目的本研究采用慢性不可预见性温和应激刺激(chronic unpredict mild stress,CUMS)结合孤养法制备慢性应激抑郁大鼠模型,通过观察蒙药槟榔-13味丸对抑郁症模型大鼠行为学变化、反映肠道粘膜屏障功能水平指标血清二胺氧化酶(DAO)、炎性因子(IL-1β、TNF-a)、HPA轴标志物CORT、回肠病理组织学、肠道菌群的多样性与丰度及海马区脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,从肠道通透性的角度探讨蒙药槟榔-13味丸治疗抑郁症的作用机制,以期为槟榔-13味丸的抗抑郁机制提供新的理论基础与实验依据。方法选用SPF级雄性SD大鼠60只,体重(180±20g),随机分为正常组、模型组、氟西汀组、槟榔-13味丸低、中、高剂量6组,每组10只。适应性喂养一周后,除正常组大鼠5只一笼,自由饮水和进食并无刺激外,另外五组大鼠均单笼饲养,并受到连续28天(每天随机给予一种)的各种温和刺激(24小时禁食、24小时禁水、24小时昼夜颠倒、4℃冷水游泳5分钟、夹尾5分钟、24小时湿床、束缚4小时、45°笼子倾斜24小时),同一种刺激一周内不重复出现。同时蒙药组和氟西汀组大鼠分别进行槟榔-13味丸和氟西汀相应剂量的灌胃处理,蒙药低、中、高剂量组槟榔-13味丸计量分别为0.25g/kg/d,0.5g/kg/d,1.0g/kg/d,氟西汀剂量为3.3mg/kg/d,连续给药28天,各组均按10ml/kg给药,正常组和模型组灌服等容量蒸馏水。观察记录大鼠一般情况,包括表征、体重,采用旷场实验、糖水偏好实验和强迫游泳实验对大鼠的抑郁程度进行行为学检测。通过酶联免疫法(ELISA)法检测大鼠DAO、IL-1β、TNF-a、CORT含量。采用HImidazole ketone erastinE染色观察大鼠回肠病理组织学变化。采用16s RNA高通量测序技术,检查大鼠粪便中肠道菌群的多样性及丰度。采用Western-blot技术检测大鼠海马区BDNF表达水平。结果1、大鼠一般情况观察结果:模型组大鼠精神状态较差,嗜睡、喜欢蜷缩,毛发凌乱、枯黄,叫声微弱。槟榔-13味丸组、氟西汀组大鼠与模型组相比一般状态明显改善。各组大鼠体重变化结果:与正常组比较,模型组大鼠体重从实验开始第7天增长较慢,从第21天明显下降(P<0.05);与模型组比较,槟榔-13味丸干预的大鼠从第14天开始药物作用显现,到第28天,槟榔-13味丸高剂量组大鼠体重显著上升(P<0.05);与模型组比较,氟西汀组从第21天开始体重显著增加(P<0.05)。2、行为学检测结果:旷场实验结果提示:与正常组比较,模型组大鼠水平、直立运动次数均显著减少(P<0.05,P<0.05);与模型组比较,槟榔-13味丸和氟西汀组大鼠水平、直立运动次数均显著增加(P<0.05,P<0.05)。糖水偏好实验结果比较:(1)造模前,各组大鼠均无显著性差异(P>0.05)。(2)造模结束后,与正常组比较,模型组大鼠蔗糖水偏嗜度显著降低(P<0.05)。与模型组比较,槟榔-13味丸高剂量组和氟西汀组大鼠蔗糖水偏嗜度显著增多(P<0.05,P<0.05)。强迫游泳4分钟内不动时间比较:与正常组比较,模型组大鼠强迫游泳不动时间显著增加(P<0.05);与模型组比较,槟榔-13味丸medical legislation和氟西汀组能显著降低大鼠强迫游泳不动时间(P<0.05,P<0.05)。3、血清二胺氧化酶(DAO)检测结果:与正常组比较,模型组大鼠血清DAO水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,槟榔-13味丸高、低剂量组大鼠DAO水平显著降低(P<0.05,P<0.05),氟西汀组大鼠明显降低(P<0.05)。4、血清炎性因子(IL-1β、TNF-α)检测结果:与正常组比较,模型CCRG 81045核磁组大鼠IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.05,P<0.05),与模型组比较,槟榔-13味丸高剂量组大鼠IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.05,P<0.05),氟西汀组大鼠明显降低(P<0.05)。5、血清皮质醇(CORT)检测结果:与正常组比较,模型组大鼠CORT水平降低,但无显著性差异(P﹥0.05);与模型组比较,槟榔-13味丸高剂量组和氟西汀组大鼠DAO水平升高,但无显著性差异(P﹥0.05)。6、大鼠回肠病理组织学变化:HE染色结果:正常组大鼠回肠结构完整,绒毛排列整齐,无炎症表现。模型组上皮结构破坏,绒毛脱落较多、数量减少、排列稀疏,绒毛黏膜下层有水肿。与模型组相比,槟榔-13味丸组和氟西汀组均减轻了炎症细胞的浸润和绒毛损伤的程度。7、槟榔-13味丸对肠道菌群结构及功能的影响:7.1Alpha多样性分析:模型组大鼠Chao1指数、Simpson指数升高,但无显著性差异(P﹥0.05);Shannon指数降低,但无显著性差异(P﹥0.05)。与模型组比较,槟榔-13味丸高剂量组、低剂量组Chao1指数降低,但无明显差异(P﹥0.05)。7.2物种组成分析:与正常组比较,模型组大鼠的肠道菌群丰度下降不显著,与模型组大鼠比较,槟榔-13味丸中剂量组在Firmicutes、Proteobacteria、Actinobacteria、Bacteroidetes丰度有调解倾向,但无显著差异(P>0.05)。8、槟榔-13味丸对大鼠海马区BDNF水平的调节作用:与正常组比较,模型组海马区BDNF水平降低(P<0.05);与模型组比较,氟西汀组和槟榔-13味丸高剂量组海马区BDNF水平升高(P<0.05)。结论1、蒙药槟榔-13味丸能改善慢性不可预见性应激诱导的大鼠抑郁样行为。2、蒙药槟榔-13味丸对抑郁症大鼠回肠通透性的变化具有调节作用。3、蒙药槟榔-13味丸可能通过调节机体炎症及海马BDNF水平改善慢性应激诱导的大鼠抑郁样行为。