目的 探讨异丙酚预处理内皮细胞来源的外泌体(p-exo)对氧化应激诱导H9C2心肌细胞坏死凋亡的影响。方法 采用超高速离心法制备不同浓度异丙酚与人脐静脉内皮细胞(HUVECS)共孵育上清外泌体标准品,并通过透射电镜(TEM)、纳米颗粒示踪分析(NTA)及表面标志物CD63、CD9等蛋白E-616452供应商免疫印迹(WB)对外泌体进行结构分析鉴定。通过过氧化氢(H_2O_2),处理H9C2心肌细胞建立缺血再灌注氧化应激损伤模型,再用PKH67标记外泌体,采用激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取内化外泌体的过程,按照是否加入外泌体随机分为5组:对照组(NC)、H_2O_2处理组、H_2O_2处理后加入无异丙酚处理内皮细胞来源的外泌体(H_2O_2+nc-exo)、H_2O_2处理后加入异丙酚处理内皮细胞来源的外泌体组(H_2O_2+p-exo)及H_2O_2处理后加入异丙酚溶剂DMSO处理的内皮细胞来源的外泌体组(H_2O_2+d-exo)。外泌体处理后的细胞活性通GSK1349572过CCK-8试剂盒进行测定,同时采用透射电子显微镜观察细胞的损伤程度,细胞坏死性凋亡和相关蛋白的变化则通过Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)染色和Western Blot进行分析测定。结果 NTA示异丙酚处理p-exo浓度约2.54×10~(10) particles/mL,其形貌为双层膜囊泡,直径约为97 nm。与NC组相比,通过H_2O_2(500μmol/L)处理2 h后建立的H9C2心肌细胞缺血再灌注氧化应激损genetic stability伤模型中的心肌细胞活性显著降低(P <0.001)。而当引入15 μg/100 μL浓度p-exo后心肌细胞活性较前明显恢复(P <0.001),同时心肌细胞坏死性凋亡减少(P <0.01),受体相互作用蛋白(RIP)1(P <0.05)、RIP3(P <0.01)及混合谱系激酶结构域蛋白(mLKL)表达(P <0.01)降低,胞膜上p-mLKL蛋白表达降低(P <0.05)。结论 异丙酚处理HUVECS来源p-exo可以通过下调心肌细胞中坏死性凋亡蛋白RIP1、RIP3、mLKL及胞膜上p-mLKL蛋白表达来有效地减少氧化应激诱导的H9C2心肌细胞坏死凋亡。