研究目的(1)探究应用RNA干扰技术抑制波形蛋白(Vimentin,VIM)的表达后对肝门部胆管癌细胞株QBC939细胞克隆以及分裂的影响。(2)构建肝门部胆管癌皮下荷瘤裸鼠模型,探究应用RNA干扰技术抑制VIM的表达后对肝门部胆管癌细胞株QBC939荷瘤裸鼠皮下移植瘤体积生长的影响。(3)初步揭示VIM在肝门部胆管癌进展中的作用机制。研究方法(1)设计并合成三组不同核酸序列的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)(siRNA-VIM1、siRNA-VIM2、siRNA-VIM3)以及阴性对照序列(siRNA-NC)。(2)体外培养肝门部胆管癌QBC939细胞,设立实验组和对照组,分别转染siRNA-VIM1、siRNA-VIM2、siRNA-VIM3以及siRNA-NC,观察抑制VIM表达后对QBC93MLN8237纯度9细胞克隆数目及细胞分裂的影响。(3)选用4-6周龄,体重(13±2)g的SPF级雌性裸鼠18只适应性饲养7天,按照每只0.2ml并且细胞数目为2×10~6的QBC939细胞悬液于裸鼠右前肢腋窝靠背部约0.3cm处接种,约1周左右可在接种部位扪及类圆形的瘤体,并且每个瘤体大小无明显差异,提示建模成功。当肿瘤长至直径约0.5cm时,随机分组后给予药物干预。Control组(生理盐水0.2ml/只)、siRNA-VIM组(每只0.Drug Screening2ml的siRNA-VIM2)、siRNA-NC组(每只0.2ml的siRNA-NC)。瘤体内注射,每天一次,15天后取出瘤体测量体积,HE染色验证造模情况并用q RT-PCR法和免疫组织化学染色法检测瘤体中VIM的表达。实验结果(1)将siRNA-VIM及siRNA-NC转染进入肝门部胆管癌QBC939细胞,与对照组相比,三组核酸序列不同的siRNA抑制VIM的表达均可以使QBC939细胞的克隆形成数和细胞分裂数呈现出显著减少的趋势。(2)动物体内实验比较各组肝门部胆管癌荷瘤裸鼠的肿瘤体积,发现siRNA-VIM组肿瘤体积小于Control组(P<0.05)和siRNA-NC组(P<0.05)。(3)qRT-PCR检测显示,与Control组和siRNA-NC组相比,siRNA-VIM组的VIM表达显著下降(P<0.05)。(4)HE染色验证裸鼠造模情况后用免疫组织化学染色法检测得出肝门部胆管癌荷瘤裸鼠瘤体中,与Control组和siRNA-NC组相比,siRNA-VIM组的VIM表达显著下降(P<0.05)。结论:(1)抑制VIM表达可以使QBCQ939细胞株的细胞克隆及细胞分裂能力降低。(2)抑制VIM表达能有效抑制肝门部胆管癌裸鼠移植瘤的生长。(3)抑制VIM表达是抑制肝门部胆管癌进展的机制之一,VIM在肝门部胆管癌的进展中起一定作用。(4BLZ945细胞培养)VIM作为上皮-间充质转化(EMT)的重要标志物,与肿瘤的进展有密切联系,深入研究VIM在肿瘤进展中的机制,对肿瘤的靶向治疗具有重要意义,VIM有望成为抗肿瘤治疗靶点的新目标。