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目的 探讨藤黄酸对肾透明细胞癌凋亡及铁死亡的影响。方法 使用不同浓度藤黄酸干预786-O及ACHN细胞24 h, CCK-8法检测细胞活力以筛选合适的作用浓度。流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)和线粒体活性氧(mitoROS)水平，铁离子比色法检测试剂盒检测游离铁水平变化，Western blot法检测凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)和铁死亡蛋白(FTH1、GPX4)表达。结果 藤黄酸能够抑制786-O、ACHN细胞活力，并浓度依赖性地升高细胞凋亡率和ROS、mitoROS、游离铁水平(P<0.05,P<0.01)。添加铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)后可在一定程度上恢复藤黄酸诱导的ROS、mitoROS、游离铁水平变化(P<0.05,P<0.01)。藤黄酸干预后，786-O、ACHN细胞的铁死亡标志性蛋白FTH1和GPXIntegrated Chinese and western medicine4表达均降低(P<0.05,P<0.01),且Fer-1部分恢复了FTH1和GPX4蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 藤黄酸可能通过下调Bcl-2/Bax比值诱导肾透明细胞癌凋亡LEE011 NMR，并通过抑制FTH1和GPselleckchem R428X4蛋白表达诱导铁死亡。

目的急性心肌梗死是由急性冠状动脉阻塞引起严重心肌缺血缺氧的一种临床危重性疾病,死亡率高,进一步阐明急性心梗的机制,可为心梗的治疗提供新思路。急性心肌梗死后,内质网应激介导的自噬和凋亡水平增加,参与急性心肌梗死的发展过程。B和B1细胞特异性蛋白(Marginal zone B and B1 cell-specific protein,Mzb1)作为一种内质网相关蛋白,可与内质网应激分子伴侣热休克蛋白94(94-k D glucose-regulated protein,GRP94)结合,参与免疫蛋白的合成;同时Mzb1对小鼠急性心梗有一定的保护作用;因此,Mzb1可能参与急性心梗后内质网应激调控。葛根素来自中药葛根,具有缓解炎症、和内质网应激的作用。文献显示葛根素对实验性心肌缺血具有保护效应,本研究旨在探讨葛根素对小鼠急性心梗的保护机制,为葛根素的临床治疗提供新的依据。方法本研究包括体内与体外实验。在体内实验中选取10周龄的雄性SPF级C57BL/6小鼠,随机分为假手术组(Sham operation,Sham),急性心肌梗死组(Acute MyocBiomaterials based scaffoldsardial Infarction,AMI)和葛根素治疗组(50 mg/kg/天,100 mg/kg/天),每组各10只。适应性饲养1周后,葛根素组每天进行灌胃(50 mg/kg/天,100 mg/kg/天),连续灌胃14天,进行左冠状动脉结扎术,结扎24 h后采用小动物超声仪评估心脏功能;H&E染色比较各组小鼠心肌病理变化;DHE染色检测心脏中活性氧水平;Western blot检测内质网应激标示蛋白磷酸化-IRE1(Phospho-IRE1,p-IRE1),肌醇需求酶1(Phospho-Inositol-requiring enzyme 1,IRE1),分子伴侣热休克蛋白78(78-k D glucose-regulated protein,GRP78),转录因子C/EBP同源蛋白(Transcription factor C/EBP homologous protein,CHOP),Cleaved-Caspase3以及Mzb1的蛋白表达情况。体外实验将AC16人永生化心肌细胞随机分为溶剂对照组,H2O2模型组,葛根素组和Mzb1沉默组,MTT实验评价细胞活力,心肌细胞中氧自由基的水平用ROS染色,细胞的凋亡情况用TUNEL染色评价。Western blot检测p-IRE1,IRE1,GRP78,CHOP,Cleaved-Caspase3以及Mzb1的蛋白表达情况。