DUB信号通路

为了探明碱胁迫对杂交鲟鲟龙1号皮肤生理功能的影响，采用转录组测序的方法和皮肤组织学切片研究观察了碱Hepatic lineage胁迫与正常养殖水质条件下杂交鲟皮肤组织的分子特征和组织结构。结果发现，对照组与胁迫组差异表达基因总数量(DEGs)为1 849个，其中1 302个基因在胁迫组的皮肤组织中上调，547个基因下调。对差异表达基因进行GO聚类，主要富集在胞浆钙离子浓度的调节、肌肉收缩、肌钙蛋白复合物、肌钙蛋白T结合、肌钙蛋白C结合等7个GO term上。KEGG富集分析发现，甘氨酸、丝氨酸和苏Colforsin MW氨酸代谢，蛋白质的消化和吸收，淀粉和蔗糖代谢等为显著富集通路。代谢通路互作网络分析发现，碱胁迫下鲟龙1号皮肤核心代谢途径为黏着斑、蛋白质消化吸收和血小板活化GSK126分子量、补体和凝血级联及缺氧诱导因子-1信号通路等途径为主效途径。组织切片结果显示，杂交鲟在碱胁迫下皮肤组织和肾脏组织受到严重损伤，肾小球和肾小管发生明显皱缩，远曲小管萎缩尤为明显，肾小球上皮细胞体积减小，管壁变薄甚至脱落；皮肤组织的黏液细胞数量随碱度的升高而增多，棒状细胞细胞核发生固缩现象，在碱胁迫下排列更加紧密。揭示了鲟龙1号皮肤组织碱胁迫响应相关基因的总体表达特征，同时可为鲟鱼盐碱驯养提供参考。

目的:探讨芹菜素对大鼠脑外伤(TBI)的保护作用及其机制。方法:72只雄性SD大鼠被随机分为对照组(24只)、TBI组(24只)和TBI+芹菜素组(24只),采用Feeney法自由落体打击装置建立大鼠TBI模型，TBI+芹菜素组在造模后每天腹腔注射芹菜素(40 mg/kg),持续3 d。取大鼠伤侧皮层，免疫组化检测神经微丝中链蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及离子钙接头蛋白抗体-1(Iba-1)的表达；Western blot检测紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1、Occludin-1的表达；伊文斯蓝及脑组织含水量检测血脑屏障通透性情况；ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)的水PLX4032临床试验平，利用丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测氧化应激水平。结果:与对照组相比，TBI组大鼠皮层中NF-M、GFAP、Iba-1、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA的表达均升高(均P<0.05);伊文斯蓝及脑组织含水量均增加(均P<0.05);Claudin-5、ZO-1、Occludin-1、SOD、CAT及GSH-Px的表达均降低(均P<0.05)。与TBI组相比，TBI+芹菜素组NF-M、GFAP、Iba-1、TNF-α、IL-1selleck Liraglutideβ、IL-6、MDA的表intestinal dysbiosis达均降低(均P<0.05);伊文斯蓝及脑组织含水量均减少(均P<0.05);Claudin-5、ZO-1、Occludin-1、SOD、CAT及GSH-Px的表达均升高(均P<0.05)。结论:芹菜素通过抑制胶质细胞活性，降低体内的炎症及氧化应激水平，保护血脑屏障，减轻大鼠TBI后的神经损伤。

