot)进行体外验证,考察潜在药效物质对相关信号通路主要靶点蛋白表达的影响,对天麻发挥抗炎作用的化学成分及作用机制进行研究和确证。结果:1、系统的阐明了天麻产地加工对化学成分的影响。HPLC指纹图谱共标定了天麻素(GAS)、对羟基苯甲醇(4-HBA)、巴利森苷A(PA)、巴利森苷B(PB)、巴利森苷C(PC)和巴利森苷E(PE)为5组天麻样品的共有峰。HCA、PCA和OPLS-DA结果表明,直接烘干和蒸制后烘干的天麻样品分别聚为一类,而经超高压处理的3组天麻样品聚为一类,影响聚类的主要差异性成分为4-HBA和PA。含量测定结果表明,直接烘干的天麻中4-HBA含量显著高于其他处理组(P<0.001),PA和PE含量显著低于其他处理组(P<0.001);蒸制处理的天麻与超高压处理后再蒸制的天麻相比,PA含量较低(P<0.01);另外,烘干处理与冻干处理的天麻中的化学成分含量没有明显差异。说明蒸制可以灭活水解酶,抑制了巴利森苷类成分的降解;而蒸制时的高温也有促进PA转化的降解;另外低温烘干对巴利森苷类成分的降解作用不明显。2、直观呈现了天麻的酚类成分在蒸制过程中的“时间—空间—含量”变化。实验优化得到1,5-二氨基萘(1,5-DAN)作为喷涂基质,利用基质辅助激光解析质谱成像技术可以在天麻切片中检测到13种酚类成分(包括11种巴利森苷类化合物),分别是PA、PT/PU、PK、PB/PC、PW、PJ、PE/PG、PD、4-HBA和CA。随着蒸制时间的增加,CA、4-HBA、PD和PW在切片中的分布由外向内逐渐减少,而PA、PT/PU、PK、PB/PC、PW和PE/PG等大分子巴利森苷在切片中的分布呈现出由外向内逐渐扩散的显著趋势。而天麻中的小分子成分是在羧酸酯酶(Car E)和β-葡萄糖苷酶(β-GC)的作用下由大分子巴利森苷通过断裂酯键和β-葡萄糖苷键形成的,这两种水解酶的失活时间与蒸至“透心”的时间一致。体外酶解实验表明蒸制可以灭活β-GC,抑制GAS的脱葡萄糖降解。以上结果均证明天麻在蒸制过程中可以灭活Car E和β-GC,从外向内保护巴利森苷。基于此,本研究还总结了巴利森苷在Car E和β-GC作用下的降解途径。3、证实了天麻经蒸制可以显著提高抗炎活性,GAS、4-HBA、PA、PB和PC是潜在活性物质。MTT结果表明天麻的70%乙醇提取物和二氯甲烷部位对BV-2细胞有细胞毒性。建立了LPS诱导的BV-2炎症模型,以NO、TNF-α和IL-6为指标,对天麻正丁醇相和水相进行抗炎活性筛选,发现正丁醇相抗炎效果较好,确定为天麻药用部位。以NO、TNF-α和IL-6为指标,对先蒸制后烘干和直接烘干的两种天麻样品的抗炎活性进行比较,结果表明经蒸制的天麻其抗炎活性显著提高。建立了10批商品天麻正丁醇相的指纹图谱,确定了12个共有峰,经LC-MS共鉴定得到11个成分,分别为4,4'-dihydroxybenzyl sulfoxide(峰1)、柠檬酸(峰2)、bis-(4-hydroxybenzyl)sulfide(峰3)、天麻素(峰4)、甲基柠檬酸(峰5)、对羟基苯甲醇(峰6)、巴利森苷E(峰8)、巴利森苷J(峰9)、巴利森苷B(峰10)、巴利森苷C(峰11)、巴利森苷A(峰12)。12个共有峰的峰面积结合10批商品天麻正丁醇相对LPS诱导的BV-2炎症模型NO、TNF-α和IL-6的释放抑制率,建立天麻正丁醇部位的抗炎作用谱—效关系。在PLS中,峰4、6、10、11与药效呈正相关,且VIP值大于1;在GRA中,12个共有峰与NO抑制作用密切相关的排名前5的是6>4>7>12>10;与TNF-α的分泌抑制作用密切相关的排名前5的是4>2>6>10>12;而与IL-6的分泌抑制作用密切相关的排名前5的是6>4>7>12>10。综合以上结果,峰4(GASTransperineal prostate biopsy)、峰6(4-HBA)、峰10(PB)、峰11(PC)和峰12(PA)为天麻正丁醇部位发挥抗炎活性的潜在物质基础。