DUB信号通路

目的 探讨绝经后子宫内膜息肉经宫腔镜手术切除后的复发情况及复发的高危因素。方法 回顾性分析2017年1月至2019年12月因“绝经后子宫内膜息肉或绝经后子宫内膜增厚”在北京协和医院行宫腔镜手术的455例患者的临床资料。收集患者的年龄、超声检查情况、宫腔镜术中情况、术后病理诊断、既往病史、肿瘤标记物、性激素水平、术后随访情况等临床资料，记录患者宫腔此网站镜手术后的息肉复发情况，并采用Logistic回归分析术后息肉复发的危险因素。结果 本研究纳入的455例患者的平均年龄为(61.13±6.78)岁(51～85岁),平均绝经年龄(50.91±3.43)岁(40～54岁)。455例患者的术后病理结果显示：子宫内膜息肉431例(94.73%)[含腺肌瘤样息肉15例(3.30%)],子宫内膜病变24例(5.27%)[其中恶性病变(包括子宫内膜不典型增生和子宫内膜癌)15例(Hepatic alveolar echinococcosis3.30%)]。绝经后良性子宫内膜息肉患者随访3年，27例患者复发，整体复发率为6.26%,其中子宫内膜息肉伴有/不伴有萎缩性内膜术后复发率最低(5.47%),腺肌瘤样息肉术后复发率较高(13.33%),子宫内膜息肉伴有增殖期内膜术后复发率最高(21.43%),且3类患者的复发率比较，差异有统计学意义(PNSC125066<0.05)。复发高峰期在术后1～2年间。Logistic回归分析显示，绝经前有子宫内膜息肉病史和子宫内膜息肉及其内膜的病理类型是术后复发的高危因素。27例复发患者中有4例再次行息肉切除术，术后病理结果仍为良性。结论 绝经后子宫内膜息肉患者行宫腔镜手术切除后，整体复发率较低，且复发时仍以良性为主。腺肌瘤样息肉和伴有增殖期内膜的患者更容易复发，需要加强随访。

目的:稀土元素(Rare earth elements,REEs)是元素周期表中的第IIIB族中17种的金属元素,原子序数分别为21、39和57～71。研究表明REEs通过食物链进入体内,对机体神经系统产生损害,稀土地区儿童的智商水平和记忆力明显低于正常儿童。镧(Lanthanum,La)在自然界中相对活泼,常被用来研究REEs的神feathered edge经毒作用机制。铁死亡(Ferroptosis)是铁依赖的调节性细胞死亡,由脂质过氧化驱动,是细胞内代谢紊乱和氧化还原状态失衡的结果。https://www.selleck.cn/products/dinaciclib-sch727965.html激活转录因子3(Activating transcription factor 3,ATF3)是由应激因素诱导的转录因子,其表达可被细胞应激迅速诱导,进而调控下游基因表达转录。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)通常参与机体内多种代谢反应,作为供氢体参与氧化还原反应。NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)促进细胞生成ROS。下调胱氨酸/谷氨酸的反向转运体(Cystine/glutamate antiporter system,System Xc~-)表CP-456773化学结构达水平,导致半胱氨酸和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)耗竭。发生内质网应激时,ATF3被诱导表达上调。本研究探讨La是否通过影响内质网应激水平,促进ATF3表达上调,进而上调NOX4,促进细胞生成ROS,同时下调System Xc~-,致半胱氨酸和GSH耗竭,造成脂质过氧化增强,从而促进铁死亡,发挥神经毒性作用。本研究将为La所致神经毒性损害以及其他神经系统疾病的预防与治疗提供新的研究资料。研究方法:采用实验动物中心购买的实验用清洁级健康成年Wistar大鼠,雌鼠和雄鼠分别为16只,体重为245±10 g,雌雄1∶1的比例合笼。雌鼠完全随机分组,包括对照组、低、中和高剂量组,分组后进行染毒,从雌鼠孕期第0天开始经饮水染毒,对照组大鼠饮蒸馏水,低剂量、中剂量和高剂量的LaCl_3组孕鼠分别饮用含0.125%、0.25%和0.5%LaCl_3的蒸馏水溶液,至仔鼠离乳后终止染毒。Morris水迷宫试验测试仔鼠学习记忆能力;电镜观察仔鼠海马组织神经元的超微结构改变;普鲁士蓝染色观察仔鼠海马铁蛋白情况;免疫荧光法观察仔鼠海马ATF3蛋白表达情况;试剂盒检测仔鼠海马中ROS、MDA、GSH/GSSG和Fe含量;Western blot检测仔鼠海马中内质网应激相关蛋白(PERK、GRP78、ATF4)、ATF3、NOX4、SLC7A11、GPX4和线粒体电子传递链复合物蛋白(NDUFB8、SDHB、UQCRC2和ATP5A)表达情况。取新生24 h内Wistar大鼠,体外培养原代神经元,待成熟后,分别给予含0、0.025、0.05和0.1m M LaCl_3的培养基,染毒时间24 h,随即检测相关指标。采用神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)对神经元进行鉴定;试剂盒法检测原代神经元MDA和Fe水平;Western blot法检测原代神经元中PERK、GRP78、ATF4、ATF3、NOX4、SLC7A11、GPX4、NDUFB8、SDHB、UQCRC2和ATP5A蛋白表达情况。