蛋白结合容量是层析介质的一项重要性能参数,增加介质的吸附容量可以有效提高分离效率。如何提高介质蛋白结合容量一直是人们关注的热点,其中增加介质的有效结合位点是一种提高蛋白结合容量的有效方法,本文将通过该方法改善肝素亲和层析介质的吸附容量。以大孔聚丙烯酸酯微球为基质,肝素为配基,利用席夫碱法制备肝素亲和层析介质。以醛基量为性能指标,考察了醛基化反应的各因素对醛基量的影响规律,建立了最优制备方法,所得醛基量为0.2092mmol/m L的醛基活化微球。以溶菌酶为模型蛋白,考察了肝素偶联反应的各因素对蛋白吸附容量的影响规律,建立了最优制备方法,所得亲和介质静态吸附容量可达40.3 mg/m L,比商品GP-肝素介质吸附容量高约36%,蛋白回收率达到95.6%。通过扫描电子显微镜表征微球表面形貌,观察到偶联肝素后的微球仍能保持其大孔结构。考察了该类亲和介质在不同保留时间下的动态吸附容量,在保留时间为0.5 min下,介质吸附容量与保留时间5 min相比仅下降12%左右。经10次重复使用后,介质动态吸附容量仍可保持初始容量的81%。用于分离混合蛋白模型中乳铁蛋白,结果表明具有良好的分离效果。为提高超大孔聚合物微球的吸附容量,提出采用接枝活化法和席夫碱法制备超大孔肝素亲和层析介质。使用三羟甲基丙烷三(3-巯基丙酸)酯偶联剂对微球进行了表面化学改性,制得了表面含有巯基的改性微球。改性微球表面的巯基与溶液中的过氧化苯甲酰(BPO)构成氧化-还原引发体系,单体甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)在改性微球表面引发接枝聚合反应,制得了表面接枝PGMA微球。为制得高接枝更多密度的微球,适宜的温度为60℃,BPO的用量为单体的1.25wt%,单体浓度为8 wt%,时间为8 hGalunisertib采购。接枝微球的环氧基密度为0.3623mmol/m L,比未接枝微球环氧基密度(0.0396 mmol/m L)提高了约10倍。通过傅里叶变换红外光谱分析微球化学组成,扫描电子显微镜表征微球结构,间接证明PGMA成功地接枝到聚合物微球上,且保持微球超大孔结构。接枝微球采用席夫碱法偶联肝素,制得了静态吸附容量为10.7 mg/m L的接枝型超大孔肝素亲和层介质,相比于非接枝型超大孔肝素亲和层析介质吸附容量提高了234%,蛋白回收率达到97.5%。接枝型超大孔肝素亲和层析介质对生物大分子传质速率快,在保留时间0.5 min下,动态吸附容量与保留时间5 min相比仅下降4%左右。经10次重Library Prep复使用后,介质动态吸附容量仍能达到初始容量的95%,表现出较好的稳定性。