目的:乳腺癌已成为近年来女性发病率最高的癌症,且死亡人数逐年上升,严重威胁女性健康。TP53是一种被广泛研究的抑癌基因,其编码的蛋白质TP53在细胞中扮演着重要的角色。TP53基因突变是导致乳腺癌等不同类型肿瘤发生和发展的关键因素之一。本文对比探究不同位点突变的TP53对于乳腺癌重要特性的影响并分析其机制,以期增进对于不同位点突变的TP53的了解,为TP53突变型乳腺癌提供潜在的新型临床诊治策略。方法:1)生信分析不同乳腺癌亚型TP53突变的基因组和转录组特征:下载TCGA乳腺癌基因组和表达谱数据,分别采用差异表达分析和功能富集鉴定不同乳腺癌亚型TP53突变相关的差异基因和信号通路,并计算免疫和m~6A评分。2)构建不同位点突变的TP53稳转细胞系:首先构建不同位点突变的TP53质粒,慢病毒感染乳腺癌细胞系MCF-7,构建出稳转细胞系。3)研究不同位点突变的TP53对乳腺癌细胞功能的影响:对于不同位点突变的TP53稳转细胞系,利用CCK-8实验和克隆形成实验研究细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的二维和三维迁移能力、Western blot实验检测相关蛋白表达水平、q PCR实验检测相关基因m RNA转录水平。4)研究TP53突变对乳腺癌m~6A修饰的影响:斑点杂交实验检测细胞m~6A修饰水平变化,利用Western blot、q PCR实验检测相关基因表达变化。5)研究不同位点突变的TP53对乳腺癌细胞成瘤能力的影响:利用4-5周的免疫缺陷裸鼠进行荷瘤实验,观测不同位点突变TP53造成的乳腺癌细胞成瘤能力差异。结果:1)生信结果表明TP53突变对乳腺癌具有重要影响:将TCGA乳腺癌样本根据TP53突变状态分组为TP53野生型和突变型两组,采用差异表达分析和KEGG信号通路分析,结果显示TP53突变组显著富集在抗原提呈、自然杀伤细胞毒性等免疫信号通路。此外,通过对不同亚型和TP53突变分Short-term antibiotic组,结果显示与其他分子亚型相比,Basal-like亚型中m~6A评分显著增加。此外,TP53突变后乳腺癌细胞m~6A甲基转移酶分子METTL3、METTL14表达水平下降,RBM15、WTAP表达水平上升。2)成功构建不同位点突变的TP53稳转细胞系:首先提PF-02341066取细胞基因组DNA后进行PCR扩增,并对PCR产物进行测序,从而选取了野生型TP53乳腺癌细胞系MCF-7作为实验细胞系。再筛选TCGA数据库中5种乳腺癌TP53热点突变:R175H、R248Q、R248W、R273C和R273H,构建了TP53点突变MCF-7稳转细胞系并进行实验。3)发现不同位点突变的TP53在乳腺癌细胞中以不同的方式发挥促癌作用:R248Q、R248W、R273C、R273H点突变显著促进乳腺癌细胞增殖和周期进展;R248W、R273C点突变显著抑制乳腺癌细胞凋亡;R175H点突变显著促进乳腺癌selleckchem MC3细胞迁移。不同位点突变的TP53影响乳腺癌免疫微环境,增强细胞免疫抑制,促进肿瘤细胞免疫逃逸。4)TP53突变影响乳腺癌细胞m~6A修饰:TP53突变提高乳腺癌细胞的m~6A修饰水平,影响m~6A修饰相关基因的表达,TP53突变后乳腺癌细胞m~6A甲基转移酶分子METTL3、METTL14表达水平下降,RBM15、WTAP表达水平上升。5)TP53突变促进乳腺癌细胞成瘤能力:TP53突变后乳腺癌细胞成瘤能力增强,肿瘤体积变大。结论:不同位点突变的TP53在乳腺癌中通过不同的方式发挥促癌作用,包括促进乳腺癌细胞的增殖和迁移,抑制乳腺癌细胞的凋亡和免疫水平,促进乳腺癌细胞成瘤能力。TP53突变提高了乳腺癌细胞的m~6A修饰水平,影响m~6A相关基因的表达水平。