结果:1.Morris水迷宫的定位航行试验结果,仔鼠逃避潜伏期和总游泳距离随着LaCl_3暴露剂量的增加而增加;空间探索试验结果,仔鼠穿越目标平台次数和目标象限停留时间随着LaCl_3暴露剂量的增加而降低。2.随着LaCl_3剂量的增加,仔鼠海马神经元形态改变,核膜皱缩,线粒体肿胀、空泡化。3.随着LaCl_3剂量的增加,仔鼠海马铁蛋白增多。4.随着LaCl_3剂量的增加,仔鼠海马组织ROS、MDA和Fe水平增加,GSH/GSSG水平降低。5.随着LaCl_3剂量的增加,仔鼠海马CA1区、CA3区和DG区中ATF3表达增多。6.LaCl_3暴露可上调仔鼠海马PERK、GRP78、ATF4、ATF3和NOX4蛋白表达水平,下调仔鼠海马SLC7A11、GPX4、NDUFB8、SDHB、UQCRC2和ATP5A蛋白表达水平。7.LaCl_3处理上调了原代培养神经元的MDA和Fe水平。8.LaCl_3处理可上调原代培养神经元PERK、GRP78、ATF4、ATF3和NOX4蛋白表达水平,下调原代培养神经元SLC7A11、GPX4、NDUFB8、SDHB、UQCRC2和ATP5A蛋白表达水平。结论:1.雌鼠孕哺期LaCl_3暴露造成仔鼠海马神经元铁死亡,造成仔鼠学习和记忆能力损害。2.LaCl_3暴露导致神经元铁死亡可能是与内质网应激和ATF3信号通路表达上调有关。

目的：通过网络药理学和分子对接技术，探讨沙棘抗肥胖的活性成分、靶点和作用机制，并验证其体外抗肥胖效果。方法：使用TCMSP平台检索沙棘活性成分与靶点，收集疾病靶点，利用Venny2.0.2得沙棘靶点与肥胖靶点的交集。通过STRING数据库平台建立药物靶点-疾病靶蛋白相互作用（PPI）网络。使用David数据库对交集靶点进行分析GW-572016，得到GO富集分析和KEGG通路分析结果。通过Cytoscape 3.9.1软件构建沙棘成分-靶点-信号通路网络图。使用Autodock Dock1.5.7和Pymol2.2.0进行沙棘核心靶点与其成分的分子对接，并Empagliflozin供应商进行可Molecular Biology Reagents视化处理。通过体外实验验证沙棘提取物的抗肥胖作用。结果：筛选得到33个沙棘活性成分，2820个疾病靶点和151个交集靶点。主要活性成分包括黄酮类、维生素类、甾醇类等，关键靶点涉及AKT1、TNF、IL6、TP53、VEGFA、CASP3等。KEGG通路富集分析得到恶性肿瘤通路、脂质与动脉粥样硬化通路、AGE-RAGE信号通路等131条信号通路。分子对接结果表明核心靶点与其对应活性成分对接结果良好。体外实验表明沙棘提取物具有抑制3T3-L1小鼠前脂肪细胞增殖的作用。结论：研究显示沙棘具有多成分、多靶点、多通路协同发挥抗肥胖作用，为其临床研究和产品开发提供了参考。

番茄灰霉病由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)侵染所致,属于真菌病害,传播速度快,在番茄整个生长发育周期内花、果、叶、茎均可发病。为了预防灰霉病的发生,大量喷施农药,造成了严重的环境污染,通过培育健康番茄植株,使番茄体内形成自我保护屏障,从而抵御外界病原菌入侵,既能减轻环境污染,又能保障食品安全,一直是农业科学的前沿热点问题。本实验以樱桃番茄为材料,研究不同浓度硒(Se)和硅(Si)对番茄生长特性和果实品质的影响,探究了Se和Si对番茄灰霉病抗病性的作用机制。前期试验共设六个处理:T0:喷施清水;T1:喷施2 mg/LNa_2Se O_3;T2:喷施4 mg/LNa_2Se O_3;T3:喷施1.5mmol/LNa_2Si O_3浓度;T4:喷施2 mg/LNa_2Se O_3+1.5 mmol/L Na_2Si O_3;T5:喷施4 mg/LNa_2Se O_3+1.5 mmol/L Na_2Si O_3;后期根据筛选出来的最佳Se和Si浓度,设置CK、Se、Si和Se-Si四个试验处理研究外源Se和Si对番茄叶片灰霉病的抗性和果实采后Se和Si浸泡处理对番茄灰霉病抗性的影响。研究的主要结果如下:(1)通过形态学和分子生物学鉴定,明确了引起番茄灰霉病的病原菌为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)。通过对其生物学特性研究,发现灰葡萄孢菌菌丝生长适宜p H值为6.0,适宜生长温度为25℃,温度≤5℃和≥35℃时菌丝停止生长和生长缓慢,光照条件对菌丝生长无明显影响。(2)外源Se和Si有促进植株生长的作用。与T0相比,T5和T2处理株高分别比T0更多增加18.19%和15.29%,茎粗比T0增加10.00%和6.00%,T5处理显著提高叶片鲜重和干重,分别比T0增加42.10%和45.51%,T5处理叶绿素比T0增加15.21%。(3)适宜浓度下的外源Se和Si配施可明显提高番茄果实品质。