【目的】自噬作为一种维持细胞稳态的重要机制,在包括胃癌在内的多种恶性肿瘤的发生、发展中扮演着重要角色。细胞自噬受到包括PI3K/AKT/MTOR通路在内的多种途径调控。课题组前期研究发现semaphorin 5A基因表达,通过ERK/MMP9、PI3K/Akt/u PA信号通路促进胃癌发生和发展。由此,我们推测semaphorin 5A可通过激活PI3K/Akt信号通路对细胞自噬产生影响。故本次研究以胃癌组织、胃癌细胞株为研究对象,明确semaphorin 5A基因表达与自噬抑制的相关性,为进一步研究胃癌发生、发展机制提供新的思路。【方法】1.从组织层面确立semaphorin 5A基因表达与自噬抑制的相关性。(1)收集胃癌及其癌旁组织标本,胃癌组织为实验组,癌旁组织为对照组。(2)采用免疫组化及q PCR的方法检测semaphorin 5A基因在组织中的表达。(3)免疫组化检测自噬相关蛋白的表达,分析自Crizotinib噬相关蛋白与临床标本细胞内semaphorin 5A基因表达的关系。(4)电镜下观察细胞内自噬小体,分析自噬小体数量与临床标本细胞内semaphorin 5A基因表达的关系。2serum biochemical changes.从细胞层面确立semaphorin 5A基因表达与自噬抑制的相关性(1)建立semaphorin 5A过表达、低表达AGS、7901细胞株。(2)Western blot检测细胞株内自噬标志蛋白Ⅰ/Ⅱ的转换、自噬相关蛋白BECLIN 1、P62的表达。(3)分析semaphorin 5A基因表达与自噬抑制的相关性。【结果】1.Semaphorin 5A在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,semaphorin 5A的表达与临床分期、淋巴结转移、分化程度有关。2.BECLIN 1、LC3在胃癌组织中阳性表达率低于癌旁组织,P62在胃癌组织中的表达高于癌旁组织。这三种自噬相关蛋白的表达与胃癌的临床分期相关。3.Semaphorin 5A与BECLIN 1、LC3在胃癌组织中的表达水平呈负相关,与P62在胃癌组织中的表达水平呈正相关,BECLIN 1与LC3在胃癌组织中的表达水平呈正相关。4.Semaphorin 5A阳性表达的胃癌组织中自噬小体数量少于semaphorinAMG510 5A阴性表达的胃癌组织。5.Semaphorin 5A敲低表达的胃癌细胞中,LC3Ⅱ、BECLIN 1蛋白表达水平升高,P62蛋白表达水平降低。【结论】1.在胃癌组织中,semaphorin 5A的表达与BECLIN 1、LC3的表达呈负相关,与P62的表达呈正相关;semaphorin 5A表达量增加,自噬小体数量降低。2.在胃癌细胞中,semaphorin 5A敲低表达降低LC3Ⅰ/Ⅱ的比例及P62的表达、上调BECLIN 1的表达。3.Semaphorin 5A在胃癌中的表达抑制细胞自噬。