目的 使用不同浓度消化酶制备大鼠膈肌单细胞悬液，筛选最佳消化酶浓度组合。方法 将胰蛋白酶稀释为0.125%、0.250%、0.375%、0.500%、0.625%，胶原酶Ⅰ型稀释为0.050%、0.100%、0.150%、0.200%、0.250%，胶原酶Ⅳ型稀释为0.050%、0.100%、0.150%、0.200%、0.250%，将三种消化酶按照浓度从低到高依次组合为五个浓度组，即胰蛋白酶0.125%+胶原酶Ⅰ0.050%+胶原酶Ⅳ0.050%、胰蛋白酶0.250%+胶原酶Ⅰ0.100%+胶原酶Ⅳ0.100%、胰蛋白酶0.375%+胶原酶Ⅰ0.150%+胶原酶Ⅳ0.150%、胰蛋白酶0.500%+胶原酶Ⅰ0.200%+胶原酶Ⅳ0.200%、胰蛋白酶0.625%+胶原酶Ⅰ0.250%+胶原酶Ⅳ0.250%。取SD大鼠新鲜膈肌组织，分成A、B、C、D、E组，采用机械—酶消化法制备膈肌单细胞悬液，分别加入上述五种浓度组合的消化酶进行消化；另设对照组，加入等量PBS。单细胞悬液经台盼Hepatitis A蓝染色，观察悬液中细胞的形态，计数活细胞数、死细胞数、此网站细胞团块数，计算细胞存活率和单细胞悬液浓度；经Anti-Rat CD11b PE标记后进行流式细胞术检测，获得目标细胞比值，比较各组检测结果。结果 A～E组获得的活细胞数分别为156.00×10~5、200.92×10~5、182.08×10~5、160.00×10~5、140.02×10~5/mL，细胞存活率分别为87.01%、90.02%、91.86%、90.75%、86.94%，单细胞悬液浓度分别为19.50×105、30.25×10~5、22.75×10~5、20.00×10~5、17.50×10~5/mL，均高于对照组（P均<0.05），其中B、C组活细胞数量和单细胞悬液浓度高于其他三组（P均<0.05）。经CD11b标记后，C组D11b阳性的中性粒细胞数、CD11b阳性细胞占活细胞的百分比均高于其他各组（P均<0.05）。结论 采用机械—酶消化法制备大鼠膈肌单细胞悬液，不同消化酶浓度组合均能获得优质的单细胞悬液，其中以胰蛋白酶0.375%+胶原Serine Protease抑制剂酶Ⅰ0.150%+胶原酶Ⅳ0.150%获得的单细胞悬液细胞存活率最高、死细胞数最少。