与T0相比,T5处理单果重和硬度分别增加41.16%和43.75%,可Medical translation application software溶性蛋白含量、可溶性固形物,可溶性糖、可滴定酸和维生素C分别比T0增加20.97%、88.38%、42.25%、44.13%和48.51%,类黄酮和总酚分别比T0增加37.46%和37.64%,Se和Si元素含量分别比T0增加12.85%和35.67%。(4)离体条件下,24 mg/L的Se和120 mmol/L的Si单独施用和复合施用均能抑制Botrytis cinerea菌丝生长,破坏其细胞膜的渗透调节作用,同时还可显著抑制叶片和果实B.cinerea的病斑直径,表明Se和Si是通过诱导叶片和果实抗病性,抑制B.cinerea对樱桃番茄的侵染。叶片和果实受到病原菌胁迫后,诱导了组织中活性氧(ROS)积累,外源Se和Si处理提高了叶片和果实体内的可溶性蛋白含量,显著抑制了丙二醛(MDA)含量;提高了超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)等酶活性,启动番茄免疫反应,维持活性氧平衡,诱导樱桃番茄叶片和果实抗病性。相比于Se和Si单独处理,Se-Si复合处理对酶活性的提高更显著,同时促进了果实体内总酚和类黄酮的积累,说明外源硒和硅处理可显著提高番茄体内的抗氧化酶活性和抗逆物质的生成,提高樱桃番茄抗病性。(5)外源Se和Si处理后,叶片和果实中的病程相关蛋白PR1和PR2基因表达量均比对照组有所增加。其中叶片和果实感染灰霉病后,比起单施Se和Si处理,Se-Si复合处理可显著提高PR1基因的表达量,分别是CK的3.13倍和11.93倍;单施硅可显著提高PR2基因在叶片和果实中的表达量,分别是CK的3.24倍和8.61倍。综上所述,外源Se和Si可明显改善植物的生长发育和果蔬品质,以及对病害的缓解都有一定的抑制作用,在一定程度上规避了果蔬CL13900在生长过程中遇到的病害风险,减少了因防治不当带来的环境污染的问题。

动脉粥样硬化性疾病,如心肌梗塞和中风,这类疾病的发病率和死亡率较高,已成为导致人类死亡的主要原因之一。经皮冠状动脉介入术(Percutaneous coronary intervention,PCI)是目前治疗动脉粥样硬化的有效手段之一。但是PCI会导致术后再狭窄,SB431542供应商影响其疗效。因此了解再狭窄的病理发生过程是非常重要的。与进行性胆固醇诱导的动脉粥样硬化不同,新生内膜增生在冠状动脉血管成形术后再狭窄的发病机制中起着重要作用。研究发现血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)的表型会发生异常改变,如血管损伤或者受到一些病理生理因子的刺激:血小板源生长因子-BB(Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)、血管紧张素II(Angiotensin II,Ang II)、转化生长因子β(Transforming growth factorβ,TGF-β)等导致VSMCs从收缩分化状态转变为增殖、迁移的合成形态进而促进了新生内膜的形成。因此,探讨VSMCs异常的增殖迁移在新生内膜增生导致的血管性疾病的预防中具有重要意义。成纤维细胞生长因子同源性因子(Fibroblast growth factor homologous factors,FHFs)是成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)家族中的特殊一员。其功能与传统的FGF不同。虽然FHFs和FGF家族中其他成员在结构和序列上有一定相似,但其氨基端上缺乏分泌信号序列,故FHFs不能分泌到细胞外,也不能激活相应的FGF受体,在细胞内发挥着重要作用。有文献表明FHFs家族在血管中发挥着重要作用,如缺氧诱导的FGF11刺激毛细血管样内皮管的形成;过表达FGF12抑制颈总动脉损伤诱导的血管内膜的增生。我们前期研究发现FHFs家族成员FGF13在血管组织中有较高的表达,过表达FGF13可抑制大鼠高血压模型诱导的血管重构。那么FGF13对颈动脉新生内膜是否有影响,目前并不清楚。本课题中,我们分别从动物实验和细胞实验探索了FGF13对颈动脉新生内膜的影响。首先我们构建了血管损伤模型,探讨血管平滑肌细胞上特异性敲除FGF13(Smooth muscle cell-FGF13~(-/-),SMC-FGF13~(-/-))小鼠对颈动脉损伤后内膜增生的影响,之后在大鼠VSMCs上构建细胞增殖模型,探讨FGF13对VSMCs收缩、增殖和迁移的影响。目的:通过构建小鼠左颈动脉内膜增生模型,探讨SMC-FGF13~(-/-)对血管内膜增生的影响。方法:1.利用左颈总动脉结扎术(Carotid artery ligation,CAL)构建小鼠血管内膜增生模型,分别于术前、术后14天、21天、28天取材、冰冻切片进行苏木精伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,H&E)、Image J软件进行形态学测量分析管腔面积、内膜面积、中膜面积及内膜和中膜面积之比验证模型是否成功。2.利用RT-PCR、Western blot技术探究血管内膜增生模型状态下FGF13的表达变化。3.野生型(Wild type,WT)小鼠和SMC-FGF13~(-/-)小鼠构建血管内膜增生模型,术后14天取材进行H&E染色、Image J进行形态学测量观察敲除FGF13对血管内膜增生的影响。