结果1.体内实验:(1)心脏功能评价:与Sham组相比,AMI组左室射血分数(EF)和左室缩短分数(FS)明显降低(P<0.05),与AMI组相比,葛根素组EF和FS升高(P<0.05)。(2)TTC染色结果:与Sham相比,GefitinibAMI组小鼠心肌梗死面积增加(P<0.01);与AMI组相比,葛根素组心肌梗死面积减少(P<0.05)。(3)H&E染色结果:AMI组心肌纤维断排列紊乱甚至断裂,细胞间隙变宽,与Sham组比较;不同浓度的葛根素处理后改善肌丝排列,恢复心脏结构。(4)DHE染色结果:与Sham组相比,AMI组小鼠氧自由基水平增加;与AMI组相比,葛根素组氧自由基水平减少。(5)心肌细胞凋亡检测结果:与Sham组相比,AMI组小鼠Cleaved-Caspase3蛋白表达增多(P<0.05);与AMI组相比,葛根素组Cleaved-Caspase3蛋白表达下降(P<0.05)。(6)内质网应激相关通路蛋白检测结果:与Sham组相比,AMI组小鼠GRP78、CHOP、pIRE1蛋白表达上调(P<0.05);与AMI组相比,葛根素组GRP78、CHOP、pIRE1蛋白表达下调(P<0.05);Mzb1蛋白表达结果:与Sham组相比,AMI组Mzb1蛋白表达下降(P<0.05);与AMI组相比,葛根素治疗组小鼠心肌组织中Mzb1蛋白表达上调(P<0.05)。2.体外实验:(1)AC16心肌细胞活力评价:与对照组相比,溶剂对照组(Vehicle,Vec)和葛根素组(Puerain,Pue)无统计学差异(P>0.05);与Vec相比,H2O2组细胞活力明显下降(P<0.05),葛根素处理后细胞活力明显恢复(P<0.05)。(2)活性氧检测结果:与Vec相比,H2O2组活性氧的阳性细胞百分率升高(P<0.01),葛根素治疗后阳性细胞百分率下降(P<0.05)。(3)凋亡检测结果:TUNEL检测结果:与Vec相比,H2O2组凋亡阳性细胞百分比明显增加(P<0.05),葛根素处理后阳性细胞百分比下降(P<0.05);Cleaved-Caspase3蛋白检测结果:与Vec相比,H2O2组Cleaved-Caspase3蛋白表达显著上调(P<0.01),葛根素处理后蛋白表达下降(P<0.05)。(4)Mzb1蛋白检测结果:与Vec相比,H2O2组Mzb1蛋白表达下降(P<0.05),葛根素处理后蛋白表达明显上调(P<0.05)。(5)沉默Mzb1后AC16心肌细胞活力评估:与H2O2+葛根素组相比,H2O2+葛根素+si-Mzb1组细胞活力明显下降(P<0.05)。(6)沉默Mzb1后AC16心肌细胞活性氧检测结果:与H2O2+葛根素组相比,H2O2+葛根素+si-Mzb1组阳性细胞百分率(P<0.05)。(7)沉默Mzb1后AC16心肌细胞凋亡检测结果:TUNEL检测结果:与H2O2+葛根素组相比,H2O2+葛根素+si-Mzb1组凋亡阳性细胞百分比增高(P<0.05);CleavedCaspase3蛋白检测结果:与H2O2+葛根素组相比,H2O2+葛根素+si-Mzb1组Cleaved-Caspase3蛋白表达上调(P<0.05)。(8)沉默Mzb1后AC16心肌细胞中内质网应激相关通路蛋白检测结果:与Vec相比,H2O2组GRP78、CHOP、pIRE1蛋白表达上调(P<0.05),葛根素处理之后GRP78、CHOP、p-IRE1蛋白表达下调(P点击此处<0.05);与H2O2+葛根素组相比,H2O2+葛根素+si-Mzb1组中GRP78、CHOP、p-IRE1蛋白表达上调(P<0.05)。(9)衣霉素(TM)诱导AC16心肌细胞中Mzb1蛋白表达结果:与对照组相比,TM组中Mzb1表达明显下降(P<0.05),与TM组相比,葛根素治疗组中,蛋白表达上调(P<0.05),而这一作用被si Mzb1逆转(P<0.05);TM诱导AC16心肌细胞中内质网应激相关通路蛋白检测结果:与对照组相比,TM组中GRP78、CHOP、p-IRE1蛋白表达上调(P<0.05),葛根素治疗后GRP78、CHOP、p-IRE1蛋白表达下调,沉默Mzb1阻断了葛根素的作用(P<0.05)。结论1.急性心肌梗死降低心肌细胞保护分子Mzb1表达,增加心肌细胞的氧化应激和内质网应激,葛根素治疗可恢复心肌细胞Mzb1表达,降低心肌细胞氧化应激和内质网应激和心肌细胞损害和死亡。2.在H2O2诱导的离体心肌损伤模型中,我们进一步证实葛根素可能是通过上调Mzb1抑制内质网应激及细胞损伤。本研究为中药葛根素治疗心肌梗死的心肌保护效应提出了一个新的理论机制。

