益气祛湿方合并富血小板血浆治疗慢性难愈性创面的潜在分子机制的实验研究

目的 通过构建慢性难愈性创面大鼠模型,探讨黄枫教授益气祛湿方及富血小板血浆(PRP)干预对大鼠创面组织血管内Compound C分子式皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGFA)、血小板-内皮细胞粘附分子(Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)、白细胞介素-6(Interleukin 6,IL-6)、血小板衍生生长因子(Platelet derived growth factor, PDGF)因子表达及创面组织病理学变化的影响。方法 将36只SPF级12~14周龄雄性SD大鼠,适应性喂养1周后,按数字表法随机分为空白组、中药组、PRP组、中药+PRP组,每组各9只。均通过腹腔注射stz法构建慢性Suppressed immune defence难愈性创面大鼠模型。造模成功后,各组每天分别进行相应干预措施(空白组灌胃等量生理盐水作对照;中药组灌胃等量益气祛湿方制备的中药;PRP组局部创面注射或涂抹同源PRP;PRP+中药组灌胃等量中药及注射PRP),于术后3 d、7 d、15 d三个不同时间点观察创面外观愈合情况,分别选取创面周围组织标本,用于行病理切片HE和Masson染色观察软组织病理变化,采用Western-blotting检测创面组织VEGFA、CD31、IL-6、PDGF蛋白的表达水平,采用RT-PCR检测创面组织VEGFA、CD31、IL-6、PDGF基因的表达水平。结果 大鼠创面愈合评估,空白组随治疗时间递增未见明显愈合,PRP组及中药组随治疗时间递增可见创面少许愈合,PRP+Adezmapimod中药组随治疗时间递增可见创面明显缩小。HE和Masson染色下,空白组创面组织可见大量炎性细胞,组织结构紊乱无序,未见明显胶原纤维及血管细胞形成,Masson染色较浅;PRP组及中药组创面组织可见少许炎性细胞浸润,组织结构较整齐,可见部分胶原纤维及血管细胞形成;PRP+中药组创面组织可见少量炎性细胞,组织结构紧密有序,可见大量胶原纤维及血管细胞形成,Masson染色较深。在Western-blotting检测及RT-PCR检测中,各组第7、15天较同组第3天VEGFA、CD31、PDGF因子表达均有所升高,差异有统计学意义(P<0.05),第7天、15天较同组第3天IL-6因子表达均有所下降(P<0.05);在同一时间节点里PRP+中药组VEGFA、CD31、PDGF、IL-6因子表达最高,差异有统计学意义(P<0.05),空白组VEGFA、CD31、PDGF、IL-6因子表达最低,差异有统计学意义(P<0.05),PRP组及中药组因子表达介于前两组之间,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PRP注射及黄枫教授治疗CRW益气祛湿方的服用均可通过提高VEGFA、CD31、PDGF因子水平,降低IL-6因子水平促进慢性创面的修复愈合,且两者结合使用效果更优于单独干预。