Ⅱ型固有淋巴细胞在铜绿假单胞菌侵染的小鼠模型中的作用

目的:本研究旨在探究外源性Ⅱ型固有淋巴细胞(Type 2 innate lymphoid cells,ILC2)对炎症、免疫、组织修复中的作用,为阐明其作用及实现细胞治疗相关疾病提供理论支持。方法:1、通过腹腔注射白细胞介素33(Interleukin-33,IL-33)富集physiological stress biomarkersILC2,后利用磁珠筛选ILC2,利用流式细胞术进行流式检测,判断筛选效率。2、通过滴鼻和气道滴注的方法构建小鼠铜绿假单胞菌(Pseudomonas selleckchem EPZ-6438aeruginosa,PA)肺部感染模型,肺泡灌洗液涂片观察肺泡灌洗液中中性粒细胞数量、利用ELISA检测试剂盒检测不同血清炎症因子的表达、利用实时定量PCR技术检测肺组织炎症因子表达、肺组织HE染色观察肺组织损伤情况、肺组织及肺泡灌洗液涂板观察肺部载菌量等来评估铜绿假单胞菌侵染的小鼠肺炎模型是否成功建立。3、将筛选出的ILC2通过尾静脉回输到细菌感染6h后的小鼠体内,分为三组:铜绿模型组、生理盐水回输组、ILC2回输组,48h后取材,通过肺泡灌洗液涂片观察肺泡灌洗液中中性粒细胞数量、利用ELISA检测试剂盒检测血清炎症因子IL-6的表达、通过肺组织HE染色观察肺部病变情况。结果:1、通过磁珠成功筛选出ILC2。2、通过气道滴注的方式成功建立铜绿假单胞菌小鼠肺部感染模型。3、肺泡灌洗液涂片结果显示ILC2回输组的中性粒细胞显著减少,差异具有统计学意义(P<0.001)。4、血清炎症因子IL-6结果显示ILC2回输组的IL-6表达最低,差异具有统计学意义(P<0.01)。5、肺组织HE结果均显示ILC2回输组的肺组织损伤明显减轻。结论PLX4032浓度:1、通过腹腔注射IL-33的方式富集ILC2,后利用磁珠分选,可以得到纯度较高的ILC2,可直接用于细胞回输;2、通过滴鼻和气道滴注的方式对小鼠进行菌液定植可有效建立小鼠肺部感染模型,本实验中气道滴注细菌方式诱导的小鼠肺部感染模型优于滴鼻方式;3、尾静脉回输ILC2可有效减轻铜绿假单胞菌感染导致的小鼠肺部炎症反应与组织损伤。