目的:口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)发病率高、恶性程度高且预后较差,已逐渐成为影响人类健康的世界重大公共卫生问题。以顺铂(Cisplatin,CDDP)为主的化疗目前是晚期OSCC最常用的姑息治疗。然而,许多患者对顺铂治疗产生抗药性,甚至因药物相关毒性而死亡。作为一种调节性细胞死亡形式,铁死亡在肿瘤抑制中起着重要作用,铁死亡的激活还有助于多种癌症的治疗。目前在OSCC中同时调控铁死亡和顺铂耐药的分子研究较少,许多潜在分子的作用机制也未知。极光激酶A(Aurora kinase A,AURKA)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,可调节细胞中有丝分裂纺锤体的功能。目前研究已发现AURKA促进多种肿瘤的进展,并在铁死亡以及化疗耐药中发挥着潜在的调节作用。方法:第一部分:1.下载癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)以及高通量基因表达(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中OSCC的RNA测序数据,从中筛选出OSCC和正常口腔组织之间差异表达的铁死亡相关基因(Differentially expressed ferroptosis-related genes,DE-FRGs)。同时,从来自GEO数据库的GSE117872队列中筛选出OSCC顺铂耐药细胞和敏感细胞之间的DE-FRGs。分别使用加权共表达网络分析从三个队列中鉴别出与OSCC以及OSCC顺铂耐药高度相关的铁死亡相关基因模块。获取以上步骤共有的基因定义为与OSCC和OSCC顺铂耐药同时高度相关的DE-FRGs。2.Kaplan-Meier生存分析从中进一步筛选出4个预后相关的差异表达铁死亡相关基因(Prognosis related differentially expressed ferroptosis-related genes,PR-DE-FRGs)。在内部队列(TCGA)中采用时间依赖性受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线、Kaplan-Meier生存曲线和一致性指数(Concordance index,C-index)评价并比较4种PR-DE-FRGs预测OSCC患者预后的价值。单变量Cox回归用于进一步确定4个PR-DE-FRGs对TCGA队列中OSCC患者预后的影响。综合比较得到在OSCC患者预后中的预测价值最高的基因—AURKA。外部队列(GSE41613GSE65858)用于进一步验证AURKA在OSCC中的最佳预后价值。3.在TCGA队列中,使用随机森林算法对4个PR-DE-FRGs的重要性评分进行排序,并使用诊断ROC曲线分别评价它们在OSCC的诊断价值。外部队列(GSE30784GSE37991)则用于进一步验证它们的诊断价值。从中筛选出诊断价值最高的基因—AURKA。4.进一步分析TCGA数据库中18种癌症与癌旁组织间AURKA的表达差异,并使用多变量Cox回归确定AURKA是否能独立影响OSCC患者的预后。5.基因集富集分析用于探索AURKA潜在的生物学功能。6.使用TCGA的OSCC测序数据比较不同临床分级、分期以及生存状态亚组之间AURKA表达的差异,并分析AURKA与细胞粘附相关基因表达之间的相关性。7.进一步分析AURKA与铁死亡标志基因表达的相关性。8.进一步分析AURKA与多药耐药基因表达的相关性。第二部分:1.采集OSCC和临近癌旁正常组织标本,搜集临床信息。分别使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantificational real time polymerase chain reaction,QRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测组织中AURKA的RNA和蛋白表达。