大豆[Glycine max(Linn.)Merr.]有着丰富的营养价值和经济价值,是世界上非常重要的粮油饲兼用作物,近年来随着世界各国对大豆的产量需求越来越高,产需差距呈逐渐增大趋势,因此解决大豆的产量问题具有非常重要的意义。影响大豆产量的主要原因之一是大豆在生长发育期间养分供给受限,造成落花、落荚,从而不能有效形成果实,导致产量骤减。根部作为植物重要的营养器官,通过吸收土壤中水、无机盐和有机质等养分来保证植物的正常生长发育。大豆由于主根入土浅、侧根不发达的genetic parameter特性限制了大豆对于养分的吸收和利用的效率,因此本论文从大豆根系发育的角度进行研究可以为大豆高产育种提供理论和实践的依据。课题组在前期研究中鉴定到参与大豆侧根发育调控的GmIDL2a基因,并通过免疫共沉淀和酵母双杂交手段鉴定到GmI DL2a的互作蛋白GmHSL。GmHSL是一个类受体蛋白激酶,推断GmHSL作为受体蛋白与GmIDL2a共同参与大豆根系发育的调控,因此本论文针对GmHSL基因对其进行了生物信息学、表达模式和蛋白定位分析,并探索了基因的功能以及进行了筛选其下游互作蛋白的研究,获得如下结果。(1)通过生物信息学分析得知,GmHSL基因(Glyma.14G144300)CDS区长度为3099 bp,编码一种酸性、不稳定的亲水性蛋白;GmHSL蛋白具有催化结构域SPS1和S＿TKc;存在跨膜结构域和信号肽;预测GmHSL蛋白定位在细胞膜上;GmHSL基因启动子序列存在多个顺式作用元件,如光响应元件、生长PLX5622配制素响应元件等;GmHSL和野生大豆(Glycine soja)Gs HSL亲缘关系最近,在进化树上和蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)Mt HSL等11个蛋白属于同一分支。(2)通过RT-PCR分析了GmHSL的表达模式,结果显示,GmHSL基因在大豆根中高表达;大豆的根系发育和GmHSL的表达量受到IINCB28060使用方法AA、NAA、ABA、Na Cl、PEG的影响,IAA和NAA抑制大豆根的发育,并且影响GmHSL基因的表达量;ABA促进大豆根系发育且GmHSL的表达量受到ABA的诱导;在盐胁迫和干旱胁迫下,大豆的主根和侧根的发育都受到抑制,GmHSL的表达量也因受到盐胁迫和干旱胁迫而下调。(3)通过构建融合表达载体p Super1300-GmHSL-GFP,利用农杆菌介导的瞬时转化烟草叶片的方法,对GmHSL蛋白的亚细胞定位进行分析。结果表明GmHSL定位在细胞膜上,是一个膜蛋白。(4)通过构建超表达载体p CAMBIA3301-GmHSL和基因敲除载体Cas9-GmHS L,利用农杆菌介导的大豆遗传转化获得了转基因T_2代植株。与野生型相比,超表达GmHSL大豆植株主根显著变长,侧根数量显著增加,基因敲除型植株主根长度变短,侧根数量减少,说明GmHSL基因促进大豆主根伸长和侧根发生,能够参与大豆根系发育的调控。(5)通过构建大豆根cDNA文库,利用膜体系酵母双杂交方法筛选GmHSL下游的互作蛋白,共筛选到85个候选阳性克隆。通过对候选蛋白进行测序和分析,发现这些蛋白共由43个基因编码,除去假定蛋白和未知功能蛋白,主要包括磷酸丙糖转运蛋白、蛋白质糖基转移酶、类转运蛋白、水通道蛋白、琥珀酸脱氢酶等,其中参与植物根系的生长发育的水通道蛋白分别由3个不同的基因编码,推测GmHSL通过和水通道蛋白的相互作用调控大豆根系的生长发育。

