青藤碱抑制PDGF/PDGFR信号通路在NETs诱导RA-FLS迁移作用中的机制研究

探究青藤碱抑制血小板衍生生长因子/血小板衍生生长因子受体（platelet-derived growth factor/platelet-derived growth factor receptor，PDGF/PDGFR）信号通路在中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs）诱导类风湿关节炎-成纤维样滑膜细胞（rheumatoid arthritis-fibroblast-like synoviocytes，RA-FLS）迁移作用中的相关机制。从3例selleck化学RA患者滑膜组织中分离培养RA-FLS；从4例RA患者和4例健康体检者GW-572016（healthy control，HC）外周静脉血中提取NETs。RA-FLS分为对照组、HC-NETs组、RA-NETs组、RA-NETs+青藤碱组、RA-NETs+青藤碱+CP-673451组，通过RNA测序（RNA-sequencing，RNA-seq）分析HC-NETs组、RA-NETs组细胞差异表达的基因，使用在线工具Sangerbox数据库进行基因本体论（Gene Ontology，GO）功能分析和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析，Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络，使用AutoDock Vina、PyMOL软件对青藤碱与PDGFβ、PDGFRβ作用靶点进行分子对接。通过cell counting kit-8（CCK-8）、划痕实验检测各组RA-FLS增殖、迁移能力，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PDGFRβ蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reactigenetic overlapon，qRT-PCR）检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）相关基因表达。结果显示，RA患者中性粒细胞更易产生NETs。与HC-NETs组相比，RA-NETs组PDGFβ、PDGFRβ表达上调；与对照组相比，RA-NETs组增殖能力、细胞迁移率、PDGFRβ蛋白、PDGFβ、PDGFRβ、MMP1、MMP3、MMP9 mRNA表达水平升高(P<0.05)；与RA-NETs组相比，RA-NETs+青藤碱组细胞增殖能力、细胞迁移率、PDGFRβ蛋白与mRNA表达水平，及MMP1、MMP3、MMP9 mRNA表达水平均降低(P<0.05)。与RA-NETs+青藤碱组相比，RA-NETs+青藤碱+CP-673451组细胞增殖能力减弱(P<0.05)。结果显示，青藤碱通过抑制PDGF/PDGFR信号通路降低RA-NETs诱导RA-FLS迁移能力，实现对RA的缓解效果。