比较OSCC和正常口腔组织之间AURKA的表达差异,并比较不同临床病理特征亚组患者AURKA的相对RNA水平的差异。2.慢病毒感染SCC9和HSC-3,根据荧光蛋白表达强度选择感染效率最高的感染细胞结合嘌呤霉素筛选得到AURKA过表达的稳转株。QRT-PCR和WB验证稳转株中AURKA的过表达。3.CCK-8检测空白,空载病毒和AURKA过表达SCC9/HSC-3在24,48和72h时细胞的存活率,并比较三组细胞之间存活率的差异。4.划痕实验评估并比较三组细胞迁移能力的差异。5.Transwell评估并比较三组细胞侵袭能力的差异。第三部分:1.检测并比较空白,空载病毒和AURKA过表达SCC9/HSC-3细胞中活性氧以及Fe~(2+)水平的差异。2.QRT-PCR检测并比较三组细胞中铁死亡标志以及NRF2-KEAP1通路基因(GPX4,SLC7A11,FTH1,NRF2和KEAP1)的RNA水平的差异。第四部分:1.CCK-8检测在不同浓度BMS-354825 NMR顺铂处理下的CAL27以及CAL27/CDDP的细胞存活率。分别绘制两组细胞的生长曲线和计算对应的IC50,并分别比较两组细胞间它们的差异。2.QRT-PCR和WB分别检测这两组细胞中AURKA的RNA和蛋白水平,并比较两组间它们的差异。3.慢病毒感染CAL27/CDDP,根据荧光蛋白表达强度选择感染效率最高的感染细胞Nirmatrelvir结合嘌呤霉素筛选得到AURKA过表达的稳转株。QRT-PCR和WB验证稳转株中AURKA的过表达。4.CCK-8检测在不同浓度顺铂处理下的AURKA过表达HSC-3以及CAL27/CDDP的细胞存活率。分别绘制三组细胞的生长曲线和计算对应的IC50,并分别比较三组细胞间IC50的差异。结果:第一部分:1.筛选得到6个与OSCC和OSCC顺铂耐药同时高度相关的DE-FRGs。Kaplan-Meier生存分析初步鉴别出AURKA、SLC2A1、RRM2和DUOX1对OSCC预后有影响。AURKA在这4个PR-DE-FRGs中具有最高的C-index和最高AUC值。单变量Cox回归分析中,只有AURKA显示出对预后的显著影响。外部队列中也得到类似的结果。2.在基于内外部队列的诊断ROC曲线中,AURKA展示出最高的AUC值。3.AURKA在OSCC组织和OSCC顺铂耐药细胞中上调,并在16种癌症中普遍上调。校正相关临床因素后,AURKA仍为OSCC预后的影响因素。4.富集分析观察到AURKA高表达与肿瘤恶性进展功能和通路相关,低表达与铁死亡功能相关。5.更高的临床分级中,AURKA表达更高。ICAM1/EGFR/CD44与AURKA表达量呈显著正相关。6.GPX4/SLC7A11/FTH1与AURKA表达量呈显著正相关。7.AURKA与MRP1(ABCC1)/PGP表达呈显著正相关。第二部分:1.AURKA在OSCC组The fatty acid biosynthesis pathway织中上调。更高的临床分级OSCC患者组织中AURKA的RNA水平显著更高。2.使用MOI=20/80的病毒感染SCC9/HSC-3效率最高。AURKA在对应的SCC9/HSC-3稳转株中显著过表达。3.24,48和72h时AURKA过表达的SCC9/HSC-3的存活率均显著更高。4.AURKA过表达的SCC9/HSC-3在划痕后迁移速率显著更快。5.穿过小室的AURKA过表达的SCC9/HSC-3数量显著更多。第三部分:1.AURKA过表达的SCC9/HSC-3中反应活性氧和Fe~(2+)水平的荧光强度更低。2.AURKA过表达的SCC9/HSC-3中GPX4,SLC7A11,FTH1和NRF2的RNA表达均更高,KEAP1的RNA表达更低。第四部分:1.不同浓度顺铂处理下,CAL27/CDDP存活率显著高于CAL27,CAL27/CDDP的IC50显著高于CAL27。3.CAL27/CDDP中AURKA的RNA和蛋白表达水平均高于CAL27。4.使用MOI=40的病毒感染CAL27/CDDP效率最高。AURKA在稳转的CAL27/CDDP中显著过表达。5.不同浓度顺铂处理下AURKA过表达HSC-3以及CAL27/CDDP存活率显著更高,对应的IC50也显著更高。结论:第一部分:1.