目的:从表观遗传学角度探讨索拉非尼(Sorafenib,Sora)治疗肝细胞癌时发生耐药的机制;考察联用表观遗传药物地西他滨(Decitabine,DAC)后,索拉非尼对肝细胞癌的敏感作用的影响,为肝癌的临床治疗提供新的思路与方法。方法:1.利用GEPIA 2数据库检索508例原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者的临床信息,通过Kaplan-Meier法,分析不同癌症及其癌旁组织中有机阴离子转运多肽1B3(organic anion transporting polypeptide 1B3,OATP1B3)的表达差异;分析HCC中OATP1B3表达与患者生存时间的相关性;2.采用RT-qPCR,Western Blot检测不同肝癌细胞株Hep3B、HepG2、SNU182、SNU387、HUH7和LM3中OATP1B3 mRNA和蛋白表达水平;3.采用亚硫酸氢盐甲基化法检测Hep3B、HepG2、SNU182和SNU387细胞中OATP1B3启动子的甲基化水平;4.采用RT-qPCR,Western Blot检测DNA甲基转移酶抑制剂DAC作用Hep3B、HepG2后对OATP1B3表达的影响;5.采用RTCA-e Sight动态监测Sorafenib与DAgenetic serviceC联用(以下简称:联用组)对Hep3B、HepG2细胞增殖的影响;6.采用LC-MS/MS检测Sorafenib与DAC联用后Hep3B、HepG2细胞对Sorafenib摄入量的变化;7.采用MTS检测与SorafeniFUT-175分子式b单独给药相比,DAC联用组Hep3B,HepG2存活率的变化及DAC联合用药后Sorafenib的IC50的变化;8.采用流式细胞技术检测各组脂质过氧化物含量变化,验证联用DAC后是否可显著增强Sorafenib诱导的细胞铁死亡效应;9.利用Hep3B肝癌荷瘤鼠模型,待肿瘤长至100mm3左右,将荷瘤小鼠随机分为Control组、DAC组、Sorafenib组、DAC+Sorafenib组。分别给予DAC(2.5mg/kg,腹腔注射)、Sora(20mg/kg,灌胃给药)或PBS溶液,给药后定期测量肿瘤的大小和裸鼠的体重。实验结束后,处死动物,采集组织样本进行RT-qPCR、Western Blot、免疫组化等分析。结果:1.GEPIA2数据库分析结果显示,肝癌与其癌旁组织中OATP1B3表达量相差较大;OATP1B3高表达的HCC患者总体生存率均显著高于低表达者;2.RT-qPCR,Western Blot实验结果均显示Hep3B、HepG2、SNU182和SNU387中OATP1B3的表达相对较低,选择这四种细胞进行甲基化率测定;3.亚硫酸氢盐甲基化测序结果显示Hep3B和HepG2中SLCO1B3的启动子甲基化率较高,后续实验选择Hep3B和HepG2进行探索;4.RT-qPCR、Western Blot结果表明,肝癌细胞株Hep3B、HepG2中SLCO1B3的mRNA及蛋白表达相对较低,且DAC孵育后OATP1B3的表达均上调;5.RTCA-e Sight实验结果显示,联用DAC后Hep3B,HepG2的增殖率显著低于Sorafenib组;6.LC-MS/MS结果显示,联用DAC后,Hep3B,HepG2对Sorafenib的摄入量分别提高了1.87倍、2.47倍;7.MTS结果表明,与Sorafenib单独给药相比,联用组的Hep3B,HepG2存活率均显著降低,联合用药后Sorafenib的IC50显著减小;8.流式细胞技术显示,DAC联用组脂质过氧化物的水平显著高于单用sorafenib组,DAC联用后显著增强Sorafenib诱导的细胞铁死亡;9.Hep3B荷瘤小鼠模型结果显示,给药21天后,联用组肿瘤体积均明显小于单用Sorafenib组、DAC组和Control组。RT-qPCR、Western BlTezacaftor说明书ot结果表明,联用组、DAC组OATP1B3的表达均明显高于Control组和Sorafenib组;同样,免疫组化结果显示,联用组、DAC组OATP1B3的表达均明显高于Control组和Sorafenib组。结论:表观遗传药物DAC可通过抑制SLCO1B3的DNA甲基化,上调介导Sorafenib跨膜转运OATP1B3的表达,提高Sorafenib在肝癌细胞中的暴露水平,增强对肝癌细胞的敏感性,从而逆转Sorafenib的耐药。