4C59、证明了PB的抗炎活性及其作用机制。PB可以抑制LPS刺激下BV-2CL 318952细胞炎症介质(NO、胞内ROS、TNF-α以及IL-6)的释放及i NOS的活性和COX-2的水平的提高,表明PB可减轻LPS引起的BV-2神经细胞炎症。Western Blot结果表明PB可以通过抑制LPS诱导的IKKβ、IκBα和p65的磷酸化,从而抑制LPS诱导的NF-κB信号通路的激活发挥抗炎作用。分子对接技术预测得到PB与AMPKα和SIRT1蛋白的结合能力良好,分别为-12.1 k J·mol~(-1)和-7.6 k J·mol~(-1),推测PB可能作用于AMPKα/SIRT1蛋白调控下游NF-κB炎症信号通路。Western Blot结果表明,LPS可以抑制AMPKα的磷酸化和SIRT1的表达,而PB可活化AMPKα和SIRT1靶点蛋白,通过抑制AMPK/SIRT1信号传导发挥抗炎作用。综上,PB通过激活AMPK/SIRT1通路,进而抑制NF-κB通路,发挥抗LPS诱导的BV-2神经炎症作用。结论:综上所述,天麻的产地加工具有抑制巴利森苷的酶促降解、促进化学转化的作用;其在蒸制过程中可以灭活水解酶,由外向内抑制大分子巴利森苷的降解。天麻的正丁醇部位是发挥抗炎作用的活性部位,且天麻经蒸制后抗炎活性显著提高,其潜在的药效物质基础是GAS、4-HBA、PA、PB和PC。其中PB通过激活AMPK/SIRT1通路,进而抑制NF-κB通路,发挥抗LPS诱导的BV-2神经炎症作用。本研究通过对“产地加工—成分变化—药理作用—品质形成”的关联研究,阐明了产地加工促进天麻品质形成的科学内涵,为建立科学、规范的天麻产地加工工艺和质量评价体系、基于天麻药效成分的新药研发提供理论依据,对推动中药学学科发展,促进中药农业高质量发展具有重要意义。

作为一种有害真菌,黄曲霉菌(Aspergillus flavus)极易侵染玉米、花生和小麦等粮食作物,不仅损害粮食品质,而且影响经济效益;易侵染人畜,导致人畜患曲霉病;更重要的是,黄曲霉菌可以产生大量有害的代谢物,其中黄曲霉菌毒素B_1(AFB_1)是最常见的一种,已被国际癌症研究机构列为Ⅰ类致癌物。针对黄曲霉菌的防控,目前常见的措施有:a.微波、辐射和光调控等物理方法;b.山梨酸钾、苯甲酸钠和臭氧等化selleckchem Fulvestrant学方法;c.拮抗菌及其产酶、芽孢菌及其产酶等生物方法。但上述方法因为操作难度高、易产生耐药性和应用度不高等缺点在使用过程中受到限制。植物源活性成分因绿色、高效和安全等优点,受到越来越多研究人员的关注。本文主要研究麝香草酚、香芹酚、邻香兰素、柠檬醛、丁香酚、石榴果皮和生姜精油(GEO)等不同来源的植物源活性成分对黄曲霉菌的抑制效果及生姜精油壳聚糖膜(GEO-C)在食品中的应用,主要研究结果如下:(1)从中草药中选取5种植物源活性成分,进行两两复配,筛选出当柠檬醛和丁香酚浓度为1/4MIC+1/4MIC时,其联合抑菌指数(FIC)为0.5,对黄曲霉菌具有协同抑菌作用。碘化丙啶(PI)染色实验表明柠檬醛与丁香酚结合会破坏黄曲霉菌细胞膜完整性;细胞内容物释放、相对电导率及细胞外pH值测定实验结果显示,细胞内核酸、离子等物质泄露以及胞外酸性物质含量较高;荧光白染色实验表明,黄曲霉菌菌丝内部隔膜遭到破坏;72 h时用1/4MIC+1/4MIC的柠檬醛和丁香酚处理花生,能完全抑制花生上黄曲霉菌的生长,为减少抑菌剂使用量,降低成本提供科学依据。(2)石榴果皮乙醇提取物可以抑制黄曲霉菌的生长。石榴果皮提取物抑制黄曲霉菌菌丝的最小抑菌浓度(MIC)为10 mg/mL。PI染色实验表明,石榴果皮提取物破坏黄曲霉菌细胞膜完整性且破坏程度与石榴果皮提取物浓度呈正相关;细胞内容物释放、相对电导率及细胞外pH值测定实验说明,随着石榴果皮提取物浓度的增加,OD_(260)和相对电导率升高,pH值降低,表明石榴果皮提取物提高黄曲霉菌细胞膜通透性,从而导致细胞内核酸、离子等物质的渗漏;细胞膜内总脂质含量降低,表明石榴果皮提取物破坏黄曲霉菌细胞膜成分;同时体外抑菌实验表明,石榴果皮提取物具有应用于食品保鲜的潜力,可以达到果皮废弃物再利用的效果。