多年来,养殖场通常会在育雏阶段给肉鸡适时饲喂一些开口药,以期起到减轻应激、预防腹泻和提高成活率的作用。氟苯尼考(florfenicol,FFC)是肉鸡养殖场中使用率最高的开口药之一。近年来,已有众多研究学者大量报道,氟苯尼考对多种动物的机体和组织器官均可产生一定的毒副作用。但是,关于早期应用氟苯尼考对不同生长阶段肉鸡的机体尤其肾脏的损伤仍鲜有明确的研究报道。中药多糖对多种类型的肾脏损伤具有明显的干预作用,其丰富的药效活性可以有效预防或减缓肾脏疾病的发生和发展。丹参多糖(Salvia miltiorrhiza polysaccharides,SMPs)是中药丹参中含量较高的活性成分,在丹参药材中发挥着重要的药理功效,具有很高的临床应用价值和良好的市场应用前景。已有研究表明,丹参多糖还能够发挥保护动物多种组织器官的药理作用。然而,目前关于早期应用丹参多糖对肉鸡肾脏保护效果的研究尚不深入。本试验以氟苯尼考作为兽用抗生素类药物的代表,重点研究其作为雏鸡开口药对不同生长阶段肉鸡肾脏功能和生长性能的影响作用及其机制,并依据中兽医学“未病先防”的理念,重点探究早期应用丹参多糖对氟苯尼考致肉鸡肾脏功能损伤的缓解效果与作用途径。1.氟苯尼考开口对肉鸡肾脏功能和生长性能的影响作用研究:将300只健康的1日龄肉鸡随机平均分为6组,即空白对照组(GP1),每天给予正常的自来水;0.15 g/L(GP2)、0.3 g/L(GP3)、0.6 g/L(GP4)、1.2 g/L(GP5)和1.8 g/L(GP6)氟苯尼考组,分别给予含0.15 g/L(临床推荐治疗剂量)、0.3 g/L、0.6 g/L、1.2 g/L和1.8 g/L氟苯尼考的自来水。除空白对照组外,其余各组从1日龄开始,连续给药5 d。于试验第6、21和42天,分别从每组中随机选取15只肉鸡,采血,摘取肾脏,并检测指标。结果显示,与空白对照组比较,试验第6和21天,各剂量氟苯尼考组肉鸡的平均增重均显著降低(P<0.05或P<0.01),肾脏指数和血清中UA、BUN和CRE的含量均显著提高(P<0.05或P<0.01),并造成了肾脏组织结构和细胞形态的紊乱;试验第42天,低剂量氟苯尼考组肉鸡的平均增重、肾脏指数、血清肾功能指标和肾脏组织和细胞结构趋于正常,而高剂量氟苯尼考组肉鸡仍表现出明显的异常状态。研究表明,0.15-1.8g/L氟苯尼考的早期暴露均能抑制幼龄肉鸡的生长发育和引发肾脏功能的异常;随着肉鸡的生长,低剂量氟苯尼考对其生长发育和肾脏功能的影响作用有所减轻,然而0.6 g/L及以上剂量的损伤作用仍然显著。2.氟苯尼考开口致肉鸡肾脏损伤的作用机制研究:动物的分组与处理同上述试验,采集各组肉鸡肾脏组织样品,并检测肾脏中与氧化、炎症和细胞凋亡相关的指标。结果显示:氟苯尼考用药组肉鸡肾脏组织中MDA、IL-2、IFN-y和CXCL-10的含量,p65、IL-2和IFN-γ mRNA 的相对表达水平,p53、Caspase-3、Caspase-6 mRNA和蛋白的表达水平以及肾脏组织细胞的凋亡率均显著升高(P<Crizotinib抑制剂0.05或P<0.01);然而,肾脏组织中GSH、SOD和CAT的水平,Nrf2、HO-1和NQO-1mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。研究表明:早期氟苯尼考暴露可通过降低抗氧化能力,激发炎症反应和造成组织细胞凋亡,进而诱导肉鸡肾脏损伤。并且,氟苯尼考的肾毒性具有明显anatomical pathology的剂量依赖性,同时随着肉鸡日龄的增长表现出一定的可逆性。3.丹参多糖对氟苯尼考开口雏鸡肾脏损伤和生长抑制的影响作用研究:将300只健康的1日龄肉鸡随机平均分为6组,即空白对照组(GPA),每天给予正常的自来水;氟苯尼考组(GPB),给予含0.15 g/L氟苯尼考的自来水;氟苯尼考+低(GPC)、中(GPD)、高剂量(GPE)丹参多糖组,分别给予含0.15 g/L氟苯尼考和1.25 g/L、2.5 g/L、5g/L丹参多糖的自来水;丹参多糖对照组(GPF),给予含5g/L丹参多糖的自来水。除空白对照组外,其他各组从1日龄开始,连续5 d给予相关药物。采集各组肉鸡的血清和肾脏组织样品,检测指标。结果显示,试验第6、21和42天时,相较于空白对照组,氟苯尼考组肉鸡的平均增重极显著降低(P<0.01),血清中UA、BUN和CRE的含量显著升高(P<0.05或P<0.01),肾脏组织结构和细胞形态发生明显异常;与氟苯尼考组比较,中、高剂量丹参多糖组肉鸡的平均增重显著提高(P<0.05或P<0.01),血清中UA、BUN和CRE的含量显著降低(P<0.05或P<0.01),肾脏组织结构和细胞形态病变明显减轻。试验第6天时,与空白对照组相比,氟苯尼考组雏鸡肾脏组织中MDA、IL-2、IFN-γ和CXCL-10的含量,COX-2和iNOS的表达水平,MyD88、p65、IL-2 和 IFN-γ mRNA 的相对表达水平,p53、Caspase-3、Caspase-6 mRNA和蛋白的表达水平以及肾脏组织细胞的凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01);然而,肾脏组织中GSH、SOD和CAT的水平,Nrf2、HO-1、NQO-1 mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);肾小球内皮细胞和肾小管上皮细胞的超微结构也异常获悉更多改变。试验第6天时,与氟苯尼考组比较,氟苯尼考+低剂量丹参多糖组雏鸡肾脏的损伤情况仍然比较明显,而氟苯尼考+中、高剂量丹参多糖组肉鸡肾脏组织中脂质过氧化、炎症、凋亡相关指标以及细胞超微结构均有了显著的改善,有的趋于正常。丹参多糖对照组肉鸡平均增重显著高于空白对照组(P<0.05或P<0.01),其他各项指标也均正常。研究表明:中、高剂量丹参多糖可以有效缓解早期氟苯尼考暴露诱导的肉鸡肾脏损伤和生长抑制,其作用机制与提高肾脏抗氧化能力、控制炎症反应和抑制肾脏组织细胞凋亡有关。综上所述,氟苯尼考作为开口药能够降低肉鸡的生长性能,并导致肉鸡肾脏组织受损。氟苯尼考引起肾脏损伤的机制与其能够显著抑制Nrf2抗氧化信号通路,降低机体抗氧化能力;激活MyD88/NF-κB炎症信号通路,引发炎症反应;以及诱导凋亡相关因子基因和蛋白的表达,造成肾脏组织细胞的异常凋亡密切相关。与此同时,2.5 g/L和5 g/L丹参多糖则可通过提高肾脏的抗氧化能力,控制炎症反应和抑制肾脏组织细胞异常凋亡,进而缓解药物性肾脏损伤,提高肉鸡生长性能。本研究对以氟苯尼考为代表的兽用抗生素作为雏鸡开口药的合理使用具有指导意义,同时还有利于促进安全有效的中兽药在肉鸡养殖行业的推广应用。