“二仙”调控AMPK-PGC1α通路改善心肌缺血再灌注损伤的研究

目的:探究“二仙”(仙茅和仙灵脾)对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)具有保护作用,其可能通过AMPK-PGC1α通路发挥改善MIRI作用。方法:将60只160-180g雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、心肌缺血再灌注模型(I/R)组、“二仙”低剂量(Er-Xian-L)组、“二仙”中剂量(Er-Xian-M)组、“二仙”高剂量(Er-Xian-H)组,每组12只。Sham组与I/R组均给予10ml/kg等量生理盐水连续灌胃2周,每天1次。Er-Xian低、中、高剂量组分别按2.5g/kg、5g/kg、10g/kg原药剂量用提取物药液连续灌胃2周,每天1次。大鼠末次灌胃给药后,通过结扎冠状动脉前降支建立MIRI模型,Sham组只穿线不结扎。先结扎冠状动脉前降支缺血30 min,再进行再灌注2h后,通过TTC染色法测定心肌梗死面积;肌酸激酶同工酶(CK-MB)ELISA试剂盒测定血清CK-MB水平含量;HE染色观察心肌组织病理情况;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率;Western Blot检测P-AMPKα(T172)、PGC1α蛋白表达水平。使用Graphpad 9.4.1软件数据统计分析,采用单因素方差分析方法,数据以均数±标准差(Mean±SD)表示,P<0.05认为有统计学意义。结果:1.Er-Xian对MIRI大鼠心梗面积的影响:TTC染色结果显示,I/R组心梗面积较Sham组显著增加,Er-Xian各剂量组心梗面积较I/R组均有明显下降。对Er-Xian各剂量组两两比较Median paralyzing dose,Er-Xian各剂量组均具有统计学差异。表明Er-Xian预处理可以降低MIRI大鼠的心梗面积,并呈剂量依赖性。2.Er-Xian对MIRI大鼠血清CK-MB水平的影响:CK-MB结果显示,I/R组CK-MB水平较Sham组显著升高,ErPF-02341066研究购买-Xian各剂量组CK-MB水平较I/R组均有显著下降。对Er-Xian各剂量组两两比较,Er-Xian-M与Er-Xiaselleckchemn-H组的CK-MB水平较Er-Xian-L组具有显著性差异,而Er-Xian-M组与Er-Xian-H组的CK-MB水平无统计学意义。表明Er-Xian预处理呈剂量依赖性减轻MIRI大鼠心肌细胞CK-MB释放,发挥心肌保护作用。3.Er-Xian对MIRI大鼠心肌病理的影响:HE染色结果显示,Sham组心肌组织整体结构基本正常,心肌细胞排列整齐紧密,可见横纹,组织内未见明显的炎症细胞浸润。I/R组心肌组织整体结构异常,心肌细胞排列紊乱,部分心肌纤维分叉断裂,心肌间隙重度水肿,组织内可见炎症细胞浸润。Er-Xian各剂量组相较I/R组心肌细胞与心肌间隙水肿有不同程度减轻,并呈剂量依赖性显著抑制组织炎症细胞浸润。表明Er-Xian呈剂量依赖性改善MIRI大鼠心肌组织形态结构。4.Er-Xian对MIRI大鼠心肌细胞凋亡率的影响:TUNEL染色结果显示,I/R组心肌细胞凋亡率较Sham组显著升高,而Er-Xian各剂量组心肌细胞凋亡率较I/R组均有不同程度下降。对Er-Xian各剂量组两两比较,心肌细胞凋亡率水平均具有显著性差异。表明Er-Xian预处理呈剂量依赖性减轻MIRI大鼠心肌细胞凋亡率。5.Er-Xian对MIRI大鼠P-AMPKα(T172)、PGC1α蛋白表达的影响:Western blot结果显示,Sham组与I/R组的P-AMPKα(T172)、PGC1α表达量具有统计学意义,Er-Xian各剂量组P-AMPKα(T172)、PGC1α表达量与I/R组比较具有统计学意义。对Er-Xian各剂量组两两比较,各组间P-AMPKα(T172)、PGC1α的表达量均具有统计学意义。提示经过Er-Xian预处理后的MIRI大鼠的P-AMPKα(T172)、PGC1α蛋白表达量有明显增加,呈剂量依赖性上调了AMPK-PGC1α通路。结论:“二仙”通过减少心梗面积、降低CK-MB水平、改善心肌组织形态结构、降低心肌细胞凋亡率发挥改善MIRI作用,并呈剂量依赖性,其作用机制与上调AMPK-PGC1α通路有关。