4.体外培养大鼠原代VSMCs,取3-5代的VSMCs通过腺病毒过表达FGF13,RT-PCR检测FGF13的过表达效率。5.Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测PDGF-BB对细胞活性的影响,以不同浓度的药物(0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、30 ng/mL、40ng/mL、50 ng/mL)PDGF-BB刺激VSMCs 24 h,摸索最佳药物浓度。6.RT-PCR、Western blot技术分别检测control、PDGF-BB、腺病毒过表达FGF13(Adenovirus-FGF13,Ad-FGF13)、Ad-FGF13+PDGF-BB组中收缩、增殖、迁移标志性的Markerα平滑肌肌动蛋白(alpha-Smooth muscle actin,α-SMA)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9,MMP9)的m RNA含量和蛋白表达。结果:1.H&E染色结果显示术后14天、21天、28天血管内膜逐渐增厚、管腔逐渐狭窄。形态学计量显示术后14天、21天、28天管腔面积显著减少,内膜面积显著增大,中膜面积显著增大,内膜/中膜面积显著增大,证明模型构建成功。2.RT-PCR、Western blot结果发现术后14天FGF13的mRNA含量和蛋白表达在野生小鼠左侧结扎颈总动脉组织中明显降低。3.WT小鼠和SMC-FGF13~(-/-)小鼠结扎14天后取材,H&E染色结果发现相比WT小鼠结扎组,SMC-FGF13~(-/-)小鼠结扎组中血管中膜排列紊乱,内膜明显增厚,管腔明显狭窄。形态学测量分析显示,相比WT小鼠结扎组,SMC-FGF13~(-/-)小鼠结扎组管腔面积明显减少,内膜面积明显增大,中膜面积,内膜和中膜面积之比也是明显增大。这提示SMC-FGF13~(-/-)小鼠可促进血管损伤诱导的内膜增生。4.3-4天时在少量血管组织周围会爬出VSMCs,8-9天VSMCs生长汇合至80%-90%时,呈典型的“峰谷”现象。RT-PCR结果显示,腺病毒过表达FGF13组中FGF13的m RNA含量明显增加,提示过表达效率良好。5.CCK8结果显示,相比0 ng/mL,药物在10 Medical geologyng/mL-50 ng/mL时细胞活性均明显增加,且在40 ng/mL时更加明显,因此确定40 ngTofacitinib体内/mL PDGF-BB是最佳药物刺激浓度。Western blot结果显示,过表达FGF13能够促进α-SMA蛋白的表达,此外能够明显缓解PDGF-BB对α-SMA的抑制作用。6.RT-PCR、Western blot结果显示过表达FGF13能够抑制PCNA的mRNA含量和蛋白表达,此外能够明显抑制PDGF-BB对PCNA的诱导作用。7.RT-PCR、Western blot结果显示过表达FGF13能够抑制MMP9的mRNA含量和蛋白表达,此外能够明显抑制PDGF-BB对MMP9的诱导作用。结论:1.本实验成功构建了血管内膜增生模型。2.RT-PCR、Western blot结果发现在WT小鼠左侧颈动脉结扎术后FGF13的表达下降。3.H&E染色结果显示血管平滑肌细胞特异性敲除FGF13小鼠可促进血管损伤诱导的内膜增生。4.体外成功培养大鼠VSMCs。RT-PCR结果显示腺病毒成功过表达FGF13。5.RT-PCR、Western blot结果显示过表达FGF13促进VSMCs的收缩,抑制VSMCs的增殖、迁移。

第一部分孕期糖尿病影响子代大鼠血管内皮功能,导致子代高血压的发生研究背景与目的:目前,高血压及其相关的并发症仍是造成我国居民死亡的首要原因。既往研究已表明,高血压是先天遗传易感性和后天环境因素相互作用的结果。近年来,人们开始关注生命早期(胚胎发育期)环境因素对子代成年期疾病的影响,在胚胎发育的关键期,遭遇不良环境因素(低蛋白饮食、感染、高糖等)刺激将对机体的器官功能产生长期乃至终生的影响,即使子代脱离不良环境其影响也难以改变。相关研究已证实,孕期不良因素刺激致胚胎发育期器官功能发生“异常程序化”,可介导子代多种成年期慢性疾病如高血压、恶性肿瘤、糖尿病等的发生。孕期血糖升高是一个重要的不良危险因素,除了给孕妇和胎儿带来不良结局如流产、产妇感染、巨大胎儿、新生儿低血糖及新生儿呼吸窘迫综合征等外,还使子代成年期慢性疾病,特别是高血压的发生率显著增加,其发生风险增加1.78倍。同时相关动物实验也表明,孕期糖尿病可引起子代血压升高。我们前期已发表的相关研究也发现,孕期糖尿病可致子代肾脏G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)激活,进而引起肾脏多巴胺D_1受体介导的尿钠排泄功能受损,导致子代血压升高。机体血压主要受肾脏、外周血管及大脑中枢的调控,是否外周血管异常的收缩与舒张参与了孕期糖尿病致子代高血压的发生过程及其相关机制,尚不清楚。因此,我们提出假设:孕期糖尿病可致子代大鼠肠系膜动脉内皮功能受损及血压升高。