生信鉴定并验证出AURKA具有最佳诊断和预后价值,该基因与OSCC和OSCC顺铂耐药高度相关。2.AURKA在包括OSCC在内的17种癌症以及OSCC顺铂耐药细胞中上调,并能独立负向影响预后。3.AURKA表达增加可能促进OSCC的恶性进展,抑制铁死亡,并促进顺铂耐药。第二部分:1.AURKA在OSCC组织中表达上调,AURKA表达增加可能促进OSCC的恶性进展。2.AURKA表达增加促进SCC9/HSC-3的增殖。2.AURKA表达增加促进SCC9/HSC-3的迁移。3.AURKA表达增加促进SCC9/HSC-3的侵袭。第三部分:AURKA表达增加抑制OSCC中的铁死亡,这一作用可能通过NRF2-KEAP1通路来实现。第四部分:AURKA在CAL27/CDDP中上调,AURKA表达增加降低OSCC细胞对顺铂的敏感性并促进顺铂的耐药。

癌症是人类死亡的第二大原因,其治疗手段的研究一直受到广泛的研究关注。近些年来,随着放射治疗技术的快速发展,各种新型的放疗技术逐渐在临床上使用,然而剂量限制毒性一直是放疗疗效的主要限制因素,同时实体瘤内存在的缺氧异质性微环境对放疗有明显的抵抗效果。为了克服放疗剂量限制毒性以及乏氧微环境的放疗抗性,放疗增敏剂的使用成为一种重要趋势。甲硝唑(MN)作为一种广泛研究的乏selleckchem Wnt-C59氧肿瘤放疗增敏剂,同时也是一种良好的乏氧敏感材料,然而,生物利用度的不足以及不良反应的存在限制了其临床应用。替拉扎明(TPZ)作为一种缺氧激活前药,可在缺氧条件下被还原产生自由基以杀伤肿瘤细胞,具有潜在的乏氧增敏能力。然而,肿瘤乏氧区域往往远离血管,乏氧激活药物难以在肿瘤中有效激活,严重限制其应用效果。为克服实体肿瘤的乏氧异质性对同步放化疗的限制作用,肿瘤乏氧微环境改造成为一种潜在的手段。围绕该目标,Y-27632试剂本论文基于NQO1高效底物在肿瘤组织内过表达的NQO1的作用下消耗氧气产生活性氧的特性,提出构建内源性乏氧自增强能力的同步放化疗纳米药物。利用纳米药物易于在肿瘤血管附近富集的特点,针对性消耗肿瘤组织外周氧气,达到Medical laboratory增强肿瘤整体乏氧水平的目的,促使乏氧激活药物无需深部穿透即可高效激活以增敏乏氧同步放化疗。围绕该目标本论文取得如下研究成果:(1)利用放疗增敏剂甲硝唑(MN)和聚乙二醇(PEG_(5k))成功制备了两亲性大分子聚合物PEG_(5k)-PMNZ。将PEG-PMNZ与大豆氢化磷脂(HSPC)和胆固醇通过微流控法共同制备成囊泡,同时包埋疏水性药物KP372-1和亲水性药物TPZ。通过对载药囊泡的粒径、乏氧响应性、稳定性等理化性质的表征,发现该囊泡粒径在100 nm左右,具有良好的稳定性和乏氧响应性。(2)通过体外细胞实验对载药囊泡的乏氧响应性药物释放、乏氧放疗能力及其与细胞的相互作用进行评价,作者发现该载药囊泡能够快速被胰腺癌细胞摄取进而杀伤癌细胞,尤其是在缺氧条件下,载药囊泡表现出更强的肿瘤杀伤效果。DNA损伤实验和细胞集落实验也证明了该载药囊泡的放疗增敏效果。(3)通过对载药囊泡的体内生物分布研究证实该纳米囊泡具有良好的肿瘤靶向性和肿瘤富集能力。对小鼠胰腺癌皮下模型进行抑瘤实验,表明纳米药物本身可以有效地抑制肿瘤生长,辅以放疗后则可进一步增强体内抑瘤效果,证实作者提出的乏氧自增强策略在乏氧肿瘤的放疗增敏中具有重要潜力。

大气过氧自由基化学是对流层大气化学的重要组成部分,对于理解大气氧化性、光化学臭氧和二次有机气溶胶生成等核心科学问题具有重要意义。有机过氧自由基(RO2)作为对流层化学的关键中间体,对大气中自由基的循环和二次污染物如臭氧和二次有机气溶胶(SOA)的产生具有控制性影响。在偏远的地区,即清洁的大气条件下,有机过氧自由基自由基主要发生自反应、与HO2自由基或其它RˊO2自由基发生交叉反应,这是该条件下RO2主要的汇。过氧自由基的自反应和交叉反应对于对流层HOx(OH,HO2)物种的浓度有重大影响。RO2自反应一方面导致当地臭氧产率下降,另一方面,因为一些自反应产物是稳定物质,这会导致大气中自由基物种浓度的下降,RO2自反应形成的二聚体有机过氧化物被认为是形成高氧有机分子(HOMs)的重要途径,在SOA的形成和增长中起着重要作用,因此自反应对于大气中RO2的命运也很重要。本文使用微波放电流动管作为反应器,在实验室内模拟乙基过氧自由基、丁基过氧自由基和环戊基过氧自由基自反应的过程,通过使用先进的真空紫外光电离质谱(VUV-TOF-MS),对自反应的动力学进行了研究。