鸡屎藤Paederia scandens(Lour.)Merr.,为茜草科鸡屎藤属草本植物鸡屎藤的全草,味甘、微苦,具有镇静、镇痛、抗惊厥、抗菌等多种药理作用。虽然关于鸡屎藤化学成分及药理作用的报道较多,但尚缺乏鸡屎藤抗炎镇痛药效物质基础及其机制的研究,极大限制了鸡屎藤在兽医临床中的使用。因此,本实验在优化鸡屎藤总环烯醚萜制备工艺基础上,分析其化学成分并进行了网络药理学研究,再采用分子对接方法推测主要的活性成分并进行体内验证,进一步评价活性成分对主要信号通路的影响,揭示活性成分抗炎镇痛的分子机制,为鸡屎藤在抗炎镇痛方面的临床应用奠定了理论基础。具体研究内容如下:(1)鸡屎藤总环烯醚萜提取工艺的优化。以鸡屎藤总环烯醚萜提取率为考察指标,在单因素试验基础上,采用三水平四变量的Box-Benken设计的响应面法对鸡屎藤总环烯醚萜提取工艺进行了优化。优化得到最佳提取工艺条件为温度88℃,乙醇浓度56%,料液比1:26,提取时间1.56 h,提取次数为3次。在此最优条件下重复三次试验,总环烯醚萜的提取率能达到21.83±0.41 mg/g,与预测值21.947 mg/g接近。(2)鸡屎藤总环烯醚萜富集工艺的优化。在最佳提取工艺的基础上用大孔树脂法对鸡屎藤总环烯醚萜的富集工艺进行了优化。选取10种大孔树脂考察吸附特性,静态吸附结果表明SP825大孔树脂最为适用。结合动态吸附结果,进一步对最佳富集条件进行优化,优化的吸附参数为:总环烯醚萜溶液初始浓度2.5 mg/m L,上样量2.91 BV,流速2 PD0325901BV/h。优化的解吸参数为:去离子水2 BV、70%乙醇5 BV,流速2 BV/h。根据最优条件对鸡屎藤总环烯醚萜进行富集后,将其含量提升了3.7倍,回收率为80.98%,结果表明SP825具有良好的富集鸡屎藤总环烯醚萜的能力,为鸡屎藤总环烯醚萜的制备提供了理论基础。(3)富集前后鸡屎藤提取物抗炎镇痛活性试验。利用二甲苯致小鼠耳肿胀炎症模型、角叉莱胶致小鼠足肿胀炎症模型,热板试验、醋酸扭体试验、福尔马林试验,对富集前后鸡屎藤抗炎镇痛活性进行研究,结果证实富集后的鸡屎藤提取物抗炎镇痛效果要好于富集前,且呈剂量依赖性。(4)液质联用技术结合网络药理学探讨作用机制。利用UPLC-ESI-MS对富集后鸡屎藤提取物进行化学成分鉴定,共鉴别出18种化学成分。利用网络药理学方法对18种化学成分和炎症、疼痛疾病靶点进行分析。结果表明鸡屎藤抗炎镇痛作用发挥的核心靶点分别有SYK、TNF、COX-2和IL-6,KEGG富集出主要相关通路为C型凝集素受体信号通路。再利用分子对接技术对这18种可能的活性成分与核心靶点的结合效果进行分析,结果表明鸡屎藤苷酸的结合效果最好,推测其是起到抗炎镇痛作用的主要化学成分。(5)成分分离及预测结果验证。利用上述活性试验以及q RT-PCR、Western blot对从鸡屎藤中分离出的鸡屎藤苷酸进行抗炎镇痛活性及其作用机制的验证,结果表明鸡屎藤苷酸具有良好的抗炎镇痛活性,并可通过抑制DECTIN-1、SYK、COX-2、IL-6、TNF-α的m RNA表达,以及DECTIN-1、SYK、P65、COX-2的蛋白表达起到抗BI 10773体外炎镇痛的作用。与网络药理学预测结果一致。本研究不仅确定了鸡屎藤抗炎镇痛的主要有效成分,还对其治疗机制进行了探讨,为鸡屎藤有效成分体内药动学、药代学的研究提供了前Anteromedial bundle提,也为鸡屎藤质量控制方法的建立奠定了基础,为中药现代化做了有意义的探索。