目的:抑制醛糖还原酶(Aldosereductase,AR)可缓解缺血性脑损伤,但其作用机制尚待进一步研究。PhelligridimerA(PA)是从桑黄菌中分离纯化所得的大环类化合物,具有抑制醛糖还原酶的作用。已有研究显示PA具有抗氧化活性,但能否改善脑缺血再灌注损伤还不清楚。本课题通过建立脑缺血再灌注损伤体内外模型考察PA对脑损伤的改善作用,并在此基础上探索其作用的分子机制。方法:(1)在小鼠海马神经元细胞系HT-22细胞中构建氧糖剥夺/复氧(Oxygen-gTelaglenastat半抑制浓度lucose deprivation and reoxygenation,OGD/R)模型,通过 siRNA 敲低AR,验证OGD/RHepatitis C条件下,AR敲低是否具有神经保护作用;通过CCK-8实验、Calcein-AM/PI染色及cleaved capsase 3蛋白检测考察PA对神经元凋亡的影响;通过TMRE染色、ATP检测、Mito-tracker染色、Rhod2染色考察PA对线粒体功能及形态的影响;通过CellROX染色及GSH检测考察PA对OGD/R诱导的氧化应激的影响;通过Western blot检测PA对Mfn-2蛋白水平、内质网应激相关的蛋白GRP78表达、IRE1α及eIF2α的磷酸化水平及MAPK信号通路的影响。(2)建立大鼠脑缺血再灌注(Middle cerebral artery occlusion/Reperfusion,MCAO/R)模型,通过TTC染色及神经功能缺陷评分考察PA在整体条件下对缺血性脑损伤的保护作用;采用Western blot检测脑缺血半暗带区Mfn-2、p-DRP1水平、内质网相关蛋白eIF2α的磷酸化水平及MAPK信号通路p-P38 MAPK的变化。结果:(1)采用si-RNA敲低AR可减少OGD/R引起的细胞死亡。PA可剂量(1-10 μM)依赖性地提高HT-22细胞活力,减少OGD/R诱导的LDH释放,逆转OGD/R诱导的细胞凋亡。(2)PA可提高OGD/R模型条件下HT-22细胞的线粒体膜电位及细胞内ATP水平、线粒体面积及降低线粒体Ca2+水平。同时,PA可提高Mfn-2的蛋白水平。敲低Mfn-2削弱了 PA在OGD/R模型中保护HT-22细胞的作用。(3)PA可减少OGD/R导致的ROS蓄积及提高GSH的水平。(4)PA可下调OGD/R模型条件下内质网应激相关蛋白GRP78、p-IRE1α和p-eIF2α的水平。敲低Mfn-2抵消了 PA下调eIF2α磷酸化水平的作用。同时,PA也可提高内质网应激模型中细胞活力,降低GRP78的表达及EIF2α的磷酸化。(5)PA可抑制OGD/R激活MAPK信号通路及内质网应激模型中JNK的活化。(6)在MCAO/R模型中,PASAHA细胞培养可减少SD大鼠的脑梗死体积,降低神经功能缺陷评分。PA可提高缺血半暗带区Mfn-2的表达,减轻MCAO/R诱导的DRP1、eIF2α、P38 MAPK 及 ERK1/2 的激活。结论:PA可对抗OGD/R诱导的神经细胞死亡,减少MCAO/R导致的脑梗死及运动功能障碍。其作用机制可能是通过上调Mfn-2的表达,从而维持线粒体和内质网稳态,恢复线粒体功能及减轻内质网应激。