皮肤衰老是由内源性老化和外源性损伤协同作用的一种自然生理过程,是机体衰老迹象的最直观表现。内源性老化的诱因主要包括活性氧自由基含量过多、细胞代谢失调、细胞凋亡加速、胶原蛋白含量降低等;外源性损伤的诱因主要包括紫外线照射、空气污染物、真菌和细菌的定植等;以上都是引起皮肤出现松弛、皱纹、老年斑的重要因素。随着各个交叉学科的快速发展,对皮肤衰老的认知已经推进到细胞和分子水平。目前人们对具有抗皮肤衰老功效的产品需求日益增长,怎样缓解皮肤衰老的进程已成为抗衰老领域的研究热点。近年来,肽类化合物因其稳定性好、毒副作用小等优势受到广泛关注,含肽的抗衰老制剂层出不穷,但是其是否能缓解皮肤衰老仍缺少科学依据。本论文以天然产物HZ肽为对象,研究其在皮肤细胞和分子水平上的抗衰作用,同时结合斑马鱼动物模型和人体功效评价,研究其抗皮肤衰老的功效和机制。本论文首先通过生化、细胞等一系列体外模型,从自由基清除、防止细菌增殖引起的炎症性老化、细胞生物相容性、抑制细胞活性氧积累等几个方面分析了HZ肽抗皮肤衰老的功效。通过体外生化实验,测定biopsy naïve了HZ肽对DPPH、羟基自由基以及超氧自由基三种自由基的清除能力,结果显示该肽在体外具有明显的清除自由基功能和抗氧化作用;利用抑菌圈法测定HZ肽对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌(Escherichia coli)的抑制能力,浓度为250μg/m L时对两种菌群的抑制效果最明显;然后利用CCK-8法检测HZ肽对人皮肤成纤维细胞(HFF-1)和人永生化角质形成细胞(Hacat)两种皮肤细胞的毒性作用,确定该肽无毒性;筛选优化使用过氧化氢(H_2O_2)构建细胞衰老模型的最佳作用浓度,接着利用DCFH-DA荧光染料处理细胞后,使用流式细胞仪测试Hacat细胞内活性氧自由基(ROS)的变化,确定了该肽能够有效地降低细胞内ROS的含量;最后在紫外线的刺激下,测定了HZ肽对斑马鱼尾鳍的保护作用,确定该肽对斑马鱼尾鳍有着较好的祛皱功效。在上述功效研究基础上,本论文深入研究了HZ肽抗皮肤衰老的作用机制。首先测定了对人成纤维细胞(HFF-1)中的Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达水平的影响,确定该肽对Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白基因的表达均有较明显的上调作用。又以Hacat细胞系构建细胞衰老模型,使用流式细胞术测定细胞在各个凋亡时期的比例,确定该肽在一定程度能够保护细胞的损伤;同时利用免疫印记分析(Western blotting)手段对凋亡蛋白通路进行了探索,发现该肽对促凋亡蛋白的表达均有比较明显的抑制效果;然后利用细菌内毒素(LPS)诱导细胞构建炎症模型,测定了该肽对细胞内促炎因子的分泌作用,确定了在不同作用浓度下,该肽对促炎细胞因子有着不同程度的调节作用。通过上述实验,揭示HZ肽具有缓解皮肤衰老的功效。为了进行产IACS-10759说明书品应用转化,设计制备了HZ肽抗衰老乳液,对其安全获悉更多性、稳定性、感官、人体功效等进行了评价,确定了该乳液符合安全标准,感官评价良好,具有补水保湿、提高弹性、改善皮肤皱纹和粗糙度的功效。综上,本论文研究了HZ肽延缓皮肤衰老的功效和机制,为后续开发该化合物为基础的抗皮肤衰老功效的系列护肤品提供了坚实的科学依据。