肺癌是全球范围内死亡率第一,发生率第二的恶性肿瘤。肺癌分为小细胞肺癌(Small-cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)。当前国内外研究数据显示,非小细胞肺癌患者中表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)突变占据较大比例,EGFR突变主要集中于18-21号外显子,即酪氨酸激酶功能区。其中21号外显子L858R点突变和19号外显子缺失属于经典EGFR突变,20号外显子S768I点突变属于罕见EGFR突变。以往临床针对肺癌患者的治疗方案有手术治疗、化学治疗和放射治疗。当患者病情无法耐受手术治疗或术后病理提示癌灶转移时,化学治疗和放射治疗在一定程度上可以改善患者生存期。伴随临床研究的进一步发展,靶向治疗已经更加成熟,针对发生癌变的突变点进行靶向治疗,具备更为精准的治疗特点,是大多数肺癌患者的选择。酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKIs)被认为是针对EGFR突变的非小细胞肺癌的靶向治疗药物。目前有关EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGwww.selleck.cn/products/PF-2341066FR tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKIs)对罕见EGFR~(S768I)突变的敏感性的研究数据有限,研究EGFR-TKIs对复合突变体EGFR~(S768I+L858R)的敏感性更具挑战性。因此,本研究选取当前国内已上市的具有代表性的六种酪氨酸激酶抑制剂:阿法替尼(Afatinib)、达克替尼(Dacomitinib)、奥希替尼(Osimertinib)、厄洛替尼(Erlotinib)、吉非替尼(Gefitinib)、埃克替尼(Icotinib),并结合临床药物代谢动力学研究,选择稳态血药浓度对罕见性EGFR~(S768I)和EGFR~(S768I+L858R)突变的非小细胞肺癌进行敏感性分析。目的:本研究旨在分析六种Catalyst mediated synthesis酪氨酸激酶抑制剂对罕见性EGFR~(S768I)和EGFR~(S768I+L858R)突变的敏感性,并初步分析其作用机制,为临床非小细胞肺癌精细化治疗提供参考意见。方法:(1)以人肺癌细胞系H3255(本底为EGFR~(L858R)突变)为基础,利用CRISPR/Cas9基因编辑、慢病毒包装、转染等技术,经过杀稻瘟菌素和嘌呤霉素的筛选构建稳转细胞系H3255~(S768I)(EGFR~(S768I))和H3255~(S768I+L858R)(EGFR~(S768I+L858R))。(2)采用MTT、平板克隆形成、Ed U细胞增殖实验,研究六种酪氨酸激酶抑制剂对H3255(EGFR~(L858R))、H3255~(S768I)(EGFR~(S768I))和H3255~(S768I+L858R)(EGFR~(S768I+L858R))三种细胞系的活力以及增殖的影响;通过流式细胞术、线粒体膜电位与细胞凋亡实验、Caspase-3活性检测,进一步研究六种酪氨酸激酶抑制剂对H3255、H3255~(S768I)和H3255~(S768I+L858R)三种细胞系的凋亡影响。(3)采用Western blot检测六种酪氨酸激酶抑制剂处理之后,三种细胞系在Bad、Bcl-XL、HO-1凋亡基因上的调控以及在p-EGFR、EGFR、p-AKT、AKT、p-ERK、ERK等下游信号通路上的变化。结果:(1)流式细胞术验证H3255~(S768I)转染率为88.7%,H3255~(S768I+L858R)转染率为89.4%,荧光显微镜拍照验证H3255~(S768I)转染率为90.8%,H3255~(S768I+L858R)转染率为92.3%。(2)MTT结果显示六种酪氨酸激酶抑制剂抑制了H3255、H3255~(S768I)和H3255~(S768I+L858R)三种细胞系的细胞活力,且随着药物作用时间的延长,抑制作用更加明显(P<0.0001);平板克隆形成实验结果显示,酪氨酸激酶抑制剂处理之后,细胞集落的数目明显减少(P<0.0001);Ed U细胞增殖实验结果显示,在三种细胞系中,与对照组相比,酪氨酸激酶抑制剂组中细胞增殖的比率显著降低(P<0.0001);流式细胞术和线粒体膜电位与细胞凋亡检测实验结果显示,六种酪氨酸激酶抑制剂在三种细胞系中均促进了细胞的凋亡(P<0.0001);Caspase-3活性检测结果显示,在三种细胞系中,与对照组相比,酪氨酸激酶抑制剂组激活caspase-3活性,进一步促进细胞的凋亡(P<0.0001)。(3)Western blot在凋亡相关蛋白检测实验中,进一步验证了六种酪氨酸激酶抑制剂均可促进三种细胞系的凋亡;在下游相关信号分子蛋白检测结果中显示,六种酪氨酸激酶抑制剂对同一种突变表现出不同的信号作用途径,并且在不同的突变之间,其调控下游信号也存在差异。结论:六种酪氨酸激酶抑制剂均对罕见性EGFR~(S768I)和EGFR~(S768I+L858R)突变敏感,六种酪氨酸激酶抑制剂通过抑制细胞的细胞活力、细胞增殖、克隆能力来促进细胞的凋亡,但是通过调控不同的下游信号通路来发挥其抗肿瘤作用,对于EGFR~(S768I)selleck抑制剂突变和复合突变EGFR~(S768I+L858R)的患者,六种一线TKIs均是合理的治疗选择。

缺血性脑卒中（IS）是临床上较为常见的一类严重的脑血管疾病。针对其缺血损伤发生机制，通过静脉溶栓以恢复血流仍是临床上最主要最有效的治疗手段，但因静脉溶栓存在增加出血风险、治疗窗口狭窄、禁忌证多等弊端，使其在临床的应用受到限制。在未达到完全有效复流的同时，对缺血脑组织进行有效保护事关IS预后。研究发现，改善IS导致的脑损伤存在诸多通道机制，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路就是其中之一。而中医在治疗IS，尤其在改善缓解患者症状和提高生活质量方面，具有丰富的干预手段和独特优势。在IS发病后Cell Culture，中医药尽早介入其治疗、康复和预防复发的全过程可以充分发挥中西医协同治疗优势，保证患者获益最大化，对IS导致的神经功能和运动功能恢复具有重要临床意义。诸多研究表明，中药干预手段通过调控激活mTOR信号通路，以干预和调节细胞自噬、抑制神经细胞凋亡、抑制氧化应激和炎症反应等方式有购买Crizotinib效减轻IS导致的脑损伤，对实现脑保护、改善IS预后具有积极作用，为IS的防治提供了新的治疗策略和思路。该文基于此，对mPR-171作用TOR信号通路在IS发病中的作用机制以及近年来中药调控mTOR信号通路治疗IS的研究进展进行综述，以期为IS的中医药治疗提供新的治疗思路和系统的科学参考。