本部分主要针对孕期糖尿病致子代大鼠高血压的外周血管内皮功能机制进行探讨。研究方法:成年雌性SD大鼠(220～250g)与雄性大鼠按1:1合笼后,当见孕栓者定为妊娠第0天,将其随机分为孕期对照组、孕期糖尿病组和孕期糖尿病胰岛素干预组。孕期对照组第0天给予腹腔Citrate buffer(1 m L);孕期糖尿病组给予腹腔注射STZ(35mg/kg);孕期糖尿病胰岛素处理组在腹腔注射STZ的基础上,同时于妊娠第0天,皮下埋入胰岛素微量泵,持续泵入胰岛素。孕期对照子代和孕期糖尿病子代于24周开始分别给予溶剂处理(腹腔注射生理盐水,1 ml/day)、4-PBA处理(内质网应激抑制剂,腹腔注射,1 g/kg/day)和Tudca处理(内质网应激抑制剂,腹腔注射,150 mg/kg/day),共计6周。分别观察子代大鼠以下指标:(1)采用鼠尾测压持续监测血压情况;(2)采用HE染色检测子代大鼠胸主动脉和肠系膜动脉组织形态学改变;(3)通过血管张力实验检测子代大鼠肠系膜动脉基础状态下以及孵育一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(100μM)后对苯肾上腺素(PE)诱导的血管收缩反应;(4)通过血管张力实验检测子代大鼠肠系膜动脉基础状态下以及孵育一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(100μM)或AMPK激动剂(A769662,30μmol/L)、或AMPK抑制剂(Compound C,5μmol/L)、或PPARδ激动剂(GW1516,100 nmol/L)、或PPARδ抑制剂(GSK0660,500 nmol/L)后对乙酰胆碱(Ach)诱导的血管内皮依赖性舒张反应;(5)通过血管张力实验检测子代大Decitabine鼠肠系膜动脉对硝普钠(SNP)诱导的血管内皮非依赖性舒张反应;(6)通确认细节过DHE染色检测子代大鼠肠系膜动脉活性氧自由基水平;(7)通过Western-blot检测子代大鼠肠系膜动脉原代内皮细胞p-AMPKα、PPARδ、内质网应激标志物(p-PERK、p-IRE1、CHOP、p-e IF2α和ATF-6)、p-e NOS表达水平;研究结果:(1)与孕期对照子代大鼠比较,孕期糖尿病子代大鼠血压升高和肠系膜动脉内皮舒张功能受损,且内皮舒张功能受损时间早于血压升高。(2)内质网应激激活是孕期糖尿病子代肠系膜动脉内皮舒张功能受损的原因。与孕期对照子代比较,孕期糖尿病子代内质网应激标志物(p-PERK、p-IRE1、CHOP、p-e IF2α和ATF-6)和活性氧自由基显著增强;肠系膜动脉内皮细胞NO生成和p-e NOS表达水平减少;肠系膜动脉PE诱导的收缩增强和Ach诱导的舒张功能减弱。给予抗内质网应激处理6周,可显著降低孕期糖尿病子代大鼠内质网应激相关标志物表达水平,减少活性氧自由基,增加肠系膜动脉内皮细胞p-e NOS表达水平和NO生成,降低肠系膜动脉PE诱导的收缩和增强Ach诱导的舒张功能,进一步降低血压。(3)孕期糖尿病可致子代肠系膜动脉内皮细胞p-AMPKα和PPARδ表达显著下调。AMPK激动剂(A769662)或PPARδ激动剂(GW1516)可改善孕期糖尿病子代大鼠肠系膜动脉受损的内皮依赖性舒张,同时逆转内质网应激诱导剂(Tuni)孵育孕期对照子代大鼠肠系膜动脉后增加的内质网应激、活性氧自由基以及受损的内皮依赖性舒张;PPARδ抑制剂(GSK0660)减弱AMPK激动剂(A769662)的上述作用,然而AMPK抑制剂(Compound C)并不能抑制PPARδ激动剂(GW1516)的上述作用。上述结果表明AMPK/PPARδ是内质网应激的上游,AMPK/PPARδ信号下调是触发孕期糖尿病子代大鼠内质网应激、血管内皮功能受损的重要原因。(4)对孕期糖尿病给予胰岛素干预,可显著增加子代肠系膜动脉内皮细胞p-AMPKα和PPARδ表达水平,降低内质网应激,改善受损的内皮舒张功能,进一步降低血压。研究结论:孕期糖尿病下调子代肠系膜动脉内皮细胞p-AMPKα/PPARδ信号,并增强内质网应激及相关的氧化应激,导致内皮依耐性舒张功能受损,最终诱发子代高血压的发生。第二部分Sirt3在孕期糖尿病致子代大鼠高血压跨代遗传中的作用研究背景与目的:孕期糖尿病可引起子代高血压,但是否可引起高血压跨代遗传,尚无相关研究报道。前期研究发现孕期糖尿病可引起子代外周交感神经显著激活。室旁核作为最重要的中枢心血管调控中心,可通过调节外周交感神经活性,发挥调控血压的作用,其中室旁核小胶质细胞激活,进而触发下游炎症信号,是高血压发生的重要神经源性基础。小胶质细胞激活与线粒体功能障碍相关,Sirt3是调控线粒体功能是重要因子。是否Sirt3参与了孕期糖尿病致子代高血压的跨代遗传,尚有待研究。因此,我们提出假设,小胶质细胞Sirt3下调,引起线粒体功能障碍,进而激活小胶质细胞,导致外周交感神经活性增加,是孕期糖尿病子代高血压跨immune deficiency代遗传发生的重要机制。研究方法:成年雌性SD大鼠(220～250g)与雄性大鼠按1:1合笼后,当见孕栓者定为妊娠第0天,将其随机分为孕期对照组和孕期糖尿病组。孕期对照组第0天给予腹腔Citrate buffer(1 m L),孕期糖尿病组给予腹腔注射STZ(35 mg/kg)。