禽流感(Avian influenza viruses,AIV)是一种全球范围内的流行性疾病,而H5N1亚型禽流感病毒更是作为其中主要流行毒株大肆蔓延。自H5N1亚型禽流感病毒爆发以来,不仅仅是给禽类养殖业带来巨大的损失,更是对人类造成巨大威胁。随着候鸟的迁徙,全球已有六十多个国家发现H5N1亚型禽流感病毒,如今摆在我们面前的不光是对H5N1亚型禽流感病毒的预防和治疗,H5N1亚型禽流感病毒的检测也成为重中之重。传统的病毒检测方法在检测时间、检测灵敏度、检测操作步骤等方面或多或少的存在一些缺点,不适用于现场快速检测。核酸适配体是指通过指数富集配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)技术在体外筛选的,对靶分子具有高亲和力、高特异性的单链DNA或RNA。核酸适配体具有靶标物质范围广,筛选周期短,亲和力高,特异性好,易保存运输等诸多优点,被人们视为抗体的替代品。近些年来,拉曼光谱逐渐走入大众视野,表面增强拉曼散射(Surface-enhanced Raman scattering,SERS)是一种特殊表面吸附分子将拉曼散射信号增强的现象,它作为新型病原检测的一种方式,hepatic steatosis相对Nirmatrelvir化学结构于原始的ELISA、LAMP、RT-PCR等检测方法,它具有快速、无需培养、自动化、高灵敏度的优势。该检测方法已广泛应用于检测领域。本课题研究内容如下:(1)H5N1亚型禽流感病毒特异性适配体的筛选与评价。通过磁珠SELEX筛选及核酸高通量测序分析等方法得到两条H5N1流感病毒核酸适配体,应用表面等离子共振技术检测2198号适配体和3498号适配体,亲和力分别为1.85e~(-9)和1.26e~(-9)。适配体作为ELISA二抗实现了对H5N1禽流感病毒的检测。将适配体偶联到磁珠上可以捕获H5N1禽流感病毒,实现对H5N1禽流感病毒的富集。(2)基于核酸适配体表面增强拉曼光谱技术快速检测H5N1亚型禽流感病毒方法的建立。筛选得到的两条针对H5N1亚型禽流感病毒具有良好的特异性和灵敏度的适配体,与购买R428磁珠偶联建立针对H5N1亚型禽流感病毒捕获体系,通过对捕获体系进行原位还原生成纳米银颗粒增强拉曼信号,建立了原位、快速、无损的H5N1亚型禽流感病毒拉曼光谱快速检测技术。本研究采用磁珠SELEX筛选技术,筛选出针对H5N1亚型禽流感病毒高特异性、强亲和力的两条适配体,为H5N1亚型禽流感病毒检测方法的建立奠定基础。应用适配体捕获建立H5N1亚型禽流感病毒拉曼光谱快速检测技术,该检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性。该方法发现H5N1亚型禽流感病毒在1058 cm~(-1)处有特异性拉曼峰谱,且最低检测限达到原病毒液稀释的10~(10)倍。利用本方法可在十分钟内快速检测出待测样本中是否有H5N1亚型禽流感病毒的存在,能够在大体积、低浓度样品中快速检测出目标病原,满足H5N1亚型禽流感病毒临场快检的需求,具有一定的发展前景。