背景及目的:血管成形术后再狭窄是血管壁在机械损伤后一种自我修复反应。内膜增生是血管再狭窄的主要原因之一,其中,血管平滑肌细胞(VSMCs)在内膜增生中起到了重要作用。肌醇-四磷酸1-激酶(ITPK1)调节肌醇四磷酸的合成,以及下游产物肌醇五磷酸盐和肌醇六磷酸盐,调节质膜Ca~(2+)-Cl~-通道并在细胞坏死性凋亡中起重要作用。Rocaglamide(Roc-A)作为NF-?B抑制剂,具有抗炎活性,并通过降低e IF4E的磷酸化抑制翻译。本研究旨在探讨(1)血小板生长因子(PDGF-BB)损伤前后ITPK1表达情况,以及ITPK1表达对PDGF诱导的平滑肌细胞增殖的影响和机制。(2)Roc-A抑制VSMCs增殖迁移的机制及其调节ITPK1表达。www.selleck.cn/products/Decitabine方法:本研究从三部分展开:1、筛选差异表达基因基于再狭窄受试者和对照受试者血液样本数据集GSE46560,以P<0.05,|log FC|>1为筛选条件,分析两组间差异表达基因(DEG)。使用DAVID对GO和KEGG信号通路进行富集分析,通过构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,获得关键基因模块。2、ITPK1对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖迁移的影响体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5),用25 ng/ml的PDGF-BB刺激细胞营造损伤环境。使用CCK8、划痕实验等检测ITPK1与平滑肌细胞增殖迁移的关系;通过DCFH-DA荧光探针观察活性氧生成荧光;利用Western blot检测ITPK1、PCNA、NF-κB和m TOR等相关蛋白表达。3、Roc-A抑制VSMCs增殖迁移的机制及其调节ITPK1表达体外培养A7r5,利用PDGF-BB刺激细胞建立损伤模型,用不同浓度Roc-A处理VSMCs,筛选最佳药物作用浓度,设立对照组、PDGF-BB组和PDGF-BB+Roc-A(10、25、50n M)进行实验。通过CCK-8、流式细胞术(Ed U和细胞周期检测)、Transwell实验等检测不同浓度Roc-A对平滑肌细胞增殖迁移的影响;通过荧光探针DCFH-DA检测活性氧的积累;使用蛋白质免疫organ system pathology印迹技术检测平滑肌细胞去分化、增殖、迁移、自噬、信号通路相关蛋白以及ITPK1的表达。结果:1、筛选获得ITPK1基因,ITPK1在PDGF-BB处理的细胞中表达明显降低。2、ITPK1抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖迁移。(1)、PDGF组损伤使细胞活性升高(P<0.01)、PCNA、CDK2和cyclin E表达增多(P<0.05)、S期细胞增加(P<0.0001),划痕伤口减小(P<0.001),而ITPK1过表达后,细胞活力降低(P<0.001),PCNA、CDK2和cyclin E表达减少(P<0.05),S期细胞减少(P<0.001),划痕“开口”增加(P<0.01)。(2)、细胞活性氧荧光在过表达处理下相比PDGF组荧光强度减弱(P<0.001)。(3)、ITPK1通过NF-κB/m TOR通路调节VSMCs增殖迁移。3、Roc-A抑制VSMCs增殖迁移。(1)、RocAMG510分子量-A处理以剂量依赖模式抑制增殖迁移及相关周期蛋白的表达,减少了处于S期的细胞(P<0.05)。(2)、不同浓度的Roc-A使探针DCFH-DA荧光强度减弱,并抑制PDGF-BB引起的自噬(P<0.01)。(3)、检测m TOR和NF-κB磷酸化水平,发现Roc-A浓度依赖性的抑制蛋白磷酸化水平(P<0.05)。(4)、Roc-A增加ITPK1表达(P<0.0001)。结论:ITPK1具有调控平滑肌细胞的增殖、迁移能力,并通过NF-κB/m TOR途径抑制VSMCs增殖迁移和活性氧积累,从而减轻内膜增生。Roc-A调节ITPK1表达和m TOR/NF-κB通路,进而抑制平滑肌细胞增殖迁移,改善内膜增生。这对介入术后再狭窄的预防和治疗起重要作用。