将孕期糖尿病的子一代(F_1)雌性与孕期对照子一代(F_1)雄性合笼,得到孕期糖尿病子二代(F_2),并按此法得到F3代。将24周龄孕期对照和孕期糖尿病相应子代(F_1和F_3代)大鼠随机分为孕期对照子代溶剂组、孕期对照子代CMT-3(小胶质细胞激活抑制剂)干预组、孕期糖尿病子代溶剂组、孕期糖尿病子代CMT-3干预组。溶剂组和干预组分别从24周开始通过侧脑室给予输注人工脑脊液(a CSF,0.25μL/h)和CMT-3(3.5μg/h),直至30周。同时孕期对照和孕期糖尿病子代(F_1和F_3代)分别从24周开始通过侧脑室注射腺相关病毒即高表达空载体组/AAV-NC和腺相关病毒高表达Sirt3/AAV-Sirt3。分别检测以下指标(1)采用无创鼠尾和植入子检测子代体外和体内血压情况;(2)采用放射免疫试剂盒检测子代外周血去甲肾上腺素(NE)水平;(3)采用频谱分析法评估心率变异性,计算低频与高频的比值(LF/HF);(4)通过DHE染色检测子代大鼠下丘脑室旁核活性氧自由基水平;(5)通过化学发光检测小胶质细胞ATP含量和q PCR检测mt DNA拷贝数;(6)通过Western-blot检测室旁核小胶质细胞Iba1和Sirt3表达情况。研究结果:(1)孕期糖尿病可引起子代外周交感神经活性增加(外周血NE水平和LF/HF比值增加)和血压升高,进一步传代发现,此高血压表型可跨代遗传到F3代。(2)与孕期对照子代大鼠比较,中枢室旁核小胶质细胞在孕期糖尿病子代(F_1-F_3代)显著激活,抑制小胶质细胞激活,可降低外周交感神经活性和血压。(3)与孕期对照子代大鼠比较,孕期糖尿病相应子代(F_1-F_3代)小胶质细胞Sirt3表达显著下调和线粒体功能障碍(ATP含量和mt DNA拷贝数减少);过表达Sirt3可改善孕期糖尿病子代线粒体功能即增加ATP含量和mt DNA拷贝数减少,抑制小胶质细胞激活,降低外周交感神经活性和血压。研究结论:孕期糖尿病可通过下调子代室旁核小胶质细胞Sirt3表达,引起线粒体功能障碍,触发小胶质细胞激活,进而增加外周交感神经活性,导致高血压的跨代遗传。

目的：miR-10b促进动脉瘤的进展但其机制未明确，本实验试图通过检测miR-10b对KLF4/Notch-1/STAT3途径的影响阐明其机理。方法：双荧光素酶实验验证miR-10b的靶基因。取20只apoE~(-/-)小鼠构建腹主动脉瘤模型，其中10只尾静脉注射含miR-10b mimic的慢病毒，分别记为模型组和miR-10b组。另取10只apoE~(-/-)小鼠作为假手术组，28天后解剖小鼠腹主动脉行病理学染色，western-blot。Ang II刺激后的THP-1巨噬细胞，根据是否转染miR-10b mimic及其Nc对照、是否添加抑制剂分组：(1)Nc组；(2)miR-10b mimic组；(3)Nc+ KLF4抑制组；(4)miR-10b mimic+ KLF4抑制组；(5)Nc+ Notch-1抑制组；(6)miR-10b mimic+ Notch-1抑制组；(7)Nc+STAT3抑制组；(8)miR-10b mimic+STAT3抑制组，检测细胞内蛋白水平。结果：检测双荧光素酶活性得知miR-10b可靶向作用于基因KLF4。小鼠血管病理试验发现，与正常小鼠相比，动脉瘤模型小鼠的血管明显增粗、组织结构异常，miR-10b可加重血管病变；CD68~(+)巨噬细胞、蛋白Liraglutide研究购买Notch-1、p-STAT3、MMP-2、MMP-9在假手术组、模型组与miR-10b逐渐增多，而α-SMA、蛋白KLF4逐渐减少。(1)、(2)两组细胞间，后者KLF4表达较少、而Notch-1、p-STAT3、MMP-2、MMP-9表达显著偏多；KLF4抑制Crizotinib说明书剂抑制KLF4表达，而Notch-1显著增多；Notch-1被抑制而减少表达，p-STAT3也随之减少；p-STAT3被抑制表达，MMP-2与MMP-9表达量也明显降低。结论：miR-10b通过作用于KLF4/Notch-1/STAT3信号途径，引起动脉瘤组织中MMP-2、MMP-9表达增加，从而加Medical Genetics速动脉瘤的进程。

目的 探讨累及甲状腺的朗格汉斯细胞组织细胞增生症（Langerhans cell histiocytosis,LCH）的临床病理学特征。方法 回顾性分析复旦大学附属华山医院2017年6月至2022年11月期间5例甲状腺受累的LCH患者的临床信息、形态学特征、免疫组化特点及分子学检测结果，并结合相关文献进行讨论。结Lorlatinib分子式果 男性1例，女性4例，29～57岁，中位年龄31岁，超声均表现为甲状AY-22989采购腺低弱回声结节。形态学上均显示大量朗格汉斯细胞，细胞含有丰富的嗜酸性胞质，细胞核呈卵圆形，或有纵向核沟，呈咖啡豆样，核仁不明显，伴有大量淋巴细胞、嗜酸性粒细胞浸润。免疫组化显示：5例肿瘤细胞CD1α、S100、Langerin均阳性，Ki67增殖指数均大于15%，其中最高达70%。经分子检测的4例病例均未检出BRAF V600E和MAP2K1基因突变。结论 甲状腺LCH罕见，多数病例为多系统LCH累及甲状腺，常表现为甲状腺无痛性肿大，Bioactive hydrogel治疗方法常为外科手术切除。病理表现为大量朗格汉斯细胞及嗜酸性粒细胞弥漫成片，伴有正常甲状腺滤泡结构破坏。分子学改变上存在BRAF V600E和MAP2K1低突变率的特点。