(3)以生姜为原料,通过水蒸气蒸馏法提取GEO,用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析GEO,共检测到104种化合物,其中含量最高的是α-姜油烯25.3%。GEO对黄曲霉菌接触抑菌的MIC为8μl/mL。P此网站I染色实验、细胞内容物释放实验、相对电导率和细胞外pH值测定实验结果表明,GEO破坏了黄曲霉菌细胞膜的完整性,导致细胞内核酸、离子和酸性物质的泄露;总脂质、麦角固醇含量测定实验表明,GEO破坏了黄曲霉菌菌丝细胞膜成分;在体外抑菌实验中,MIC组可完全抑制黄曲霉菌在花生和玉米上的生长。(4)将3 g壳聚糖溶于150 mL1.5%的冰醋酸中,40℃搅拌至完全溶解,加入0.45g吐温以及不同浓度的GEO和吐温80制备GEO-C。测定薄膜的厚度、溶胀度、水溶性、挥发性成分含量及透光率,结果表明膜厚度随GEO浓度的升高而显著升高,溶胀度、水溶性、挥发性成分含量及透过率随GEO浓度的升高显著降低;DPPH和ABST自由基清除率实验表明,随GEO浓度升高,GEO-C的自由基清除率显著上升,表明GEO-C具有抗氧化性。将GEO-C应用到花生酱中,并研究该膜在储藏期间对花生酱抑菌immune modulating activity效果、pH值、质构、酸价、过氧化值、硫代巴比妥酸和羰基含量的影响,同时与不做任何处理的花生酱进行对比,结果表明GEO-C能抑制花生酱中黄曲霉菌的生长,对pH值无明显影响,使花生酱粘性变小,降低脂质氧化速率和蛋白氧化速率,从而改善花生酱品质。

肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with RenalPS-341供应商 Syndrome,HFRS)是由汉坦病毒感染引起的急性传染病。HFRS呈全球性流行,严重危害社会和公共卫生,影响人类的健康与生命。中国是受HFRS威胁最严重的地区,全球90%的HFRS病例发生在我国,预防及治疗HFRS成为亟需解决的问题。根据汉坦病毒天然宿主的地理分布,在中国引起HFRS的主要病原体为汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV),而其感染机制尚未完全揭示。目前应对HFRS主要采取支持治疗,尚无FDA批准的疫苗或特异性抗病毒药物。因此,还需进一步加强对HTNV感染机制的认识。表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)是一种受体酪氨酸激酶(Receptor tyrosine kinase,RTK),广泛表达在全身的表皮细胞中。在配体的刺激下,可激活下游信号级联反应,调控细胞的增殖、生长及迁移。一系列研究表明,EGFR不仅与癌症的发Liproxstatin-1分子式生息息相关,还广泛参与多种病毒感染。许多病毒利用EGFR的内吞作用及其介导的信号通路,调控其入侵、复制过程或抵抗宿主内免疫反应,如HCV、ZIKV、HBV、TGEV、HCMV、HSV、IAV等。但EGFR与HTNV感染之间的关系,目前尚无研究报道。作者前期研究发现EGFR能影响HTNV子代病毒的产生,但其作用机制并不清楚。因此本课题通过揭示EGFR在HTNV感染过程中的作用,为抗HTNV特异性药物的筛选提供理论基础,具有重要的临床意义。EGFR影响HTNV子代病毒产生主要包含两方面,一方面是EGFR调控HTNV的入侵;另一方面是EGFR直接影响HTNV在细胞内的复制。