围产期高产奶牛能量负平衡（negative energy balance， NEB）易导致糖脂代谢紊乱疾病多发，如酮病，脂肪肝等，同时伴随着血液中非酯化脂肪酸（NEFA）升高和乳腺组织氧化损伤。荷叶碱（Nuciferine，NF）是荷叶的主要活性成分，而自噬可以调节细胞的氧化状态，尚不清楚NF对高NEFA引起的乳腺组织氧化损伤的影响及自噬参与机制。因此本研究旨在探讨NF对高NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）的氧化损伤的改善作用及潜在机制。试验分为两个部分，试验一：采用体外培养的奶牛乳腺上皮细胞（LBH589BMECs），用0或者1.2 mM的NEFA处理 24 h，分别添加0，100，200 μmol/L的NF处理12 h，通过流式细胞仪和试剂盒检测氧化损伤指标的变化；同时采用Western blot检测NF处理的BMECs的细胞自噬蛋白p62和LC3-II的表达丰度，并结合qRT-PCR检测自噬相关蛋白5(ATG5)和自噬相关蛋Cell wall biosynthesis白7(ATG7)的mRNA表达水平。结果显示，NF显著降低高NEFA诱导的活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）蓄积，同时提高谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性；此外，NF处理显著增加BMECs的LC3-II表达丰度，降低p62的表达，并显著上调自噬基因ATG5和ATG7的mRNA水平。上述结果表明NF可以增强BMECs自噬，并能够缓解高NEFA引起的BMECs氧化应激。试验二：用1.2mM NEFA诱导BMECs氧化损伤，添加0或100 μmol/L的NF处理，同时添加氯喹（CQ，一种自噬抑制剂），检测LC3-II和p62蛋白的表达丰度、ATG5和ATG7基因的mRNA水平的表达以及氧化损伤指标的变化。结果显示，NF处理显著降低高NEFA诱导的自噬蛋白p62表达，增加LC3-II的蛋白表达和自噬基因ATG5和ATG7的mRNA水平；经CQ处理后ATG5和购买JQ1ATG7的mRNA水平表达无显著变化，p62和LC3-II蛋白表达均上调，MDA水平显著增加，CAT酶活显著下降。综上结果表明，NF可通过增强自噬缓解高NEFA引起的BMECs氧化损伤。

目的 总结目前胃癌肝转移的分子机制和相关临床治疗的研究进展，为今后的治疗提供思路。检索近年来国内外有关胃癌肝转移分子机制和治疗策略研究的文献并进行综述。结果 大多数胃癌患者初诊时已属晚期或已发生远处转移，其中肝脏是胃癌转移的常见部位。胃癌肝转移的机制尚未完全明确，包括非编码primiparous Mediterranean buffaloRNA、循环肿瘤细胞、外泌体、肿瘤微环境、信号通路等在内的不同水平的分子机制相对独立又相互影响，为胃癌肝转移提Smoothened Agonist供了潜在的生物标志物和治疗靶点。目前胃癌肝转移患者的治疗主要分为局部治疗和全身治疗，局部治疗以手术治疗、射频消融和质子束治疗为主，全身治疗包括全身化疗、靶向治疗和免疫治疗，其中靶向治疗和免疫治疗是最近的研究重点。结论 胃癌肝转移是肿瘤细胞与转移部位微环境共同作用的结果，了解这些机制对指导临床治疗和预后具有重大意义。目前胃癌肝转移没有统一selleck化学的治疗标准，想要达到理想的治疗效果不能只依靠单一治疗，还应根据患者的具体疾病状况和肿瘤的性质，采用多学科和个体化治疗方案。