目的 探究使用一次离心法制备兔贫白细胞富血小板血浆（leukocyte-poor platelet-rich plasma,LPPRP）的最佳离心条件。方法 取16只3～4月龄健康新西兰兔，于兔耳背中央动脉采集15 mL抗凝血，分别于1、2个月后重复取血步骤。将所取血液标本于离心半径16.7 cm分别以转速1 200、1 300、1 400、1 500 r/min（对应离心力分别为269×g、315×g、365×g、420×g）下离心2、3、4、5 min，共计16组。各组离心后采集分离平面1.5 mL以上的血浆，计算并比较不同离心条件下各组LP-PRP的体积、血小板富集系数及血小板回收率。结果 所有离心条件寻找更多下获得的LP-PRP体积范围为1.8～7.6 mL。相同离心转速时，随离心时间延长，LP-PRP体积显著增大，同时LP-PRP血小板富集系数呈降低趋势。离心2 min时，1 200、1 300 r/min转速下LP-PRP体积<2.0 mL，其余条件下获得的LP-PRP体积均≥2.0 mL；离心4、5 min时，各转速下获得的LP-PRP体积均≥4.0 mL。1 200 r/min转速下各离心时间组和1 300 r/min转速下离心2、3 min组LP-PRP血小板富集系数均>2.0，其中1 200 r/min转速下离心2 min能够获得最高的LP-PRP血小板富集系数。1 200 r/min转速下离心4、5 min与1 400 r/min转速下离心5 min获得的LPMolecular cytogenetics-PRP血小板回收率均>60%,1 200 r/min转速下离心4、5 min组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论采用一次离心法制备兔LP-PRP时，采集15 mL血液以离心半径16.7 cm、1 200 r/min转速下离心4 min即可制备体积>2.0 mL、血小板富集系数>2.0且血小板回收确认细节率>60%的LP-PRP，在最短时间达到LP-PRP的最佳作用参数。

目的:本研究旨在基于人类心脏转录组与实验性模型探索铁死亡在脓毒性心肌损伤中的分子生物学机制及治疗性化合物,为明确铁死亡在脓毒性心肌损伤(Septic myocardial injury,SMI)中的病理作用提供基于人类样本的初步证据,同时为发掘SMI精确诊疗靶点提供新的切入点。方法:本研究按照以下方法序贯性进行:1.基于人类脓毒症心脏转录组进行深度生物信息学分析,对人类脓毒症心脏转录组中铁死亡相关基因(Ferroptosis-related genes,FRGs)的变化进行了基因集富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA),并进一步通过基因本体论(Gene Ontology,GO)以及京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析探讨FRGs的潜在生物学功能和作用通路,利用Spearman相关性分析检测它们之间的潜在串联。构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(Protein-protein interaction,PPI)后,通过K-means聚类算法和MCC算法分析确定在转录组中发生显著变化的FRGs(Differentially expressed FRGs,DEFRGs)中的关键功能模块和枢纽基因。2.通过构建脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌损伤模型模拟SMI,利用超声心动图检测、血生化检测、心肌生化检测、免疫组化检测、二氢乙锭(Dihydroethidium,DHE)荧光探针检测、透射电镜检测、实时荧光定量PCR(Quantitative Reaeffector-triggered immunityl-time PCR,q RT-PCR)检测及蛋白质印迹(Western blot)检测验证SMI病理状态下的多重铁死亡特征以及枢纽基因的表达改变,并确定关键FRGs。3.进一步通过受试者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线分析在人类心脏和血液样本队列中评估关键FRGs对脓毒症心脏的诊断能力,以及与脓毒症病情和预后的相关性。通过人类心脏单细胞转录组数据分析确定关键FRGs在心脏组织中的表达和分布。通过CIBERSORT算法对脓毒症心脏中免疫细胞比例进行估算,并对脓毒症心脏中的关键FRGs进行免疫浸润相关性分析。4.最后,本研究基于DSig DB数据库中关键FRGs的化合物-靶点相关性预测了可在SMI中调控铁死亡的潜在化合物,并通过分子对接技术模拟预测了目标化合物与关键FRGs对应蛋白的结合情况。