肝素是由己糖醛酸(Hexuronic acid,HexA)和葡萄糖胺(Glucosamine,GlcN)通过α-1,4糖苷键连接的二糖重复单元组成的高硫酸化线性异质多糖,在临床上作为抗凝血剂使用。由未分级肝素经过化学降解或酶法降解制备的低分子肝素(Low molecular weight heparins,LMWHs)具有生物利用度高、半衰期长及副作用小的优点,因此逐渐取代未分级肝素成为了最主要的临床抗凝血产品。近年来,随着全球人口老龄化、静脉血栓栓塞症(VTE)诊断例数迅速增加和新冠防治需求的增加,抗血栓药物需求呈明显上升趋势。作为FDA批准的唯一肝素来源,猪来源肝素原料的短缺或许会是现在或者将来要面临的主要问题。研究表明羊肠肝素在生物活性和结构方面与猪肠肝素较为相似,可能会有部分商家将羊肠肝素钠掺入到猪肠肝selleckchem素钠中,造成产品质量的不稳定,进而可能影响到患者的生命安全。目前对肝素类药物的来源鉴定主要体现在肝素原料和未分级肝素层面,其中比较广泛的方法就是利用实时荧光定量PCR来检测肝素中残留的核酸。但是由于低分子肝素在经过各种化学或者酶法降解制备、纯化等一系列操作步骤之后,其残留的核酸可能早已被破坏或者去除,因此开发一种新的用于区分猪和羊来源低分子肝素的分析方法至关重要。依诺肝素钠作为临床上最常用的低分子肝素类药物,在抗凝血和治疗血栓性疾病等方面发挥了重要的作用。本论文研究了猪和羊来源的依诺肝素钠还原端的结构差异,并建立了区分二者的可靠方法:通过亲水相互作用色谱-质谱连用技术(Hydrophilic interaction liquid chromatography-mass spectrometry,HILIC-MS)分析依诺肝素钠还原端的结构差异来实现肝素来源的评判。首先本研究以猪肠和羊肠来源的肝素作为原料,γ-aminobutyric acid (GABA) biosynthesis利用β-消除降解法制得依诺肝素钠,并对依诺肝素钠的分子量和1,6-内醚含量进行分析,其结果均符合美国药典(UnPF-6463922分子式ited States Pharmacopeia,USP)的相关规定。然后利用2-氨基吖啶酮(2-Aminoacridone,AMAC)标记依诺肝素钠的还原端,之后经肝素酶完全酶解,通过HILIC-MS来分析依诺肝素钠的还原端结构。本研究发现:经AMAC标记后,位于还原端的Δdp3(1S,1Ac)-AMAC和位于还原端的ΔIVS-AMAC在两种动物来源的依诺肝素钠样品中存在显著差异。最后,通过HILIC-MS/MS对特异性标志物Δdp3(1S,1Ac)-AMAC进行精细结构表征,并确定该标志物的结构为ΔIIAH-AMAC(ΔUA-GlcNAc6S-HexA-AMAC)。本研究开发了一种新的鉴定依诺肝素钠的物种来源的方法,在保障肝素类药物的真实性和安全性等方面具有重要意义。