分别采用9.6 eV、10.6 eV光子能量的真空紫外放电灯作为光电离源获得了光电离质谱,从中可以观察到自反应各个通道的产物;同时为了确认产物的来源并验证反应机制,我们通过改变反应时间开展了动力学实验。根据动力学数据与理论计算结果的拟合以及光电离效率谱中的峰面积对比,对二聚体产物ROOR的通道分支比进行预测。本论文具体的研究内容主要有以下三个部分:1.AG-221采购乙基biogas slurry过氧自由基C2H5O2自反应研究。使用VUV-TOF-MS观测到了 C2H5O2自反应产物乙氧基C2H5O、乙醛C2H4O、乙醇C2H5OH以及二聚体C2H5OOC2H5,接着开展了动力学实验和模拟,对自反应的产物来源和形成机制进行确认,根据光电离质谱的峰面积比和动力学结果的拟合,对于二聚体Lapatinib产物C2H5OOC2H5通道的分支比约为10±5%。同时也对C2H5O2自反应的势能面进行计算,从理论计算的角度对其进行确认。2.丁基过氧自由基C4H9O2自反应研究。C4H9O2存在两种同分异构体,在流动管反应器内会发生自反应和交叉反应,生成丁氧基C4H9O,丁醛C4H8O、2-丁酮C4H8O和正丁醇C4H9OH和仲丁醇C4H9OH、二聚体丁基过氧化物C4H9OOC4H9。我们也开展了动力学实验和模拟,对重要产物的来源和形成机制进行确认根据光电离质谱的峰面积比和动力学结果的拟合,对于二聚体产物C4H9OOC4H9通道的分支比约为12±2%。3.环戊基过氧自由基C5H9O2自反应研究。环戊烷可作为环烷烃氧化的原型烃,C5H9O2发生自反应产生环戊氧基C5H9O,环戊酮C5H8O和环戊醇C5H9OH以及二聚体环戊基过氧化物C5H9OOC5H9;环戊氧基在常温很容易发生“β-裂解”开环,产生新的烷基型过氧自由基参与自反应或与C5H9O2交叉反应,产生戊二醛等产物。我们也开展了动力学研究,通过测量关键物种质谱信号随反应时间的变化情况以及动力学理论模拟,对上述重要产物的来源和形成机制进行确认,根据光电离质谱的峰面积比和动力学结果的拟合,对于二聚体产物C5H9OOC5H9通道的分支比约为5%,获得了详细的C5H9O2自反应机理。

目的 研究1,8-桉叶油Fulvestrant素对2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制。方法 使用高糖作用于小鼠胰岛β细胞以建立细胞铁死亡模型，考察低、高剂量1,8-桉叶油素（0.25、0.5μmol/L）对胰岛β细胞中Fe2+水平的影响，并考察1,8-桉叶油素（0.5μmol/L）联合铁死亡诱导剂Erastin(20μmol/L)和抑制剂Ferrostatin-1(20μmol/L)后对胰岛β细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(LEE011纯度GPX4)、环氧合酶2(COX2)蛋白表达的影响。采用高脂高糖饲料饲养联合腹腔注射链脲佐菌素构建2型糖尿病小鼠模型，考察低、高剂量1,8-桉叶油素（50、200 mg/kg）对模型小鼠胰腺组织病理形态、铁含量以及GPX4、COX2蛋白表达的影响。结果 细胞实验结果显示，与模型组比较，经1,8-桉叶油素干预后，胰岛β细胞中Fe2+水平显著降低（P<0.05）;GPX4蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,COX2蛋白表达水平显著降低（P<0.05），且联合Ferrostatin-1后上述两种蛋白表达趋势相同，而联合Erastin后差异无统计学意义。动物实验结果显示，与模型组比较，经1,8-桉叶油素干预后，小鼠胰岛结构恢复完整，形态有所改善；胰腺组织中铁含量和COX2蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,GPX4蛋白表达水平显genetics polymorphisms著升高（P<0.05）。结论 1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞损伤具有明显的改善作用，其作用机制可能与降低细胞内铁沉积以及调控铁死亡相关蛋白有关。