在LPS诱导的H9c2心肌样细胞损伤模型中利用细胞活力检测、细胞生化检测、Western blot检测、q RT-PCR检测、5.2.7 2′,7′-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)及C~(11)BODIPY~(581/591)荧光探针染色、透射电镜检测、不稳定铁池(Labile iron pool,LIP)检测对目标化合物在模拟SMI状态下对心肌细胞的保护作用及对铁死亡的调控机制进行了研究,并进一步通过Western blot检测了目标化合物对预测结合力较强的关键FRGs对应蛋白水平的影响。结果:1.通过基于人类脓毒症心脏转录组的生物信息学分析,发现在脓毒症心脏转录组中铁死亡相关基因集发生了显著改变(FDR<0.05,NES=1.489)。总共筛选出71个DEFRGs(FDR<0.05,|log2Fold Change|≥0.25),分析发现它们主要参与了细胞铁离子稳态调控和对营养、氧和化学压力反应等生物学过程(P<0.05);主要定位于细胞顶端、基底质膜、自噬体及自噬溶酶体等细胞成分(P<0.05);其分子功能主要作用于包括转录因子与DNA、泛素蛋白连接酶、转录核心调节器和共激活器、热休克蛋白的结合以及酰基转移酶和氧化还原酶的活性(P<0.05);主要富集于铁死亡、活性氧、自噬和癌症相关信号通路(P<0.05)。Spearman相关性分析发现DEFRGs中存在广泛的基因表达相关性、selleckchem生物学功能及通路交互性和蛋白质相互作用(P<0.05)。最后通过构建DEFRGs的PPI网络筛选出了其中的2个关键模块以及10个枢纽基因(STAT3、NOX4、TP53、HIF1A、NFE2L2、MAPK3、RELA、PTEN、EGFR、PPARA)。2.通过构建LPS诱导的小鼠心肌损伤模型来模拟SMI的病理状态,心脏彩超显示左室射血分数和短轴收缩率显著降低,循环炎症因子(IL6、IL-1β、TNF-α)和心肌损伤标志物(LDH、CK-MB、c Tn T)显著增加(P<0.05)。同时发现在该实验性SMI模型中小鼠心肌从生物标志物、形态学、生化学多角度表现出现了铁死亡的特征,包括心肌PTGS2表达水平显著上调,铁含量增加,活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平增高,4-HNE和MDA水平显著增加,以萎缩和基质丢失为特征的广泛线粒体损伤,主要生理性铁死亡防御系统SOD、GSH-Px、GSH/GSSG显著受损下调(P<0.05)。Fer-1预处理可以显著逆转LPS处理诱导的铁死亡特征(P<0.05),但并未显著改善心肌内铁的蓄积(P>0.05)。超声心动图观察到Fer-1预处理显著改善了小鼠心功能,与之对应的是循环炎症因子和心肌损伤标志物显著降低(P<0.05)。HIF1A,MAPK3,NOX4,PPARA,PTEN,RELA,STAT3和TP53通过q RT-PCR被验证确定为SMI中的关键FRGs(P<0.05)。3.通过ROC分析确定关键FRGs对脓毒症心脏具有良好的诊断性能,部分关键FRGs的表达水平与脓毒症患者的预后显著相关(P<0.05)。所有关键FRGs在人类胎儿和成人心脏中都有不同程度的表达,且它们在中性粒细胞、巨噬细胞等多种免疫细胞中同样存在不同程度的表达。同时,Spearman相关性分析确定部分关键FRGs的表达水平与脓毒症心脏中免疫细胞浸润的比例存在显著相关性(P<0.05)。4.基于所确定的关键FRGs预测出白藜芦醇(Resveratrol,Res)为SMI中潜在的铁死亡调控化合物(P<0.05,综合得分=2975802)。进一步体外研究结果显示,Res通过下调TFR1表达及上调FPN1表达缓解了LPS诱导的H9c2细胞铁过载,同时通过降低FTL表达及增加FTH表达降低了LPS诱导的细胞内不稳定铁水平增加(P<0.05)。此外,Res可以通过减轻生理性铁死亡防御系统损伤、降低ROS及脂质过氧化水平的机制抑制LPS诱导的H9c2细胞铁死亡从而发挥保护作用(P<0.05)。分子对接结果显示关键FRGs中RELA(-CDOCKER结合能=33.5562)、PPARA(-CDOCKER结合能=32.3970)、NOX4(-CDOCKER结合能=30.7867)的蛋白结构与Res结合力较强。Western blot确定LPS处理会显著诱导H9c2细胞中NOX4表达上调和PPARA表达下调(P<0.05),而额外的Res预处理会显著抑制LPS诱导的NOX4和PPARA表达变化(P<0.05),但RELA的蛋白水平在LPS和Res处理后并未发现明显变化(P>0.05)。结论:人类脓毒症心脏转录组中FRGs显著失调,且DEFRGs中存在广泛的基因表达相关性、生物学功能及通路交互性。SMI模型小鼠心肌中表现出铁死亡的特征,抑制铁死亡可改善SMI模型小鼠心功能。HIF1A,MAPK3,NOX4,PPARA,PTEN,RELA,STAT3和TP53是SMI中的关键FRGs,关键FRGs具有一定的SMI相关临床应用潜力。Res可在体外实验性SMI模型中抑selleckchem Elexacaftor制心肌细胞铁死亡并发挥保护作用,NOX4下调和PPARA上调参与介导了Res的保护作用。综上,本研究为进一步探索铁死亡在SMI中的角色提供了实验基础和理论依据。