目的：分析通腑开Myoglobin immunohistochemistry窍涤痰汤联合脑循环功能障碍治疗仪对高血压性脑出血患者神经功能缺损、运动功能的影响。方法：选取台州市中医院2020年3月～2022年3月诊治的150例高血压性脑出血患者为研究对象，分为对照组75例，研究组75例。对照组采用脑循环功能障碍治疗仪治疗，研究组使用脑循环功能障碍治疗仪、通腑开窍涤痰汤联合治疗，检测对比两组炎性因子、氧化应激指标、内皮功能指标、神经损伤程度、运动功能、中医证候积分、临床疗效。结果：观察组治疗总有效率(93.33%)高于对照组(82.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比，治疗后两组患者白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α、丙二醛(MDA)、内皮素(ET)-1表达水平确认细节、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及偏身不利、言语謇涩、腹胀便秘、口歪眼斜、肢体麻木评分降低，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)表达水平、格拉斯哥昏迷量表(Proteases抑制剂GCS)评分、Barthel评分、运动功能评定量表(FMA)评分差异均有统计学意义(P<0.05),治疗后研究组以上各指标的升高或降低幅度均大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：通腑开窍涤痰汤、脑循环功能障碍治疗仪联合使用可降低患者神经损伤，并使患者其运动功能得到改善，促使患者恢复。

目的 基于网络药理学探讨柴胡LY294002细胞培养治疗卒中后抑郁(PSD)的潜在靶点及作用机制。方法 采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索柴胡的有效成分及对应靶点，采用在线人类孟点击此处德尔遗传(OMIM)、疗效药靶(TTD)、Drugbank、Genecards数据库检索PSD的疾病靶点，二者靶点取交集后获得柴胡治疗PSD的潜在作用靶点；采用Cytoscape 3.7.1软件绘制中药-成分-疾病-靶点调控网络图；运用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并分析其核心靶点；采用DAVID数据库对潜在靶点进行基因本体(GOBiokinetic model)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析。结果 柴胡治疗PSD的核心成分为异鼠李素、曲克芦丁、豆甾醇等，潜在靶点为蛋白激酶B(AKT1)、白细胞介素-6(IL-6)、内皮型一氧化氮合酶(NOS3)、肿瘤坏死因子(TNF)等，柴胡活性成分可以参与RNA聚合酶II启动子对转录的正调控、细胞间信号传递、对药物的反应、对凋亡过程的负调控、老化等生物过程，涉及的信号通路包括神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、癌症通路、磷脂酰肌醇-3激酶蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、环磷酸鸟苷酸依赖的蛋白激酶(cGMP-PKG)信号通路等。结论 柴胡可能通过异鼠李素、曲克芦丁、豆甾醇等活性成分作用于AKT1、IL-6、NOS3等靶点，从而影响内分泌、炎症、免疫、代谢等相关通路来发挥治疗PSD的作用。

目的 探讨高脂饮食(high-fat diet,HFD)对雌性小鼠棕色脂肪蛋白组学的影响。方法 构建高脂饮食诱导的肥胖雌鼠Cobimetinib NMR模型。对照组(control,CON组)小鼠给予普通饮BYL719价格食,实验组(HFD组)小鼠给予高脂饮食,均喂养21周,每周记录小鼠体质量,使用小动物体脂分析仪测量身体成分,通过经腹葡萄糖耐量试验(intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT)和胰岛素耐量试验(insulin tolerance test,ITT)评估小鼠葡萄糖耐量和胰岛素耐量。处死小鼠后迅速收集棕色脂肪(brown adipose tissue,BAT)标本于液氮中,后续进行液相色谱-串联质谱检测(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS)及蛋白组学数据分析(n=4)。结果 与CON组相比,HFD组小鼠体质量增加,体脂含量增加,糖耐量和胰岛素耐量受损。蛋白组学分析以差异倍数(FC)>1.5或<0.67,且P<0.05为标准筛选差异蛋白,聚类分析热图结果显示,HFD小鼠Ucp1水平升高,蛋白免疫印迹(western blotting,WB)结果显示,HFD小鼠棕色脂肪中Ucp1水平更高;亚细胞定位分析表明线粒体是含有差异蛋白数目最多的细胞器;基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集biorational pest control分析显示:与CON组相比,HFD组下调蛋白主要与肌肉收缩有关,涉及钙信号通路等,而上调蛋白主要与脂质分解代谢有关,涉及脂质氧化过程以及产热、氧化磷酸化等通路;蛋白质相互作用分析提示网络中心蛋白主要与脂质合成、脂肪酸β氧化有关。结论 肥胖状态下,雌鼠BAT产热通路激活,并伴有脂肪酸β氧化增强和脂肪合成减弱。