目的:近年来,甲基苯丙胺(冰毒)已取代海洛因,成为我国滥用人数最多的毒品,其致幻性、成瘾性强,复吸率高,严重危害公共安全和社会稳定。南宝戒毒清胶囊系湖南省邵阳市中医戒毒研究所的医疗机构制剂,前期临床研究发tunable biosensors现,其对气阴两虚、毒瘀蕴结型甲基苯丙胺戒断综合征具有良好的治疗效果,但其化学物质基础及药理作用机制尚不明确。因此本研究运用现代分析技术与手段,对胶囊主要化学成分与大鼠入血原型成分进行检测和解析,同时建立甲基苯丙胺依赖大鼠模型,对南宝戒毒清胶囊疗效进行评价,探索其可能作用机制,以期为临床科学用药提供实验证据,为创新药物研发提供新的思路,为甲基苯丙胺类药物依赖治疗提供研究策略。方法:1.采用UPLC-Q-TOF/MS技术,选择UPLC HSS T3(2.1×100 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,分别在正负离子模式下利用质谱分析对样品进行检测,收集并分析质谱信息,结合数据库、文献信息和化合物质谱碎片信息,对南宝戒毒清胶囊的药物化学成分和大鼠入血原型成分进行定性分析鉴定。2.SD大鼠连续腹腔注射METH(20mg/kg)造模14天,建立METH依赖大鼠模型,然后给予南宝戒毒清胶囊(1.62g/kg、3.23g/kg、6.48g/kg)治疗14天考察其药效作用。以CPP、自主活动、刻板行为评价行为学变化;采用ELISA法检测血清中DA、5-HT含量变化;运用HE染色法观Enasidenib察海马区域细胞形态变化;通过IHC法分析海马区域DRD1、5-HTR1A受体表达变化。3.采用UPLC-Q-TOF/MS技术结合非靶向代谢组学,检测各组大鼠血清代谢物的变化,通过PCA分析、PLS-DA分析、OPLS-DA分析等多元统计方法,分析血清差异内源性代谢物的变化,寻找潜在生物标志物,通过Metabo Analyst网站对筛选到的差异代谢物进行预测,筛选出差异代谢通路。4.采用16S r RNA基因测序技术检测大鼠肠道菌群变化,通过α多样性、β多样性、LEf Se分析来探讨肠道菌群结构的变化,通过PICRUSt功能预测软件对肠道菌群可能影响的通路进行预测。结果:1.成分分析:体外识别出南宝戒毒清胶囊中黄酮类、皂苷类、生物碱类等254种成分,人参61种、黄芪60种、钩藤21种、延胡索21种、制川乌和制草乌共18种,甘草19种;随后在大鼠给药血浆样本中捕捉到87个入血原型成分,主要来源于钩藤(15种)、人参(14种)、黄芪(12种)、甘草(12种)、延胡索(12种)、制川乌和制草乌(8种)等,包括苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、新乌头原碱等制川乌或制草乌中的醇胺型乌头碱类成分;紫堇碱、左旋四氢巴马汀、海罂粟碱等延胡索中原小檗碱类成分;钩藤碱、缝籽嗪甲醚、柯诺辛碱等钩藤中生物碱类成分;拟人参皂苷元、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb3等人参中皂苷类成分;甘草酸、甘草苷、甘草皂苷G2等甘草中三萜类。2.药效学评价:与正常组相比,METH大鼠体重降低,伴药箱停留时间、自主活动次数、刻板行为评分均增加,血清中DA、5-HT水平升高,锥体细胞数目减少、细胞形态不规则、细胞固缩深染,海马区域DRD1受体表达降低、5-HTR1A受体表达升高;与模型组比较,给药组大鼠体重增加,伴药箱停留时间、自主活动次数、刻板行为评分均减少,血清中DA、5-HT水平升高,锥体细胞数目增多、细胞形态完整、未见细胞固缩,海马区域DRD1受体、5-HTR1A受体表达均升高。3.