目的:乳腺癌已成为近年来女性发病率最高的癌症,且死亡人数逐年上升,严重威胁女性健康。TP53是一种被广泛研究的抑癌基因,其编码的蛋白质TP53在细胞中扮演着重要的角色。TP53基因突变是导致乳腺癌等不同类型肿瘤发生和发展的关键因素之一。本文对比探究不同位点突变的TP53对于乳腺癌重要特性的影响并分析其机制,以期增进对于不同位点突变的TP53的了解,为TP53突变型乳腺癌提供潜在的新型临床诊治策略。方法:1)生信分析不同乳腺癌亚型TP53突变的基因组和转录组特征:下载TCGA乳腺癌基因组和表达谱数据,分别采用差异表达分析和功能富集鉴定不同乳腺癌亚型TP53突变相关的差异基因和信号通路,并计算免疫和m~6A评分。2)构建不同位点突变的TP53稳转细胞系:首先构建不同位点突变的TP53质粒,慢病毒感染乳腺癌细胞系MCF-7,构建出稳转细胞系。3)研究不同位点突变的TP53对乳腺癌细胞功能的影响:对于不同位点突变的TP53稳转细胞系,利用CCK-8实验和克隆形成实验研究细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的二维和三维迁移能力、Western blot实验检测相关蛋白表达水平、q PCR实验检测相关基因m RNA转录水平。4)研究TP53突变对乳腺癌m~6A修饰的影响:斑点杂交实验检测细胞m~6A修饰水平变化,利用Western blot、q PCR实验检测相关基因表达变化。5)研究不同位点突变的TP53对乳腺癌细胞成瘤能力的影响:利用4-5周的免疫缺陷裸鼠进行荷瘤实验,观测不同位点突变TP53造成的乳腺癌细胞成瘤能力差异。结果:1)生信结果表明TP53突变对乳腺癌具有重要影响:将TCGA乳腺癌样本根据TP53突变状态分组为TP53野生型和突变型两组,采用差异表达分析和KEGG信号通路分析,结果显示TP53突变组显著富集在抗原提呈、自然杀伤细胞毒性等免疫信号通路。此外,通过对不同亚型和TP53突变分Short-term antibiotic组,结果显示与其他分子亚型相比,Basal-like亚型中m~6A评分显著增加。此外,TP53突变后乳腺癌细胞m~6A甲基转移酶分子METTL3、METTL14表达水平下降,RBM15、WTAP表达水平上升。2)成功构建不同位点突变的TP53稳转细胞系:首先提PF-02341066取细胞基因组DNA后进行PCR扩增,并对PCR产物进行测序,从而选取了野生型TP53乳腺癌细胞系MCF-7作为实验细胞系。再筛选TCGA数据库中5种乳腺癌TP53热点突变:R175H、R248Q、R248W、R273C和R273H,构建了TP53点突变MCF-7稳转细胞系并进行实验。3)发现不同位点突变的TP53在乳腺癌细胞中以不同的方式发挥促癌作用:R248Q、R248W、R273C、R273H点突变显著促进乳腺癌细胞增殖和周期进展;R248W、R273C点突变显著抑制乳腺癌细胞凋亡;R175H点突变显著促进乳腺癌selleckchem MC3细胞迁移。不同位点突变的TP53影响乳腺癌免疫微环境,增强细胞免疫抑制,促进肿瘤细胞免疫逃逸。4)TP53突变影响乳腺癌细胞m~6A修饰:TP53突变提高乳腺癌细胞的m~6A修饰水平,影响m~6A修饰相关基因的表达,TP53突变后乳腺癌细胞m~6A甲基转移酶分子METTL3、METTL14表达水平下降,RBM15、WTAP表达水平上升。5)TP53突变促进乳腺癌细胞成瘤能力:TP53突变后乳腺癌细胞成瘤能力增强,肿瘤体积变大。结论:不同位点突变的TP53在乳腺癌中通过不同的方式发挥促癌作用,包括促进乳腺癌细胞的增殖和迁移,抑制乳腺癌细胞的凋亡和免疫水平,促进乳腺癌细胞成瘤能力。TP53突变提高了乳腺癌细胞的m~6A修饰水平,影响m~6A相关基因的表达水平。

以半叶马尾藻为原料，分别用黑曲霉和米曲霉发酵提取可溶性膳食纤维（soluble dietary fiber,SDF），对比两种菌种发酵对马尾藻SDF得率、结构改善、功能特性、抗氧化活性的影响。结果表明，两种菌种发酵提取的SDF具有不同的优势，与未经处理的SDF相比，米曲霉发酵SDF得率提高2.625倍，制得的SDF色泽明亮，结构疏松，具有更高的纯度和更低的分子质量（6.3 kDa），提高了其持水能力和胆酸钠吸附能力；而黑曲霉发酵SDF得率提高2.375倍，得到的SDF具有多孔结构，分子质量为39.4 kDa，其持水能力、胆固醇和胆酸钠吸附能力显著上升。体外抗氧化实验发现，发酵处理提高了SDF对羟自由基清除能力，降低了对1,1selleckchem Z-VAD-FMK-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基和氧自由基的清除selleckchem BMS-907351能力。研究结果可为真菌发酵制备SDF及其在功能性Biophilia hypothesis食品的开发与应用提供参考。

