在现代社会中,氧化应激严重威胁着人类的身体健康。从生物原料如胶原蛋白中提取的具有抗氧化活性的生物活性肽因其安全性高、活性强且易吸收、易获取等优势逐渐引起关注。鹿茸作为哺乳动物唯一可完全再生的器官,其生长十分迅速,可达到2cm/天,但其根部由于骨化严重,传统热炸法加工方式难以对其充分利用。研究表明鹿茸骨化组织胶原蛋白的含量十分丰富,且鹿源产品污染风险小、使用限制少。因此,鹿茸骨化组织是一种良好的生物活性肽来源。本研究以鹿茸骨化组织为原料,分别利用醋酸和胃蛋白酶制备胶原蛋白,随后选取中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对两种方法获得的胶原蛋白分别进行水解,以DPPH自由基清除率为指标,比较两种胶原蛋白酶解产物抗氧化性能差异并筛选最适蛋白酶。进一步利用单因素试验与响应面法优化酶解工艺并以超滤法和尺寸排阻色谱法分离纯化出抗氧化活性最强的胶原Cell Isolation肽,并检测胶原肽的氨基酸组成。实验结果表明,中性蛋白酶为最佳水解酶,并确定胃蛋白酶提取胶原蛋白作为胶原肽来源。优化获得最佳酶解工艺为酶用量3200U/g、酶解温度为52℃、p H为6.1、底物浓度为10%、酶解时间3h,此条件下酶解产物DPPH自由基清除率为73.41±0.48%。经分离纯化后获得抗氧化活性最强的鹿茸骨化组织胶原肽,其DPPH自由基清除率为90.58±1.27%。氨基酸组成分析表明该胶原肽中具有抗氧化能力的氨基酸占比较高。为进一步确定获得的鹿茸骨化组织胶原肽的抗氧化活性,在体外水平与细胞水平对其进行综合检测。体外水平主要检测了胶原肽对常见自由基的清除能力和对质粒DNA氧化损伤的保护能力,细胞水平检测了胶原肽对H_2O_2诱导的HaCaT细胞氧化损伤模型的影响。体外实验结果显示胶原肽的DPPH自由基清除率为90.66%,超氧阴离子自由基清除率为78.33%,ABTS自由基清除率为99.59%,羟基自由基清除率为83.34%,并对质粒DNA的氧化损伤具有selleckchem Colforsin保护能力。在细胞水平,胶原肽的预处理可显著抑制HaCaT细胞内ROS的积累以及脂质过氧化反应,提高Cselleck化学AT、SOD和GSH-Px等抗氧化酶的酶活力,保护HaCaT细胞免受氧化损伤并维持细胞活力。利用鹿茸骨化组织胶原肽作为核心原料设计面膜精华液、面霜、精华乳三款护肤化妆品,对其分别进行感官测试、稳定性检测、微生物检测、理化检测以及毒理学检测。结果证实三款化妆品肤感较好,稳定性达标,卫生度达标,重金属及有害物质含量符合《化妆品安全技术规范》且对皮肤无刺激性,最终成功获得三个国产非特殊用途化妆品备案文号。综上,本研究建立了具有较强抗氧化活性的鹿茸骨化组织胶原肽酶解工艺,并建立了基于超滤法及尺寸排阻色谱法的分离纯化工艺。在体外水平和细胞水平分别检测了鹿茸骨化组织胶原肽的抗氧化活性。同时设计出三款基于鹿茸骨化组织胶原肽的化妆品生产工艺,进行了化妆品的安全性检测并获得化妆品备案文号。为鹿茸产品的深度开发应用以及具有抗氧化能力的生物活性肽的开发和应用提供了新的思路。