非靶向代谢组学:筛选鉴定出METH成瘾大鼠血浆中8种差异内源性代谢物(VIP>1,P<0.05),可作为METH成瘾的潜在生物标志物,与正常组比较,模型组血浆中鹅肌肽、组氨酸、孕烯醇酮、3-甲基组氨酸含量上升,左旋多巴、1,5-酐-D-山梨糖醇、蜜二糖、β-咔啉含量下降,差异代谢物主要富集通路为可卡因成瘾、苯丙胺成瘾、组氨酸代谢等。筛选鉴定出南宝戒毒清胶囊干预后大鼠血清中26种差异内源性代谢物(VIP>1,P<0.05),可作为南宝戒毒清胶囊干预METH依赖的潜在生物标志物,与模型组比较,南宝戒毒清胶囊高剂量组血浆中N-乙酰组胺、L-酪氨酸、左旋多巴、多巴胺、组氨酸等含量上升,棕榈酰肉碱、烟酰胺、高精氨酸等BIBW2992细胞培养含量下降,差异代谢物主要富集通路为苯丙胺成瘾、帕金森疾病、酪氨酸代谢等。4.肠道菌群研究:α-多样性分析和β-多样性分析结果表明,METH模型组与南宝戒毒清胶囊给药组之间肠道菌群丰富度和多样性无显著性差异。肠道菌群物种相对丰度分析发现,在属水平上,与空白组比较,模型组有29个菌群丰度降低,20个菌群丰度增加,高剂量组能回调模型组下调的11个菌群和上调的13个菌群,主要调节作用表现在上调拟杆菌门(Bacteroidota)-另枝菌属(Alistipes)、普雷沃氏菌属(Prevotella),厚壁菌门(Firmicutes)-Allobaculum、Butyricicoccus、Defluviitalea,变形菌门(Proteobacteria)-志贺菌属(Shigella),下调厚壁菌门(Firmicutes)-多尔氏菌属(Dorea)、考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)、乳球菌属(Lactococcus)。LEf Se分析结果显示,拟杆菌门(Bacteroidetes)-巴恩斯氏菌科(Barnesiellaceae)-巴氏杆菌属(Barnesiella)、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)-普雷沃氏菌属(Prevotella)在高剂量组中显著富集,厚壁菌门(Firmicutes)-消化球菌科(Peptostreptococcaceae)、拟杆菌门(Bacteroidetes)-帕拉普氏菌科(Paraprevotellaceae)在含药组中显著富集。KEGG功能预测分析发现,差异菌群参与了细胞生长和死亡、遗传信息复制修复转录、碳水化合物代谢等生物过程,涉及神经系统、消化系统、内分泌系统等。代谢通路差异分析结果显示,模型组与空白组无差异,与模型组比较,高剂量组的类胡萝卜素生物合成、帕金森疾病、D-精氨酸和D-鸟氨酸代谢、氟苯甲酸酯降解共4个通路下调,戊糖磷酸途径、ABC运输体、果糖和甘露糖代谢、倍半萜生物合成等共19个通路上调。结论:1.苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、钩藤碱、20(S)原人参三醇、20(S)原人参二醇、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb3、5-O-甲基维斯阿米醇苷、斯皮诺素、汉黄芩素、隐丹参酮、甘草苷等可能为南宝戒毒清胶囊的药效物质。2.南宝戒毒清胶囊可通过增加DA、5-HT含量,增加DRD1、5-HTR1A受体表达,缓解METH戒断综合征,修复海马区域损伤神经细胞,恢复记忆、认知障碍,从而发挥干预METH依赖的作用。3.组氨酸、组胺、N-乙酰组胺、3-甲基组氨酸、鹅肌肽可作为METH成瘾的潜在生物标志物,组胺可作为治疗METH成瘾的潜在作用靶点。南宝戒毒清胶囊通过苯丙胺成瘾、帕金森疾病、酪氨酸代谢等途径发挥干预作用。4.南宝戒毒清胶囊干预METH依赖的肠道微生物关键族群包括拟杆菌目-巴恩斯氏菌科、普雷沃氏菌科、帕拉普氏菌科和梭菌目-消化球菌科等,差异菌群可能通过帕金森病、D-精氨酸和D-鸟氨酸代谢、ABC运输体等通路发挥作用。