为了进一步验证EGFR对HTNV子代病毒产生的影响,本课题首先利用HTNV感染过表达、敲低和敲除EGFR的稳转细胞,通过Western blot、RT-q PCR、空斑实验等方法发现过表达EGFR明显促进HTNV核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,NP)的表达、S节段的复制及子代病毒的产生;而敲低或敲除内源性的EGFR后均能抑制HTNV NP的蛋白表达、核酸复制及子代病毒产生。以上结果表明EGFR不仅影响HTNV子代病毒产生,而且调控HTNV NP蛋白在细胞内的表达及核酸复制。随后,本研究利用经典的病毒结合与进入实验,分别检测在4℃和37℃条件下结合到细胞表面与内化到细胞中的病毒量。结果显示过表达或敲低EGFR都不影响HTNV与宿主细胞结合,但是过表达EGFR时内化到细胞中的病毒增加;而敲低EGFR则内化的病毒减少,表明EGFR可能参与HTNV入侵环节。最后,作者利用HTNV感染过表达EGFR胞内结构域的稳转细胞株,检测到HTNV的复制水平依然升高,推测EGFR胞内区域可能参与HTNV复制。病毒minigene复制子系统是有效检测靶基因对病毒转录和复制影响的工具。作者利用汉滩病毒minigene报告系统,检测EGFR是否参与Research Animals & AccessoriesHTNV基因组的转录与复制过程。结果表明EGFR明显促进HTNV基因组的转录与复制,并且发现EGFR胞内区域的激酶结构域是促进病毒基因组转录与复制的关键结构域。EGFR K745是EGFR发挥激酶活性的关键氨基酸。作者通过过表达EGFR Cyto K745A突变体,发现K745A的突变能减弱EGFR胞内区域对HTNV复制的影响。埃罗替尼(Erlotinib)是一种特异性靶向EGFR激酶结构域的酪氨酸激酶抑制剂。在感染HTNV的A549细胞中加入不同浓度的Erlotinib,结果显示Erlotinib对HTNV复制的抑制呈剂量依赖性,表明EGFR的激酶活性对其功能的发挥具有重要作用。为了进一步探究EGFR增强HTNV复制的机制,作者检测了HTNV结构蛋白NP是否与EGFR相互作用。免疫共沉淀实验发现EGFR胞内结构域在瞬时转染和病毒感染时均与HTNV NP存在相互作用;并且通过免疫荧光也证实了EGFR与HTNV NP在细胞内存在共定位。分别利用EGFR和HTNV NP的截短突变体进行免疫共沉淀并结合GST pulldown实验,鉴定出EGFR的激酶结构域是与HTNV NP相互作用的关键结构域,且HTNV NP与EGFR的互作不依赖于其RNA结合功能域。上述结果表明EGFR可能通过其激酶区域与HTNV NP蛋白互作进而影响HTNV复制。综上所述,本研究发现EGFR促进HTNV复制;除了参与HTNV入侵外,EGFR主要依赖其激酶活性促进HTNV基因组转录与复制;并且揭示了HTNV NP与EGFR存在相互作用。这对揭示汉滩病毒感染的机制起到启示作用,也为治疗HFRS提供新靶点。

系统性红斑狼疮(SLE)是一种累及多脏器的自身免疫性immunity support疾病.研究表明,异常的肠道微生物群参与SLE的发生、发展Fulvestrant抑制剂；然而,作为肠道微生物群的成员之一,肠道病毒在SLE发病机制中扮演的角色尚不清楚.本研究招募了76名3月内未经糖皮质激素、免疫抑制剂干预的SLE患者,检测了他们粪便中游离病毒的组成,并将其病毒组特征与健康人进行比较. SLE患者肠道的噬菌体(寄宿细菌而非人体的病毒)较健康人增多,其中一些噬菌体的含量与SLE患者的临床表现及疾病活动具有相关性.肠道病毒及肠道菌群的组成也密切相关.将SLE相关的肠道病毒特征与肠道细菌特征结合起来建立的诊断模型能更很好地将SLE患者与健康人区分开来.值得注意的是,未经治疗干预的SLE患者其肠道病毒较正常人的肠道病毒更容易刺激免疫细胞及上皮细胞产生干扰素α,该分子是一种参与SLE发病机制的关GW4869溶解度键炎性因子,当SLE患者经过有效的免疫抑制治疗后,其肠道病毒诱导干扰素α的能力则受到抑制.综上,本研究为SLE的发病机制提供了一种新思路.