由于植物蛋白肉经常因口感差、营养素种类单一以及非天然添加剂的添加等问题,限制了其进一步的发展。因此,本文尝试将β-葡聚糖与大豆分离蛋白复配来制备植物蛋白肉,以期在丰富植物蛋白营养素的同时还能改善植物蛋白肉的品质。本文探究了β-葡聚糖的添加量对低水分/高水分植物蛋白肉理化特性的影响,以及其影响机理。研究结果如下:(1)随着β-葡聚糖的添加量的增大,低水分植物蛋白肉的硬度先减小后增大,这主要受H-S-QNSC125066体内(氢键、疏水相互作用、二硫键的Cardiac histopathology交互作用)增强的影响。添加5%的β-葡聚糖会促进二硫键(S)和氢键(H)的形成,提高β-葡聚糖-大豆分离蛋白挤出物的持油性和蒸煮特性。同时,它还会促进H和H-S-Q(氢键、疏水相互作用、二硫键的交互作用)的形成,同时破NN2211半抑制浓度坏Q-S(疏水相互作用与二硫键的交互作用)的相互作用,以提高在后续加工过程的营养保留率。此外,在低水分挤压过程中β-葡聚糖与大豆分离蛋白形成了分子量较大的化合物,维持这种化合物的主要作用力是S和H。(2)随着β-葡聚糖的添加量的增大,高水分植物蛋白肉的持水性、水溶性指数、拉伸力均降低,咀嚼性增加,这主要受β折叠结构的含量降低的影响。5%添加量的β-葡聚糖通过提高二级结构中的α螺旋结构的含量,降低二级结构中的β折叠和β转角的含量,加深β-葡聚糖-大豆分离蛋白挤出物的色泽,以及提高了β-葡聚糖-大豆分离蛋白挤出物的持油性。此外,β-葡聚糖与大豆分离蛋白在高水分条件下形成的化合物主要是由二级结构中的α螺旋、β折叠和β转角来维持。(3)β-葡聚糖的添加量可以调节低水分/高水分植物蛋白肉的硬度,从而改善低水分/高水分植物蛋白肉成品的口感。同时,β-葡聚糖的添加有助于高水分/低水分植物蛋白肉的持油性的提高,提高产品的多汁性。此外,β-葡聚糖和大豆蛋白在低水分挤压下所形成化合物的结构主要是由S和H维持的,而β-葡聚糖和大豆蛋白在高水分挤压下所形成化合物的结构主要是由α螺旋、β折叠和β转角来维持。

目的 观察针刺对青光眼患者的图形视网膜电图(pattern-electroretinogram, P-ERG)、图形视诱发电位(pattern visual evoked potential, P-VEP)、振荡电Rapamycin采购位(oscillation potentials, OPs)及视野光敏度的影响。方法 选取270例青光眼患者,随机分为治疗组(136例136眼)和对照组(134例134眼)。对照组予基础降眼压治疗,治疗组在对照组的基础上予针刺治疗。比较两组治疗前后视觉电生理指标(P-ERG的P50和Nlatent autoimmune diabetes in adults95的幅值与潜伏期、P-VEP的P100的幅值及潜伏期、OPs)以及视野光敏度[视野平均光MRTX849敏度(mean light sensitivity, MS)和平均缺损(mean defect of visual field, MD)]的变化,并比较两组临床疗效。结果 治疗后,两组P-ERG的P50和N95幅值及潜伏期、P-VEP的P100幅值及潜伏期和OPs优于治疗前(P<0.05);治疗组P-ERG的P50和N95幅值、P-VEP的P100幅值和OPs高于对照组(P<0.05),P-ERG的P50和N95潜伏期及P-VEP的P100潜伏期低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组视野MS和MD优于治疗前(P<0.05);治疗组视野MS高于对照组(P<0.05),视野MD低于对照组(P<0.05)。治疗组总有效率高于对照组(P<0.05)。结论 在基础降眼压治疗的基础上,针刺治疗青光眼可以改善视野光敏度,保护视神经,改善视功能。