目的:利用经长波紫外线(UMLN4924研究购买VA)和中波紫外线(UVB)联合照射建立的急性光损伤裸鼠模型,在组织和分子生物水平探究静脉血提取的注射型富血小板纤维蛋白(i-PRF)对急性光损伤的修复作用。方法:抽取SD大鼠下腔静脉血以3300 r/min×2 min进行离心,提取出i-PRF进行实验。细胞实验:通过CCK-8法检测对照组(DMEM高糖培养基)和实验组(DMEM+30%i-PRF培养基)中间充质干细胞、静脉内皮细胞、成纤维细胞的相对细胞活力,评估i-PRF对于间充质干细胞、静脉内皮细胞、成纤维细胞的增殖的影响。动物实验:将25只雄7周龄裸鼠随机分为5组,即(A)空白组:不做任何干预措施;(B)急性光损伤组:UVA和UVB联合照射诱导皮肤急性光损伤,之后不做任何处理;(C)预防注射生理盐水组:背部皮下预防性注射0.1ml生理盐水,再使用UVA和UVB联合照射诱导皮肤急性光损伤;(D)预防注射i-PRF组:背部皮下预防性注射0.1ml i-PRF,再使用UVA和UVB联合照射诱导皮肤急性光损伤;(E)治疗注射i-PRF组:使用UVA和UVB联照射诱导皮肤急性光损伤,再在背部皮下治疗性注射0.1ml i-PRF。组织和分子生物水平检测:釆用大体观测裸鼠背部皮肤受损范围及严重程度、流式活性氧(ROS)检测获取异硫氰酸荧光素(FITC)平均荧光强度值来检测皮肤组织细胞内ROS含量、HE染色观察表皮厚度来反映皮肤表皮反应性增生情况、改良Weigert弹力纤维染色检测组织中弹力纤维是否增生或者断裂、免疫组化染色分析增殖细胞核抗原(PCNA)表达率(反映细胞增殖能力)及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达阳性细胞百分比(说明细胞外基质的降解程度)等方式,评估i-PRF对于裸鼠急性光损伤皮肤的修复作用。结果:1.细胞增殖(CCK-8)实验结果显示,相比于对照组,实验组间充质干细胞、静脉内皮细胞及成纤维细胞的增殖活力均显著增加,p均<0.05。本部分结果证实,i-PRF可促进间充质干细胞、静脉内皮细selleck合成胞和成纤维细胞的分裂增殖。2.大体观测发现,UVA和UVB联合照射后,B组裸鼠背部暴露区域皮肤出现明显的红斑、瘀点瘀斑serious infections、水肿、皮屑、结痂,D、E组背部破损情况明显优于B、C组。与B、C组相比,D组裸鼠的皮损面积增高显著,p<0.05。本部分说明,i-PRF可以缩小皮肤受损范围,降低皮肤受损严重程度。3.流式ROS结果显示,与A组相比,B组FITC平均荧光强度值增高显著,p<0.05;与B组比,D、E组平均荧光强度值降低显著,p<0.05。本部分实验表明,i-PRF可降低组织细胞中ROS的含量。4.HE染色结果发现,与A组相比,B组裸鼠背部痂皮形成,表皮增厚,少量炎性细胞浸润,新生毛细血管形成。与B、C组相比,D、E组痂皮厚度下降,表皮厚度显著下降,炎症细胞浸润减少。测量各组裸鼠的表皮厚度结果为,与A组相比,B组的表皮厚度增厚显著,p<0.05;与B组比,D、E组裸鼠的表皮厚度变薄显著,p<0.05。本部分结果表明,i-PRF可以降低紫外线损伤引起的表皮增厚现象。5.改良Weigert弹力纤维染色结果证实,i-PRF处理后,真皮层内胶原纤维数量增多,弹力纤维平行于表皮,少部分形态断裂、变性;数量比A组少,但比B、C组多。各组染色组织平均弹性纤维评分结果为,B组的弹性纤维评分显著高于A组裸鼠,p<0.05;D、E组弹性纤维评分显著低于B、C组裸鼠,p<0.05。本部分结果证明,i-PRF可以减少真皮层的弹力纤维断裂、变性,促进真皮层胶原纤维增生。6.免疫组化分析显示,(1)PCNA表达为,各组裸鼠的PCNA表达率结果为,B组的PCNA表达率显著小于A组裸鼠,p<0.05;D、E组裸鼠的PCNA表达率大于B、C组裸鼠,p<0.05。此部分结果证实,i-PRF可以增加PCNA表达。(2)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达为,测量各组裸鼠的MMP-1阳性细胞百分比结果为,B组裸鼠MMP-1阳性细胞百分比显著大于A组,p<0.05;D、E组裸鼠的MMP-1阳性细胞百分比显著小于B、C组裸鼠,p<0.05。此部分结果证实,i-PRF可以降低MMP-1的含量。结论:细胞实验中,i-PRF可促进间充质干细胞、静脉内皮细胞和成纤维细胞的分裂增殖。动物实验中,i-PRF用于急性光损伤裸鼠皮下注射可:降低组织细胞内ROS的含量,减少真皮浅层弹力纤维的断裂变性,促进皮肤中组织细胞增殖,减少细胞外基质的降解从而促进皮肤修复。本课题为治疗注射i-PRF急性皮肤光损伤提供了基础实验证据。